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脂肪酶HL1232脱除大豆毛油中磷脂的分子机制研究

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脂肪酶HL1232脱除大豆毛油中磷脂的分子机制研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-10页
主要符号第11-16页
第一章 绪论第16-33页
    1.1 油脂脱胶概述第16-18页
        1.1.1 油脂中的胶质第16页
        1.1.2 油脂中常见磷脂的结构及特点第16-17页
        1.1.3 主要油脂脱胶技术第17-18页
    1.2 脂肪酶的概述第18-23页
        1.2.1 脂肪酶的简介第18-19页
        1.2.2 脂肪酶的结构特征第19-21页
        1.2.3 脂肪酶的催化机制第21-22页
        1.2.4 脂肪酶在不同行业的应用研究第22-23页
    1.3 脂肪酶HL1232 的简介第23-24页
    1.4 部分脂肪酶的磷脂酶活力来源机制第24-25页
    1.5 脂肪酶的底物选择性第25-26页
    1.6 波谱学及分子模拟技术在酶结构与功能研究中的应用第26-29页
        1.6.1 核磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用第26-28页
        1.6.2 电子顺磁共振技术在酶结构与功能研究中的应用第28页
        1.6.3 分子对接及分子动力学模拟技术在酶结构与功能研究中的应用第28-29页
    1.7 脂肪酶的分子改造第29-31页
        1.7.1 脂肪酶的定向进化第30页
        1.7.2 脂肪酶的理性设计第30-31页
    1.8 本课题研究背景、意义以及主要研究内容第31-33页
第二章 酶法催化大豆毛油脱胶研究第33-52页
    2.1 引言第33页
    2.2 实验材料与仪器第33-37页
        2.2.1 脂肪酶的基因序列第33-34页
        2.2.2 菌种与质粒第34页
        2.2.3 主要实验试剂第34-35页
        2.2.4 主要实验仪器与设备第35页
        2.2.5 主要培养基及缓冲液的配制第35-37页
    2.3 实验方法第37-43页
        2.3.1 大豆毛油脱胶酶筛选实验酶种类的选择第37页
        2.3.2 脂肪酶基因工程菌的构建第37-40页
        2.3.3 脂肪酶的表达与纯化第40-41页
        2.3.4 脂肪酶的酶学性质测定第41-43页
        2.3.5 大豆毛油酶法脱胶的步骤第43页
    2.4 结果与讨论第43-50页
        2.4.1 脂肪酶的表达与纯化第43-45页
        2.4.2 脂肪酶的酶学性质测定第45-50页
        2.4.3 脂肪酶催化大豆毛油脱胶效果对比第50页
    2.5 本章小结第50-52页
第三章 脂肪酶HL1232 C-末端不同肽段对其底物选择性的影响第52-64页
    3.1 引言第52页
    3.2 实验材料与仪器第52-53页
        3.2.1 菌株与载体第52页
        3.2.2 主要实验试剂第52-53页
        3.2.3 主要实验仪器与设备第53页
        3.2.4 主要缓冲液的配制第53页
    3.3 实验方法第53-55页
        3.3.1 脂肪酶TLL-wt与 HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析第53页
        3.3.2 脂肪酶HL1232 的生物信息学分析及3D空间模型的构建第53页
        3.3.3 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的设计及引物设计第53-54页
        3.3.4 脂肪酶HL1232 C-末端缺失突变体的构建第54-55页
        3.3.5 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化第55页
        3.3.6 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体酶学性质测定第55页
    3.4 结果与讨论第55-62页
        3.4.1 脂肪酶TLL-wt与 HL1232-wt的酶学性质对比及氨基酸序列分析第55-57页
        3.4.2 脂肪酶HL1232 生物信息学分析及3D空间模型的构建第57-60页
        3.4.3 脂肪酶HL1232 C-末端肽段氨基酸序列分析第60-61页
        3.4.4 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的表达与纯化第61页
        3.4.5 脂肪酶HL1232 C-末端各缺失突变体的酶学性质对比第61-62页
    3.5 本章小结第62-64页
第四章 脂肪酶HL1232 底物选择性的核磁共振及电子顺磁共振研究第64-86页
    4.1 引言第64-65页
    4.2 实验材料与仪器第65页
        4.2.1 菌株与载体第65页
        4.2.2 主要实验试剂第65页
        4.2.3 主要实验仪器与设备第65页
        4.2.4 主要缓冲液的配制第65页
    4.3 实验原理及方法第65-74页
        4.3.1 脂肪酶HL1232 底物选择性分子机制的提出第66-67页
        4.3.2 实验原理第67-68页
        4.3.3 ~(19)F位点特异性标记实验突变体位点的选择第68-69页
        4.3.4 位点特异性自旋顺磁共振标记实验突变体位点的选择第69-70页
        4.3.5 HL1232 代表性氨基酸突变体的构建第70-72页
        4.3.6 HL1232 代表性氨基酸突变体的表达纯化及酶活测定第72页
        4.3.7 ~(19)F位点特异性标记实验标记步骤第72页
        4.3.8 ~(19)F位点特异性标记实验参数设置及图谱采集第72-73页
        4.3.9 位点特异性自旋顺磁共振标记实验标记步骤第73页
        4.3.10 位点特异性自旋顺磁共振标记实验参数设置与图谱采集第73-74页
    4.4 实验结果与讨论第74-84页
        4.4.1 HL1232 各代表性氨基酸突变体的表达纯化及标记第74-75页
        4.4.2 HL1232 各代表性氨基酸突变体的酶活测定第75-76页
        4.4.3 HL1232 与磷脂结合前后代表性氨基酸构象的19F位点特异性标记分析第76-80页
        4.4.4 HL1232 与不同底物结合前后代表性氨基酸的动力学信息分析第80-81页
        4.4.5 HL1232 与不同底物结合前后代表性氨基酸的易趋性参数分析第81-84页
    4.5 本章小结第84-86页
第五章 脂肪酶HL1232 底物选择性的分子模拟研究第86-102页
    5.1 引言第86页
    5.2 实验方法第86-87页
        5.2.1 分子对接体系方法的建立第86-87页
        5.2.2 分子动力学模拟体系方法的建立第87页
    5.3 实验结果与讨论第87-99页
        5.3.1 脂肪酶HL1232和TLL与磷脂底物分子对接结果对比第87-90页
        5.3.2 脂肪酶HL1232和TLL与甘油三酯底物分子对接结果对比第90-92页
        5.3.3 脂肪酶HL1232和TLL与甘油二酯底物分子对接结果对比第92-94页
        5.3.4 脂肪酶HL1232和PCEST、EST1 以及TTEST结构对比分析第94-95页
        5.3.5 脂肪酶HL1232 与不同底物结合的分子动力学模拟分析第95-99页
    5.4 本章小结第99-102页
结论与展望第102-105页
    1.主要研究结论第102-104页
    2.主要创新点第104页
    3.未来工作展望第104-105页
参考文献第105-122页
攻读博士学位期间取得的研究成果第122-124页
致谢第124-126页
附件第126页

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