论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| 1.1 植物内生菌概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1 植物内生菌的定义和起源 | 第17页 |
| 1.1.2 植物内生菌的多样化 | 第17页 |
| 1.1.3 植物内生菌的作用 | 第17-18页 |
| 1.1.4 骆驼刺及骆驼刺内生菌的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2 生物膜概述 | 第19-23页 |
| 1.2.1 胞外蛋白质 | 第19-20页 |
| 1.2.2 多糖 | 第20页 |
| 1.2.3 细胞外DNA | 第20页 |
| 1.2.4 脂质 | 第20页 |
| 1.2.5 生物膜的形成过程 | 第20-21页 |
| 1.2.6 生物膜形成的调控机制 | 第21-23页 |
| 1.3 细菌的运动性及调控 | 第23-24页 |
| 1.4 LrhA基因的功能简述 | 第24-26页 |
| 1.4.1 LrhA的简介 | 第24-25页 |
| 1.4.2 LrhA对运动性的调控 | 第25页 |
| 1.4.3 对Sigma因子RpoS稳定性的调节 | 第25页 |
| 1.4.4 LrhA的自我调节 | 第25-26页 |
| 1.5 渗透调节周质葡聚糖(OPGs) | 第26-27页 |
| 1.5.1 OPGs的合成 | 第26页 |
| 1.5.2 OPGs合成的调控 | 第26页 |
| 1.5.3 OPGs的生物学功能 | 第26-27页 |
| 1.6 OmpR基因的功能简述 | 第27-29页 |
| 1.6.1 OmpR是一种多向调节蛋白 | 第27-28页 |
| 1.6.2 EnvZ/OmpR系统的组成成分 | 第28页 |
| 1.6.3 OmpR和 CpxR之间存在着竞争 | 第28-29页 |
| 1.7 RcsCDB | 第29-30页 |
| 1.8 选题依据和目的意义 | 第30-31页 |
| 1.9 技术路线 | 第31-33页 |
| 第二章 LrhA对骆驼刺泛菌生物膜、运动性和定殖的调控作用 | 第33-47页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料和方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 培养条件 | 第34页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.2.4 所用引物 | 第34-35页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.6 P.alhagi LTYR-11Z总基因组DNA提取 | 第36页 |
| 2.2.7 PCR反应 | 第36页 |
| 2.2.8 质粒提取及回收 | 第36-37页 |
| 2.2.9 酶切及连接体系 | 第37页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态的制备及热激转化 | 第37页 |
| 2.2.11 P.alhagi LTYR-11Z电转感受态制备与电转 | 第37-38页 |
| 2.2.12 P.alhagi LTYR-11Z突变体的构建 | 第38页 |
| 2.2.13 互补菌株的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.14 生物膜形成能力的检测 | 第39页 |
| 2.2.15 泳动实验的定性及定量检测 | 第39页 |
| 2.2.16 细菌生长能力的定量检测 | 第39页 |
| 2.2.17 小麦定殖实验的检测 | 第39-40页 |
| 2.3 结果 | 第40-44页 |
| 2.3.1 ΔlrhA对生物膜形成能力的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.2 ΔlrhA对细菌运动能力的影响 | 第41页 |
| 2.3.3 ΔlrhA对细菌生长特性的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.4 ΔlrhA对细菌定殖能力的检测 | 第42-44页 |
| 2.4 讨论和结论 | 第44-47页 |
| 第三章 LrhA通过eps、flhDC操纵子调控骆驼刺泛菌生物膜形成和运动性 | 第47-63页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-53页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.2 培养基与试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 菌株和质粒 | 第48页 |
| 3.2.4 所用引物 | 第48-51页 |
| 3.2.5 实验仪器 | 第51页 |
| 3.2.6 刚果红培养基中EPS定性检测 | 第51页 |
| 3.2.7 EPS的定量检测 | 第51页 |
| 3.2.8 LrhA蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.9 β-gal酶活性的检测 | 第52页 |
| 3.2.10 凝胶电泳迁移检测 | 第52-53页 |
| 3.2.11 转录组测序及其余实验方法 | 第53页 |
| 3.3 结果 | 第53-60页 |
| 3.3.1 lrhA调节相关基因的转录组数据分析 | 第53-54页 |
| 3.3.2 lrhA调节相关基因的核酸水平检测 | 第54-55页 |
| 3.3.3 LrhA通过正向调节eps的表达而影响生物膜的形成 | 第55-58页 |
| 3.3.4 LrhA通过抑制flhDC的表达而影响细菌的运动能力 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论和结论 | 第60-63页 |
| 第四章 LrhA通过调控OPGs的合成影响骆驼刺泛菌生物膜的形成和运动性 | 第63-75页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料与方法 | 第63-67页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第63页 |
| 4.2.2 培养基 | 第63页 |
| 4.2.3 菌株和质粒 | 第63页 |
| 4.2.4 所用引物 | 第63-66页 |
| 4.2.5 实验仪器 | 第66页 |
| 4.2.6 蛋白印迹法检测 | 第66页 |
| 4.2.7 OPGs浓度的检测 | 第66-67页 |
| 4.3 结果 | 第67-71页 |
| 4.3.1 检测LrhA通过对opgGH调节影响细菌的运动性和生物膜的形成 | 第67-68页 |
| 4.3.2 OPGs通过对RcsB的磷酸化来影响细菌的运动性和生物膜的形成 | 第68-71页 |
| 4.3.3 RcsCDB磷酸化对lrhA和 opgGH的调节研究 | 第71页 |
| 4.4 讨论和结论 | 第71-75页 |
| 第五章 LrhA响应环境渗透压调控骆驼刺泛菌的生物膜、运动性和定殖能力 | 第75-83页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 材料与方法 | 第75-77页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第75页 |
| 5.2.2 培养基 | 第75页 |
| 5.2.3 菌株和质粒 | 第75-76页 |
| 5.2.4 所用引物 | 第76页 |
| 5.2.5 实验仪器 | 第76页 |
| 5.2.6 实时定量PCR | 第76页 |
| 5.2.7 其余方法 | 第76-77页 |
| 5.3 结果 | 第77-81页 |
| 5.3.1 LrhA响应环境渗透压的变化 | 第77页 |
| 5.3.2 LrhA通过响应环境渗透压变化对eps和 flhDC的调节 | 第77-78页 |
| 5.3.3 环境渗透压对opgG和 opgH的影响 | 第78-79页 |
| 5.3.4 LrhA响应环境渗透压调控生物膜、运动能力和植物定殖能力 | 第79-80页 |
| 5.3.5 环境渗透压对细菌生长速度的影响 | 第80-81页 |
| 5.4 讨论与结论 | 第81-83页 |
| 第六章 OmpR响应环境渗透压调控lrhA基因的表达 | 第83-89页 |
| 6.1 引言 | 第83页 |
| 6.2 材料与方法 | 第83-85页 |
| 6.2.1 主要试剂和配方 | 第83页 |
| 6.2.2 培养基 | 第83页 |
| 6.2.3 菌株和质粒 | 第83页 |
| 6.2.4 所用引物 | 第83-85页 |
| 6.2.5 实验仪器 | 第85页 |
| 6.2.6 实验方法 | 第85页 |
| 6.3 结果 | 第85-87页 |
| 6.3.1 lrhA启动子区生物信息学分析 | 第85页 |
| 6.3.2 OmpR对 lrhA的调节研究 | 第85-87页 |
| 6.3.3 OmpR响应不同渗透压变化调节lrhA的表达 | 第87页 |
| 6.4 讨论与结论 | 第87-89页 |
| 第七章 结论与创新点 | 第89-91页 |
| 7.1 结论 | 第89页 |
| 7.2 创新点及展望 | 第89页 |
| 7.3 模式图 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 附录 | 第103-113页 |
| 1.PCR反应体系 | 第103页 |
| 2.酶切及连接体系 | 第103-104页 |
| 3.小麦定殖实验检测 | 第104页 |
| 4.试剂配方(部分) | 第104页 |
| 5.部分实验仪器 | 第104-105页 |
| 6.Phos-tag复合SDS-PAGE凝胶的配制(需现配) | 第105页 |
| 7.反转录体系及qRT-PCR反应体系 | 第105-106页 |
| 8.本论文所用菌株和质粒 | 第106-109页 |
| 9.本文涉及中英文缩略词 | 第109-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
