论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7
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| 英文摘要 | 第7-14
页 |
| 第一章 前言 | 第14-44
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| · HBV及其相关的疾病 | 第14-24
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| · HBV分子生物学及其研究进展 | 第14-21
页 |
| · HBV基因组结构及其功能特点 | 第15
页 |
| · HBV的复制和转录 | 第15-18
页 |
| · HBV编码蛋白的结构及其功能 | 第18-21
页 |
| · 囊膜蛋白 | 第18-19
页 |
| · 病毒核心蛋白及e抗原 | 第19-20
页 |
| · 病毒的P蛋白 | 第20
页 |
| · HBx蛋白 | 第20-21
页 |
| · 肝脏是嗜肝DNA病毒感染的靶器官 | 第21-24
页 |
| · 肝细胞生长和细胞凋亡相关的生长因子和细胞因子 | 第21-23
页 |
| · 肝细胞凋亡、增殖和再生相关的信号转导途径 | 第23-24
页 |
| · HCC的分子病理学 | 第24-31
页 |
| · HBV病毒基因在HCC形成过程中的作用 | 第27-28
页 |
| · HBx在HCC形成过程中的作用 | 第28-31
页 |
| · HBx蛋白及相关细胞蛋白的研究进展 | 第31-43
页 |
| · HBx的表达与调控 | 第31
页 |
| · HBx蛋白及其相互作用蛋白质 | 第31-33
页 |
| · 受HBx蛋白调控的基因或蛋白质 | 第33-35
页 |
| · HBx蛋白参与调控的细胞信号转导途径 | 第35-39
页 |
| · HBx激活蛋白激酶C | 第35-36
页 |
| · HBx上调NF-κB | 第36-37
页 |
| · HBx激活Ras-raf-MAPK信号盒 | 第37-38
页 |
| 1.3.4.4 HBx激活应激激活蛋白激酶和Jun N-末端激酶途径 | 第38-39
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| · HBx激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径 | 第39
页 |
| · HBx蛋白上调Janus激酶/STAT途径 | 第39
页 |
| · HBx蛋白与肝细胞凋亡 | 第39-43
页 |
| · 本研究的目的和意义 | 第43-44
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| 第二章 HBV基因组的克隆及其遗传演化分析 | 第44-56
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| · 材料与方法 | 第44-46
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| · 血清 | 第44
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| · 菌种、质粒 | 第44
页 |
| · HBV基因组DNA的提取 | 第44-45
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| · HBV全基因组的扩增 | 第45
页 |
| · PCR产物的回收 | 第45
页 |
| · HBV基因组DNA的酶切鉴定 | 第45
页 |
| · HBV全基因组与T载体的连接 | 第45
页 |
| · 连接产物的电转化 | 第45-46
页 |
| · 感受态细胞的制备 | 第45
页 |
| · 电转化 | 第45-46
页 |
| · 质粒的提取 | 第46
页 |
| · 重组质粒pGEM-HBV的酶切鉴定 | 第46
页 |
| · HBV核苷酸序列测定 | 第46
页 |
| · HBV的序列分析 | 第46
页 |
| · 结果 | 第46-54
页 |
| · HBV全基因组PCR扩增 | 第46-47
页 |
| · HBV基因组DNA的酶切鉴定 | 第47-48
页 |
| · 重组质粒pGEM-HBV的酶切鉴定 | 第48
页 |
| · HBV全基因组核苷酸序列测定及其遗传演化分析 | 第48-54
页 |
| · 讨论 | 第54-56
页 |
| 第三章 HBx基因相关载体的构建及其鉴定 | 第56-66
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| · 材料与方法 | 第56-58
页 |
| · 材料 | 第56
页 |
| · HBx和HBs基因的扩增 | 第56-57
页 |
| 3.1.3 HBx和HBs PCR产物纯化、连接及转化 | 第57
页 |
| · 重组质粒pGBKT7-x和pGBKT7-HBs酶切鉴定 | 第57
页 |
| · 重组质粒pGBKT7-x和pGBKT7-HBs核苷酸序列测定 | 第57
页 |
| · HBx基因的核苷酸序列分析 | 第57-58
页 |
| · 结果 | 第58-64
页 |
| · PCR扩增HBx和HBs基因 | 第58-59
页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第59-60
页 |
| · 重组质粒pGBKT7-HBx和pGBKT7-HBs核苷酸序列测定 | 第60-61
页 |
| · HBx基因的核苷酸序列及其遗传演化分析 | 第61-63
页 |
| · HBx蛋白基因表达载体的构建 | 第63-64
页 |
| · 讨论 | 第64-66
页 |
| 第四章 HBx相互作用细胞蛋白基因的筛选 | 第66-87
页 |
| · 材料与方法 | 第68-72
页 |
| · 酵母双杂交系统预制文库 | 第68
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| · pGBKT7-x的酵母转化 | 第68-69
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| · 酵母菌AH109的培养及其表型鉴定 | 第68
页 |
| · 酵母感受态细胞的制备 | 第68-69
页 |
| · 酵母的转化 | 第69
页 |
| · 阳性菌株表型鉴定 | 第69-70
页 |
| · 转化菌落的表型鉴定 | 第69-70
页 |
| · HBx对酵母的毒性测试 | 第70
页 |
| · HBx基因转录自激活测试 | 第70
页 |
| · 预制文库的筛选 | 第70-71
页 |
| 4.1.4.1 HBx Bait酵母菌株的培养及其增菌 | 第70
页 |
| · Mating试验 | 第70
页 |
| · Mating试验中菌落转移及纯化 | 第70-71
页 |
| · 酵母菌质粒的提取 | 第71
页 |
| · 酵母菌质粒的转化 | 第71
页 |
| · AD质粒的提取及鉴定 | 第71-72
页 |
| · AD质粒和Bait质粒pGBKT7—HBx共转化 | 第72
页 |
| · AD片段的序列测定 | 第72
页 |
| · 结果 | 第72-85
页 |
| · 酵母菌的表型鉴定 | 第72-73
页 |
| · HBx蛋白对酵母的毒性测试 | 第73
页 |
| · HBx基因转录自激活测试 | 第73
页 |
| · Mating试验 | 第73-75
页 |
| · 阳性克隆的鉴定及其分析 | 第75-84
页 |
| · 阳性克隆的PCR鉴定 | 第75-79
页 |
| · 阳性克隆的PCR产物的酶切鉴定 | 第79-82
页 |
| · 阳性克隆AD质粒的提取及鉴定 | 第82-84
页 |
| · 阳性克隆的核苷酸序列测定及其序列分析 | 第84-85
页 |
| · 讨论 | 第85-87
页 |
| 第五章 阳性克隆的体外体内鉴定 | 第87-102
页 |
| · 材料与方法 | 第87-93
页 |
| · 材料 | 第87
页 |
| · 体外翻译 | 第87-88
页 |
| · AD片段编码区体外翻译模板的扩增及其纯化 | 第87
页 |
| · Bait蛋白HBx体外翻译 | 第87-88
页 |
| · AD蛋白体外翻译 | 第88
页 |
| · 免疫沉淀及其检测 | 第88
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| · HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫荧光共定位 | 第88-92
页 |
| · 相关基因表达载体的构建 | 第88-92
页 |
| · 细胞培养及转染 | 第92
页 |
| · 免疫荧光标记及其检测 | 第92
页 |
| · 体内免疫共沉淀试验 | 第92-93
页 |
| · 结果 | 第93-101
页 |
| · AD片段编码区体外翻译模板的扩增 | 第93-94
页 |
| · 免疫沉淀及其检测 | 第94
页 |
| · HBx蛋白和AD蛋白免疫共定位研究相关基因表达载体的构建 | 第94-99
页 |
| · HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫荧光共定位试验 | 第99-100
页 |
| · HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫共沉淀试验 | 第100-101
页 |
| · 讨论 | 第101-102
页 |
| 第六章 HBx蛋白和Hepsin蛋白相互作用的细胞功能研究 | 第102-117
页 |
| · 材料与方法 | 第103-108
页 |
| · 材料 | 第103
页 |
| · 细胞 | 第103
页 |
| · 临床组织样品总RNA的提取 | 第103-104
页 |
| · Hepsin蛋白基因扩增 | 第104
页 |
| · Hepsin蛋白基因克隆及其鉴定 | 第104
页 |
| · Hepsin蛋白基因序列测定 | 第104-105
页 |
| · 细胞增殖活性测定 | 第105-106
页 |
| · 细胞凋亡诱导和细胞凋亡率的测定 | 第106
页 |
| · DAPI染色分析 | 第106-107
页 |
| · Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对HBV蛋白表达及病毒复制影响 | 第107-108
页 |
| · 结果 | 第108-115
页 |
| · Hepsin基因的扩增及其克隆 | 第108-109
页 |
| · Hepsin基因核苷酸序列测定及其序列分析 | 第109-110
页 |
| · Hepsin基因在临床样品中表达水平研究 | 第110
页 |
| · Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对细胞增殖能力的影响 | 第110-111
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| · Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对细胞凋亡的影响 | 第111-114
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| · Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对HBV蛋白表达及病毒复制影响 | 第114-115
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| · 讨论 | 第115-117
页 |
| 研究总结 | 第117-118
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| 参考文献 | 第118-149
页 |
| 附录Ⅰ 论文涉及引物一览表 | 第149-150
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| 附录Ⅱ 论文涉及的试剂及其配制 | 第150-159
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| 附录Ⅲ 在读期间发表文章 | 第159-160
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| 致谢 | 第160
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