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RSV五个基因及GFP-CP、GFP-SP融合基因在sf9昆虫细胞中的表达

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RSV五个基因及GFP-CP、GFP-SP融合基因在sf9昆虫细胞中的表达
论文目录
 
摘要第1-10 页
Abstract第10-12 页
第一章 前言第12-23 页
  · 水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的研究概况第12-17 页
    · 水稻条纹叶枯病的基础生物学研究概况第12 页
    · RSV的分子生物学研究第12-17 页
      · RSV的分类地位第12 页
      · RSV粒体形态第12-13 页
      · RSV的基因组结构与功能第13-16 页
        · RNA1区段第14 页
        · RNA2区段第14-15 页
        · RNA3区段第15-16 页
        · RNA4区段第16 页
      · RSV的分子变异第16 页
      · 水稻条纹叶枯病的防治第16-17 页
  · 蛋白质研究进展第17-22 页
    · 外源基因表达第17-20 页
      · RSV的原核表达第18 页
      · 真核表达第18 页
      · 杆状病毒—昆虫细胞表达系统第18-20 页
        · 杆状病毒昆虫细胞表达系统研究概况第18-19 页
        · 杆状病毒与细胞凋亡第19-20 页
    · 蛋白质功能研究第20-22 页
      · 蛋白质与核酸互作第20-21 页
      · 蛋白质间相互作用的研究第21 页
      · 蛋白质的亚细胞定位第21-22 页
  · 本研究的目的和意义第22-23 页
第二章 RSV五个基因真核“AcMNPV-sf9昆虫细胞”表达体系的建立第23-50 页
  · 材料与方法第23-32 页
    · 材料第23 页
      · 病毒第23 页
      · 昆虫第23 页
      · 菌株第23 页
      · 质粒第23 页
    · 试剂及仪器第23-25 页
    · 方法第25-32 页
      · 常规克隆第25-28 页
        · 水稻病叶总RNA的提取第25 页
        · 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)第25-26 页
        · DNA片段的切胶纯化第26 页
        · PCR扩增产物和pMD18-T克隆载体的连接第26 页
        · 感受态细胞的制备第26-27 页
        · 连接反应物对宿主感受态细胞的转化第27 页
        · 质粒提取第27 页
        · 重组克隆的PCR筛选第27 页
        · 重组克隆的酶切鉴定第27-28 页
      · AcMNPV-sf9细胞真核表达体系(步骤见图2-3,示意图见附录4)第28-32 页
        · 重组AcMNPV穿梭质粒的构建及鉴定(bacmid转座原理示意图见附录5)第29 页
        · 核苷酸序列测定第29-30 页
        · 收获重组AcMNPV第30 页
        · 噬菌斑纯化鉴定实验第30 页
        · 重组蛋白的表达纯化第30 页
        · 纯化蛋白抗血清的制备第30-31 页
        · Western blotting鉴定第31-32 页
  · 结果与分析第32-45 页
    · AcMNPV转移载体pFastBacHTb及穿梭载体bacmid鉴定第32-33 页
    · sf9细胞及其生长曲线第33-34 页
    · 构建重组AcMNPV转移质粒pFastBacHTb-X第34-36 页
    · 重组AcMNPV穿梭质粒的构建与鉴定第36-39 页
    · 重组RSV蛋白的表达第39-44 页
      · rb-X转染sf9昆虫细胞第39 页
      · 重组AcMNPV的收集、纯化和扩增第39-40 页
      · 优化表达时间第40-44 页
    · NS_3特异性抗血清的制备第44-45 页
      · NS_3的纯化第44-45 页
      · 间接ELISA法测定抗血清效价第45 页
  · 讨论第45-50 页
    · RSV蛋白的获取第45-46 页
    · 表达体系的选择第46-47 页
    · 影响表达的因素第47-49 页
    · 通过真核表达制备RSV各蛋白的抗血清第49-50 页
第三章 GFP-SP、GFP-CP融合基因在sf9细胞中的表达第50-66 页
  · 材料与方法第50-52 页
    · 病毒,载体,昆虫和试剂 参见第一章第50 页
    · 方法第50-52 页
      · 常规克隆方法第50 页
      · 病叶总RNA提取第50 页
      · PCR与overlap-PCR第50-51 页
      · 重组AcMNPV转移质粒pFastBacHTb-GFP、pFastBacHTb-GFP-CP和pFast-GFP-SP的构建第51-52 页
      · 重组AcMNPV穿梭质粒的构建与鉴定第52 页
      · sf9份细胞的培养、转染与观察第52 页
      · 重组AcMNPV粒子的收获及鉴定第52 页
  · 结果与分析第52-63 页
    · 绿色荧光蛋白GFP的活化第52-53 页
    · 构建重组AcMNPV转移质粒PFastBacHTb-GFP-X第53-54 页
    · 重组AcMNPV穿梭质粒的构建及鉴定第54-55 页
    · GFP-SP融合蛋白在sf9昆虫细胞中的表达第55-60 页
    · GFP-SP融合蛋白在sf9细胞中的激光共聚焦观察第60-63 页
  · 讨论第63-66 页
    · overlap-PCR的应用第63-64 页
    · 包涵体的形成第64 页
    · 重组质粒与细胞凋亡第64-65 页
    · SP的亚细胞定位第65-66 页
第四章 全文总结第66-68 页
参考文献第68-76 页
附录1 缩写词英汉对照第76-78 页
附录2 本研究使用的主要试剂与溶液的配制第78-82 页
附录3 实验所用“AcMNPV-sf9昆虫细胞”表达系统示意图培养第82-83 页
附录4 穿梭质粒bacmid转座原理示意图第83-84 页
附录5 sf9昆虫细胞培养第84-85 页
附录6 缓冲体系及咪唑浓度参考表第85-86 页
附录7 RSV各蛋白的分泌性预测结果第86-87 页
附录8 本研究构建的序列第87-91 页
附录9 RSV NS_2、NS_3、CP、SP和NSvc_4蛋白的亚细胞定位预测第91-92 页
附录10 overlap-PCR原理示意图第92-93 页
附录11 攻博期间发表(投稿)的论文目录第93-94 页
致谢第94页

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