论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| · 绪论 | 第11页 |
| · 植物耐盐性及抗盐基因功能研究进展 | 第11-15页 |
| · 盐胁迫对植物的伤害 | 第11-12页 |
| · 植物耐盐机理 | 第12-13页 |
| · 植物抗盐基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| · 酪氨酸蛋白磷酸酶的研究概述 | 第15-18页 |
| · PTP的结构与分类 | 第16页 |
| · PTP的研究现状 | 第16-18页 |
| · PTP与逆境胁迫 | 第18页 |
| · 病毒诱导的基因沉默技术 | 第18-20页 |
| · VIGS的分子机制 | 第19-20页 |
| · VIGS技术的优越性与局限性 | 第20页 |
| · 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| · 本研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 水培条件下棉花VIGS体系的建立及优化 | 第22-34页 |
| · 引言 | 第22页 |
| · 试验材料 | 第22-24页 |
| · 植物材料及培养条件 | 第22-23页 |
| · 菌株和质粒 | 第23页 |
| · 溶液配制 | 第23-24页 |
| · 常用试剂 | 第24页 |
| · 试验方法 | 第24-28页 |
| · A.tumefaciens GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第24页 |
| · 棉花水培种植 | 第24-25页 |
| · 农杆菌介导的VIGS基因沉默 | 第25页 |
| · 实验条件设计 | 第25页 |
| · 棉花总RNA的提取及反转录 | 第25-26页 |
| · GhCLAl沉默效率检测 | 第26页 |
| · 叶绿素含量的测定 | 第26-27页 |
| · GhCTRl载体构建及基因沉默 | 第27页 |
| · 产物胶回收步骤 | 第27页 |
| · 数据统计 | 第27-28页 |
| · 结果与分析 | 第28-32页 |
| · 培养温度及菌体浓度对VIGS沉默效率的影响 | 第28页 |
| · 不同注射时间对VIGS沉默效率的影响 | 第28-29页 |
| · VIGS对照载体的比较 | 第29-30页 |
| · VIGS-GhCLAl在棉花土培与水培方式上的比较 | 第30页 |
| · VIGS-GhCLAl在棉花不同品种上的沉默表型 | 第30-31页 |
| · TRV诱导的水培棉花GhCTR1基因沉默 | 第31-32页 |
| · 小结 | 第32页 |
| · 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 棉花GhPTP1基因的获得及分子功能研究 | 第34-64页 |
| · 引言 | 第34页 |
| · 试验材料 | 第34-37页 |
| · 植物材料 | 第34-35页 |
| · 菌株、质粒和引物 | 第35-36页 |
| · 溶液配制 | 第36页 |
| · 试验仪器 | 第36-37页 |
| · 试验方法 | 第37-41页 |
| · VIGS-cDNA文库转化 | 第37页 |
| · VIGS-cDNA文库盐相关基因筛选浓度的设定 | 第37页 |
| · VIGS-cDNA文库盐相关基因的筛选 | 第37页 |
| · 农杆菌质粒提取 | 第37-38页 |
| · 棉花GhPTP1基因的克隆 | 第38页 |
| · GhPTP1的同源比对分析及生物进化树的构建 | 第38页 |
| · 相关载体构建 | 第38页 |
| · 拟南芥种子消毒 | 第38页 |
| · 转基因侵染拟南芥 | 第38-39页 |
| · GhPTP1亚细胞定位 | 第39页 |
| · 转GhPTP1基因拟南芥盐胁迫处理 | 第39-40页 |
| · 荧光定量PCR测定基因表达 | 第40页 |
| · 农杆菌介导的VIGS基因沉默 | 第40页 |
| · 根系扫描 | 第40页 |
| · K~+、Na~+离子含量的测定 | 第40页 |
| · 失水率的测定 | 第40页 |
| · 相对含水量测定 | 第40-41页 |
| · 结果与分析 | 第41-60页 |
| · VIGS-cDNA文库筛选浓度的确定 | 第41页 |
| · V1GS-cDNA文库盐相关基因筛选 | 第41-43页 |
| · GhPTP1基因的克隆 | 第43-44页 |
| · GhPTPl的同源比对分析及生物进化树的构建 | 第44-47页 |
| · 棉花GhPTP1蛋白疏水性分析 | 第47-48页 |
| · GhPTP1的亚细胞定位及组织特异性表达 | 第48-49页 |
| · GhPTP1基因对盐胁迫响应机制 | 第49-50页 |
| · GhPTP1基因在其他逆境条件下响应机制 | 第50-51页 |
| · 沉默GhPTP1基因对盐胁迫下棉花植株生长的影响 | 第51-53页 |
| · 沉默GhPTP1基因对盐胁迫下棉花Na~+、K~+含量的影响 | 第53-54页 |
| · 沉默GhPTP1基因不同功能区在盐胁迫下表型分析 | 第54页 |
| · 盐胁迫诱导VIGS-GhPTP1植株盐相关基因的表达 | 第54-55页 |
| · 盐胁迫下GhPTP1转基因拟南芥功能验证 | 第55-58页 |
| · GhPTP1在渗透胁迫下功能分析 | 第58-60页 |
| · 小结 | 第60页 |
| · 讨论 | 第60-64页 |
| 第四章 GhPTP1互作蛋白的筛选及验证 | 第64-75页 |
| · 引言 | 第64页 |
| · 试验材料 | 第64-66页 |
| · 材料 | 第64页 |
| · 菌株、质粒和引物 | 第64-65页 |
| · 主要溶液及培养基 | 第65-66页 |
| · 试验方法 | 第66-69页 |
| · 载体构建 | 第66页 |
| · 酵母感受态的制备 | 第66-67页 |
| · 酵母转化 | 第67页 |
| · 酵母双杂交文库的筛选 | 第67页 |
| · 酵母质粒的提取 | 第67-68页 |
| · 棉花原生质体的分离及转化 | 第68页 |
| · 免疫共沉淀Co-IP检测GhPTP1与GhANN5间的相互作用 | 第68页 |
| · Western蛋白检测 | 第68-69页 |
| · GhPTP1和GhANN5烟草中瞬时表达 | 第69页 |
| · 序列比对 | 第69页 |
| · 结果与分析 | 第69-73页 |
| · 诱饵载体pGBK-GhPTPl的构建 | 第69-70页 |
| · 酵母双杂交文库的筛选 | 第70-71页 |
| · 阳性克隆序列比对分析 | 第71-72页 |
| · GhPTP1与GhANN5的互作关系验证 | 第72-73页 |
| · 免疫共沉淀Co-IP检测GhPTP1与GhANN5间的相互作用 | 第73页 |
| · GhPTP1与GhANN5在烟草中瞬时表达 | 第73页 |
| · 小结 | 第73-74页 |
| · 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-77页 |
| · 结论 | 第75页 |
| · 水培条件下病毒诱导棉花基因沉默体系的建立及优化 | 第75页 |
| · GhPTP1基因在盐响应信号途径中具有负调控作用 | 第75页 |
| · GhPTP1可与GhANN5互作调节植物抗盐性 | 第75页 |
| · 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88页 |
