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毕赤酵母核糖体蛋白功能及对外源蛋白合成的调控

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毕赤酵母核糖体蛋白功能及对外源蛋白合成的调控
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-7页
英文缩略词表第12-13页
第一章 绪论第13-32页
    1.1 毕赤酵母表达体系概述第13-21页
        1.1.1 毕赤酵母简介第13页
        1.1.2 毕赤酵母表达外源蛋白的优势第13-14页
        1.1.3 毕赤酵母高效合成外源蛋白的主要策略第14-19页
        1.1.4 毕赤酵母存在的问题及可能的解决方案第19-21页
    1.2 真核生物蛋白质合成的翻译调控第21-26页
        1.2.1 真核生物翻译周期简介第21-22页
        1.2.2 真核生物翻译起始效率的测定第22-23页
        1.2.3 翻译延伸影响蛋白质共翻译折叠第23-25页
        1.2.4 共翻译折叠相关的分子伴侣网络简介第25-26页
    1.3 核糖体合成与核糖体蛋白功能第26-29页
        1.3.1 酵母核糖体合成调控与组装第26-27页
        1.3.2 核糖体蛋白功能第27-28页
        1.3.3 核糖体蛋白与细胞压力响应的关系第28-29页
    1.4 本课题的研究意义及主要研究内容第29-32页
        1.4.1 本课题的研究意义第29-30页
        1.4.2 本课题的主要研究内容第30-32页
第二章 核糖体蛋白缺陷菌株库构建及其对外源蛋白合成调控分析第32-81页
    2.1 引言第32-33页
    2.2 材料与设备第33-51页
        2.2.1 菌株、质粒和引物第33-44页
        2.2.2 主要仪器与设备第44-45页
        2.2.3 主要试剂第45-48页
        2.2.4 培养基与溶液第48-51页
    2.3 实验方法第51-64页
        2.3.1 基因敲除方法第51-53页
        2.3.2 外源蛋白表达及检测第53-56页
        2.3.3 核糖体蛋白回补菌株构建第56-59页
        2.3.4 外源蛋白基因拷贝数测定第59页
        2.3.5 转录组学和翻译组学分析方法第59-62页
        2.3.6 多聚核糖体谱方法第62-63页
        2.3.7 Phy新生肽链共翻译折叠效率测定第63页
        2.3.8 蛋白聚集体提取和分析第63-64页
    2.4 结果与讨论第64-80页
        2.4.1 毕赤酵母核糖体蛋白的基因敲除及鉴定第64-69页
        2.4.2 缺陷菌株外源蛋白表达效率分析第69-70页
        2.4.3 缺陷菌株核糖体蛋白回补分析第70-72页
        2.4.4 缺陷菌株Phy转录水平与翻译起始效率分析第72-74页
        2.4.5 核糖体60S亚基组装缺陷对外源蛋白合成的影响第74-76页
        2.4.6 Phy共翻译折叠效率分析第76-78页
        2.4.7 缺陷菌株Phy蛋白聚集体分析第78-79页
        2.4.8 核糖体蛋白缺陷促进外源蛋白合成的调控模型第79-80页
    2.5 本章小结第80-81页
第三章 核糖体蛋白合成因子对核糖体生物合成及外源蛋白表达的调控第81-97页
    3.1 引言第81-82页
    3.2 材料与设备第82-84页
        3.2.1 菌株、质粒和引物第82-83页
        3.2.2 主要仪器与设备第83-84页
        3.2.3 主要试剂第84页
        3.2.4 培养基与溶液第84页
    3.3 实验方法第84-88页
        3.3.1 核糖体蛋白合成因子重组质粒的构建第84-85页
        3.3.2 外源蛋白表达重组酵母的构建和检测第85-86页
        3.3.3 毕赤酵母比生长速率测定第86页
        3.3.4 毕赤酵母总RNA的提取第86-87页
        3.3.5 RNA测序与数据分析第87-88页
    3.4 结果与讨论第88-95页
        3.4.1 筛选促进外源蛋白表达的核糖体蛋白合成因子第88-90页
        3.4.2 Bcy1 过表达对细胞生长及e GFP合成的影响第90-92页
        3.4.3 Bcy1 过表达菌株转录组学分析第92-94页
        3.4.4 Bcy1 过表达促进植酸酶合成分析第94-95页
    3.5 本章小结第95-97页
第四章 Rpl26 功能及其缺陷耐受内质网压力的机制第97-122页
    4.1 引言第97-98页
    4.2 材料与设备第98-101页
        4.2.1 菌株、质粒和引物第98-99页
        4.2.2 主要仪器与设备第99-100页
        4.2.3 主要试剂第100页
        4.2.4 培养基与溶液第100-101页
    4.3 实验方法第101-108页
        4.3.1 基因敲除方法第101页
        4.3.2 敏感性实验方法第101-102页
        4.3.3 毕赤酵母总RNA的提取与检测第102-103页
        4.3.4 RNA测序和数据分析第103页
        4.3.5 氨基酸序列保守性分析第103-104页
        4.3.6 回补载体构建第104-106页
        4.3.7 多聚核糖体谱方法第106页
        4.3.8 总蛋白与聚集体提取方法第106-107页
        4.3.9 核糖体沉淀提取与分析第107-108页
    4.4 结果与讨论第108-121页
        4.4.1 抗内质网压力非必需60S核糖体蛋白缺陷菌株的筛选第108-110页
        4.4.2 Rpl26 缺陷耐受内质网压力转录组学分析第110-113页
        4.4.3 Rpl26 对核糖体生物合成的影响第113-116页
        4.4.4 Rpl26 对核糖体功能的影响第116-121页
    4.5 本章小结第121-122页
结论与展望第122-126页
    结论第122页
    本论文创新点第122-124页
    展望第124-126页
参考文献第126-142页
附录第142-176页
攻读博士学位期间取得的研究成果第176-177页
致谢第177-179页
附件第179页

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