论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 主要符号 | 第11-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-33页 |
| 1.1 油脂脱胶概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 油脂中的胶质 | 第16页 |
| 1.1.2 油脂中常见磷脂的结构及特点 | 第16-17页 |
| 1.1.3 主要油脂脱胶技术 | 第17-18页 |
| 1.2 脂肪酶的概述 | 第18-23页 |
| 1.2.1 脂肪酶的简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 脂肪酶的结构特征 | 第19-21页 |
| 1.2.3 脂肪酶的催化机制 | 第21-22页 |
| 1.2.4 脂肪酶在不同行业的应用研究 | 第22-23页 |
| 1.3 脂肪酶HL1232 的简介 | 第23-24页 |
| 1.4 部分脂肪酶的磷脂酶活力来源机制 | 第24-25页 |
| 1.5 脂肪酶的底物选择性 | 第25-26页 |
| 1.6 波谱学及分子模拟技术在酶结构与功能研究中的应用 | 第26-29页 |
| 1.6.1 核磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用 | 第26-28页 |
| 1.6.2 电子顺磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用 | 第28页 |
| 1.6.3 分子对接及分子动力学模拟技术在酶结构与功能研究中的应用 | 第28-29页 |
| 1.7 脂肪酶的分子改造 | 第29-31页 |
| 1.7.1 脂肪酶的定向进化 | 第30页 |
| 1.7.2 脂肪酶的理性设计 | 第30-31页 |
| 1.8 本课题研究背景、意义以及主要研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 酶法催化大豆毛油脱胶研究 | 第33-52页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第33-37页 |
| 2.2.1 脂肪酶的基因序列 | 第33-34页 |
| 2.2.2 菌种与质粒 | 第34页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.4 主要实验仪器与设备 | 第35页 |
| 2.2.5 主要培养基及缓冲液的配制 | 第35-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-43页 |
| 2.3.1 大豆毛油脱胶酶筛选实验酶种类的选择 | 第37页 |
| 2.3.2 脂肪酶基因工程菌的构建 | 第37-40页 |
| 2.3.3 脂肪酶的表达与纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.4 脂肪酶的酶学性质测定 | 第41-43页 |
| 2.3.5 大豆毛油酶法脱胶的步骤 | 第43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-50页 |
| 2.4.1 脂肪酶的表达与纯化 | 第43-45页 |
| 2.4.2 脂肪酶的酶学性质测定 | 第45-50页 |
| 2.4.3 脂肪酶催化大豆毛油脱胶效果对比 | 第50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 脂肪酶HL1232 C-末端不同肽段对其底物选择性的影响 | 第52-64页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第52-53页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第52页 |
| 3.2.2 主要实验试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.3 主要实验仪器与设备 | 第53页 |
| 3.2.4 主要缓冲液的配制 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 3.3.1 脂肪酶TLL-wt与 HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析 | 第53页 |
| 3.3.2 脂肪酶HL1232 的生物信息学分析及3D空间模型的构建 | 第53页 |
| 3.3.3 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的设计及引物设计 | 第53-54页 |
| 3.3.4 脂肪酶HL1232 C-末端缺失突变体的构建 | 第54-55页 |
| 3.3.5 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化 | 第55页 |
| 3.3.6 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体酶学性质测定 | 第55页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第55-62页 |
| 3.4.1 脂肪酶TLL-wt与 HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析 | 第55-57页 |
| 3.4.2 脂肪酶HL1232 生物信息学分析及3D空间模型的构建 | 第57-60页 |
| 3.4.3 脂肪酶HL1232 C-末端肽段氨基酸序列分析 | 第60-61页 |
| 3.4.4 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化 | 第61页 |
| 3.4.5 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的酶学性质对比 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 脂肪酶HL1232 底物选择性的核磁共振及电子顺磁共振研究 | 第64-86页 |
| 4.1 引言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第65页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第65页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第65页 |
| 4.2.3 主要实验仪器与设备 | 第65页 |
| 4.2.4 主要缓冲液的配制 | 第65页 |
| 4.3 实验原理及方法 | 第65-74页 |
| 4.3.1 脂肪酶HL1232 底物选择性分子机制的提出 | 第66-67页 |
| 4.3.2 实验原理 | 第67-68页 |
| 4.3.3 ~(19)F位点特异性标记实验突变体位点的选择 | 第68-69页 |
| 4.3.4 位点特异性自旋顺磁共振标记实验突变体位点的选择 | 第69-70页 |
| 4.3.5 HL1232 代表性氨基酸突变体的构建 | 第70-72页 |
| 4.3.6 HL1232 代表性氨基酸突变体的表达纯化及酶活测定 | 第72页 |
| 4.3.7 ~(19)F位点特异性标记实验标记步骤 | 第72页 |
| 4.3.8 ~(19)F位点特异性标记实验参数设置及图谱采集 | 第72-73页 |
| 4.3.9 位点特异性自旋顺磁共振标记实验标记步骤 | 第73页 |
| 4.3.10 位点特异性自旋顺磁共振标记实验参数设置与图谱采集 | 第73-74页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第74-84页 |
| 4.4.1 HL1232 各代表性氨基酸突变体的表达纯化及标记 | 第74-75页 |
| 4.4.2 HL1232 各代表性氨基酸突变体的酶活测定 | 第75-76页 |
| 4.4.3 HL1232 与磷脂结合前后代表性氨基酸构象的19F位点特异性标记分析 | 第76-80页 |
| 4.4.4 HL1232 与不同底物结合前后代表性氨基酸的动力学信息分析 | 第80-81页 |
| 4.4.5 HL1232 与不同底物结合前后代表性氨基酸的易趋性参数分析 | 第81-84页 |
| 4.5 本章小结 | 第84-86页 |
| 第五章 脂肪酶HL1232 底物选择性的分子模拟研究 | 第86-102页 |
| 5.1 引言 | 第86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-87页 |
| 5.2.1 分子对接体系方法的建立 | 第86-87页 |
| 5.2.2 分子动力学模拟体系方法的建立 | 第87页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第87-99页 |
| 5.3.1 脂肪酶HL1232和TLL与磷脂底物分子对接结果对比 | 第87-90页 |
| 5.3.2 脂肪酶HL1232和TLL与甘油三酯底物分子对接结果对比 | 第90-92页 |
| 5.3.3 脂肪酶HL1232和TLL与甘油二酯底物分子对接结果对比 | 第92-94页 |
| 5.3.4 脂肪酶HL1232和PCEST、EST1 以及TTEST结构对比分析 | 第94-95页 |
| 5.3.5 脂肪酶HL1232 与不同底物结合的分子动力学模拟分析 | 第95-99页 |
| 5.4 本章小结 | 第99-102页 |
| 结论与展望 | 第102-105页 |
| 1.主要研究结论 | 第102-104页 |
| 2.主要创新点 | 第104页 |
| 3.未来工作展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 附件 | 第126页 |
