论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 绪论 | 第10-14页 |
| 1 心脏干细胞研究现状 | 第10-11页 |
| 2 TGF-β信号通路在心脏干细胞分化过程中的作用 | 第11-14页 |
| 第一部分 c-kit~+心脏干细胞的分离、培养和鉴定 | 第14-29页 |
| 1 背景介绍 | 第14-17页 |
| 2 材料与仪器 | 第17-19页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.2 仪器 | 第18-19页 |
| 2.3 试剂配制 | 第19页 |
| 3 实验方法 | 第19-23页 |
| 3.1 c-kit~+心脏干细胞的体外分离、培养 | 第19-20页 |
| 3.2 c-kit~+心脏干细胞的传代 | 第20页 |
| 3.3 BD FACS Aria流式细胞仪无菌分选c-kit~+CSCs | 第20-22页 |
| 3.4 免疫荧光鉴定c-kit~+CSCs细胞表型 | 第22页 |
| 3.5 细胞免疫荧光鉴定c-kit~+CSCs分化能力 | 第22-23页 |
| 3.6 统计学分析 | 第23页 |
| 4 结果 | 第23-26页 |
| 4.1 心脏干细胞形态学观察 | 第23页 |
| 4.2 流式分选结果 | 第23-25页 |
| 4.3 免疫荧光鉴定 | 第25-26页 |
| 5 讨论 | 第26-29页 |
| 第二部分 TGF-β/TRAF6在AngⅡ诱导c-kit~+CSCs分化过程中的作用 | 第29-51页 |
| 1 背景介绍 | 第29-33页 |
| 2 材料与仪器 | 第33-37页 |
| 2.1 材料 | 第33-35页 |
| 2.2 仪器 | 第35-36页 |
| 2.3 试剂配制 | 第36-37页 |
| 3 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.1 Westernblot检测TGF-β信号通路下游蛋白表达 | 第37-40页 |
| 3.2 Oligofectamine?转染及TRAF6-siRNA沉默效率检测 | 第40-41页 |
| 3.3 TRAF6-siRNA救援实验 | 第41-42页 |
| 3.4 统计学分析 | 第42页 |
| 4 结果 | 第42-46页 |
| 4.1 SB431542 调控AngII诱导的c-kit~+CSCs分化 | 第42-43页 |
| 4.2 Oligofectamine?介导siRNA转染沉默TRAF6 基因 | 第43-44页 |
| 4.3 SB431542对c-kit~+CSCs心肌特异性蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| 4.4 TRAF6-siRNA对 AngⅡ介导的MAPKs蛋白磷酸化的影响 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-51页 |
| 第三部分 pShuttle-CMV-eGFP-TRAF6 病毒载体的构建 | 第51-90页 |
| 1 背景介绍 | 第51-53页 |
| 2 材料与仪器 | 第51-58页 |
| 2.1 材料 | 第51-55页 |
| 2.2 仪器 | 第55-56页 |
| 2.3 菌株与载体、包装细胞 | 第56页 |
| 2.4 试剂配制 | 第56-58页 |
| 3 实验方法 | 第58-82页 |
| 3.1 载体及目的基因信息 | 第58-62页 |
| 3.2 TRAF6 引物设计 | 第62-66页 |
| 3.3 酶切鉴定 | 第66-71页 |
| 3.4 重组腺病毒TRAF6 腺病毒的生产与纯化实验流程 | 第71-73页 |
| 3.5 TRAF6 腺病毒检验 | 第73-82页 |
| 3.6 统计学分析 | 第82页 |
| 4 结果 | 第82-85页 |
| 4.1 腺病毒转染效率检测 | 第82-84页 |
| 4.2 qPCR检测和Western Blot检测TRAF6 腺病毒过表达效率 | 第84-85页 |
| 5 讨论 | 第85-90页 |
| 第四部分 TRAF6 泛素化参与AngⅡ诱导的CSCs分化及其机制 | 第90-114页 |
| 1 背景介绍 | 第90-93页 |
| 2 材料与仪器 | 第93-97页 |
| 2.1 材料 | 第93-95页 |
| 2.2 仪器 | 第95-96页 |
| 2.3 试剂配制 | 第96-97页 |
| 3 实验方法 | 第97-106页 |
| 3.1 非竞争性ELISA测定FLAG标签与单抗M2(1B10)亲和常数 | 第97-100页 |
| 3.2 IP检测AngⅡ对TRAF6 泛素化及其与TβRⅠ/Ⅱ相互作用 | 第100-101页 |
| 3.3 Western blot检测FLAG-Smad2、FLAG-P38和HA-JNK表达 | 第101-106页 |
| 3.4 统计学分析 | 第106页 |
| 4 结果 | 第106-111页 |
| 4.1 确定最佳FLAG融合蛋白包板浓度 | 第106页 |
| 4.2 确定FLAG融合蛋白最佳包板时间 | 第106页 |
| 4.3 确定最佳抗原抗体结合反应时间 | 第106-107页 |
| 4.4 重组FLAG标签与M2 单抗相互作用的亲和常数 | 第107页 |
| 4.5 TRAF6 泛素化及其与TβRⅠ/Ⅱ的相互作用 | 第107-108页 |
| 4.6 Western blot检测FLAG-Smad2、FLAG-P38和HA-JNK表达及MAPKs的磷酸化 | 第108-110页 |
| 4.7 TRAF6 介导的c-kit~+CSCs分化过程中Wnt家族蛋白和心肌特异性蛋白表达的变化 | 第110-111页 |
| 5 讨论 | 第111-114页 |
| 结论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 一、论著 | 第124页 |
| 二、获得的荣誉和奖励 | 第124页 |
