论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第8-13页 |
| 引言 | 第13-41页 |
| 一、真核生物DNA损伤 | 第13-15页 |
| (一)DNA损伤的来源及类型 | 第13页 |
| (二)DNA损伤应答(DDR) | 第13-14页 |
| (三)DNA损伤的修复方式 | 第14-15页 |
| 二、真核生物DNA双链断裂(DSB)损伤 | 第15-22页 |
| (一)DSB损伤的来源 | 第15-18页 |
| (二)DSB损伤应答与DSB损伤修复 | 第18-20页 |
| (三)DSB损伤应答与细胞周期检验点 | 第20-22页 |
| 三、参与真核生物DSB损伤应答的相关蛋白 | 第22-39页 |
| (一)DSB损伤应答与E3泛素连接酶RNF8 | 第22-29页 |
| (二)DSB损伤应答与乙酰转移酶Tip60 | 第29-32页 |
| (三)DSB损伤应答与核酸内切酶CtIP | 第32-34页 |
| (四)DSB损伤应答与“基因组卫士”p53 | 第34-39页 |
| 四、本论文立题依据、研究内容及意义 | 第39-41页 |
| 实验材料与方法 | 第41-71页 |
| 一、实验材料 | 第41-46页 |
| (一)实验仪器及设备 | 第41-42页 |
| (二)实验所用试剂及相关试剂盒 | 第42-43页 |
| (三)实验中所用到的所有人源细胞株 | 第43页 |
| (四)抗体 | 第43-45页 |
| (五)在实验过程中所用到的引物及序列 | 第45-46页 |
| 二、实验方法 | 第46-71页 |
| (一)细胞培养 | 第46-48页 |
| (二)检测细胞中mRNA的表达水平 | 第48-51页 |
| (三)质粒的构建 | 第51-55页 |
| (四)构建慢病毒稳转细胞系 | 第55-56页 |
| (五)细胞的质粒转染 | 第56-57页 |
| (六)蛋白的质谱检测 | 第57-58页 |
| (七)细胞凋亡的检测 | 第58-59页 |
| (八)免疫荧光 | 第59-61页 |
| (九)流式细胞仪分析γ-H2AX的表达水平 | 第61页 |
| (十)细胞的全蛋白提取 | 第61-62页 |
| (十一)免疫共沉淀实验 | 第62-64页 |
| (十二)GST pull-down实验 | 第61-65页 |
| (十三)SDS-PAGE及蛋白质免疫印迹 | 第65-68页 |
| (十四)彗星电泳实验 | 第68-69页 |
| (十五)细胞存活增殖率分析 | 第69页 |
| (十六)DSB两种修复途径分析:HR和NHEJ | 第69-70页 |
| (十七)实验数据分析 | 第70-71页 |
| 实验结果与分析 | 第71-102页 |
| 一、在DSB损伤应答中,RNF8缺失导致细胞对DSB损伤的敏感性增加 | 第71-75页 |
| (一)RNF8能被募集到多种来源诱导的DSB损伤位点 | 第71-74页 |
| (二)RNF8低表达导致细胞对DSB损伤的敏感性增加 | 第74-75页 |
| 二、在DSB损伤应答中,RNF8低表达细胞对DSB损伤敏感性的增加与p53基因的高表达相关 | 第75-78页 |
| 三、在DSB损伤应答中,RNF8通过抑制p53的促凋亡功能来提高DSB的修复效率 | 第78-82页 |
| 四、在DSB损伤应答中,RNF8通过调控Tip60的活性来抑制p53的促凋亡功能 | 第82-88页 |
| (一)RNF8不直接调节p53的促凋亡功能 | 第82-84页 |
| (二)RNF8通过调控Tip60的活性来抑制p53的促凋亡功能 | 第84-86页 |
| (三)RNF8对p53的促凋亡功能的抑制与DYRK2无关 | 第86-88页 |
| 五、在DSB损伤应答中,CtIP的表达与HCT116细胞对Eto的敏感性相关 | 第88-92页 |
| (一)Eto药物作用模型的优化 | 第89-92页 |
| (二)CtIP的表达水平与细胞对Eto的敏感性相关 | 第92页 |
| 六、在DSB损伤应答中,CtIP低表达降低Eto诱导的HCT116细胞的G2/M细胞周期阻滞 | 第92-96页 |
| (一)CtIP低表达提高损伤细胞的增殖速率和凋亡率 | 第92-94页 |
| (二)CtIP低表达减弱Eto诱导的G2/M细胞周期阻滞 | 第94-96页 |
| 七、在DSB损伤应答中,CtIP促进Eto诱导的G2/M细胞周期阻滞不依赖p53-p21/GADD45a途径 | 第96-100页 |
| 八、在DSB损伤应答中,CtIP促进Eto诱导的G2/M细胞周期阻滞依赖ATR-Chk1-CDC25C途径 | 第100-102页 |
| 讨论 | 第102-107页 |
| 一、RNF8通过抑制p53的促凋亡功能来促进高效的DSB损伤修复 | 第102页 |
| 二、RNF8通过调节Tip60的功能从而抑制p53的促凋亡活性 | 第102-104页 |
| 三、CtIP促进Eto诱导的G2/M细胞周期调控不依赖p53-p21/GADD45a途径 | 第104-105页 |
| 四、CtIP促进Eto诱导的G2/M细胞周期调控依赖ATR-Chk1-CDC25C途径 | 第105-107页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 创新点 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 致谢 | 第122-125页 |
| 在学期间公开发表论文情况 | 第125页 |
