论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7
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| 英文摘要 | 第7-16
页 |
| 第一章 对虾白斑综合症病毒研究进展 | 第16-32
页 |
| · 前言 | 第16
页 |
| · 白斑综合症病毒的病毒粒子结构和基因组结构 | 第16-19
页 |
| · 对虾白斑综合症概况 | 第16
页 |
| · 白斑综合症病毒粒子的形态学 | 第16-18
页 |
| · 白斑综合症病毒的基因组结构 | 第18-19
页 |
| · 白斑综合症病毒的分类学地位 | 第19
页 |
| · 白斑综合症病毒对宿主的感染和流行病学 | 第19-21
页 |
| · 白斑综合症病毒感染的宿主范围 | 第19-20
页 |
| · 白斑综合症病毒的组织嗜性 | 第20
页 |
| · WSSV的组织病理学和细胞病理学 | 第20
页 |
| · 白斑综合症病毒感染的过程、感染方式与感染模型 | 第20-21
页 |
| · 白斑综合症病毒的结构蛋白及其功能研究 | 第21-26
页 |
| · WSSV的主要囊膜蛋白 | 第22-23
页 |
| · VP28 | 第22
页 |
| · VP26(p22) | 第22-23
页 |
| · VP19 | 第23
页 |
| · WSSV的主要核衣壳蛋白 | 第23-24
页 |
| · VP24 | 第23-24
页 |
| · VP15 | 第24
页 |
| · 其他已经鉴定的结构蛋白 | 第24-25
页 |
| · VP35 | 第24-25
页 |
| · VP466 | 第25
页 |
| · VP281 | 第25
页 |
| · 胶原蛋白 | 第25
页 |
| · WSSV结构蛋白的糖基化修饰研究 | 第25-26
页 |
| · WSSV的转录和复制相关的蛋白 | 第26-27
页 |
| · WSSV启动子序列特征 | 第27
页 |
| · 对虾白斑病毒基因组的比较 | 第27-28
页 |
| · WSSV与细胞凋亡 | 第28-29
页 |
| · WSSV的检测 | 第29-31
页 |
| · PCR检测 | 第29-30
页 |
| · 核酸杂交检测 | 第30
页 |
| · 用特异性抗体检测WSSV | 第30-31
页 |
| · 其他检测技术 | 第31
页 |
| · 结语与展望 | 第31-32
页 |
| 第二章 综述：噬菌体展示技术 | 第32-64
页 |
| · 噬菌体展示技术的基本原理 | 第32-37
页 |
| · 丝状噬菌体的生物学特征 | 第32-34
页 |
| · 丝状噬菌体的生活周期 | 第34-35
页 |
| · 噬菌体展示的基本原理 | 第35-37
页 |
| · 其他噬菌体展示系统 | 第37-40
页 |
| · T4噬菌体展示系统 | 第37-38
页 |
| · λ噬菌体展示系统 | 第38-40
页 |
| · T7噬菌体展示系统 | 第40
页 |
| · 噬菌体展示文库的构建 | 第40-42
页 |
| · 噬菌体展示多肽文库的构建 | 第41
页 |
| · 噬菌体展示抗体文库的构建 | 第41-42
页 |
| · 噬菌体展示文库的筛选方法 | 第42-46
页 |
| · 以分子为筛选靶标 | 第42-43
页 |
| · 以单一蛋白质为筛选靶标 | 第42-43
页 |
| · 以核酸为筛选靶标 | 第43
页 |
| · 以复合分子为筛选靶标 | 第43
页 |
| · 以细胞作为筛选靶标 | 第43-44
页 |
| · 以组织或器官作为筛选靶标 | 第44
页 |
| · 一些新的筛选方法 | 第44-46
页 |
| 2.4.4.1 以DNA为基础的筛选方法(DNA-based selection) | 第44-45
页 |
| 2.4.4.2 反复淘洗和封闭法(interactive panning and blocking, IPAB) | 第45
页 |
| 2.4.4.3 选择性感染噬菌体法(selectively infective phage, SIP) | 第45
页 |
| 2.4.4.4 亲和力捕获筛选法(selection by avidity capture, SAC) | 第45-46
页 |
| · 噬菌体展示系统的应用 | 第46-56
页 |
| · 噬菌体抗体库技术与抗体工程 | 第46-49
页 |
| · 蛋白质工程 | 第49-53
页 |
| · 酶工程 | 第50-51
页 |
| · 新蛋白质的发现和蛋白质的改造 | 第51-53
页 |
| · 新受体和配体的发现 | 第51-52
页 |
| · 蛋白质的定向设计和空间结构改造 | 第52-53
页 |
| · 蛋白质之间的互作研究 | 第53
页 |
| · 用于新药筛选和疾病的诊断治疗 | 第53-56
页 |
| · 用作诊断试剂的开发 | 第54
页 |
| · 用于传染病和肿瘤的防治 | 第54-55
页 |
| · 用作疾病的基因治疗载体 | 第55
页 |
| · 用于疫苗的开发和研制 | 第55-56
页 |
| · 噬菌体展示系统的拓展——其他表面展示系统 | 第56-62
页 |
| · 杆状病毒表面展示系统 | 第56-59
页 |
| · 细菌表面展示系统 | 第59-60
页 |
| · 酵母表面展示系统 | 第60-61
页 |
| · 体外展示技术 | 第61-62
页 |
| 2.6.4.1 共价展示技术(covalentdisplay technique, CDT) | 第61-62
页 |
| 2.6.4.2 多聚体展示技术(polysome display) | 第62
页 |
| 2.6.4.3 RNA-多肽融合系统(RNA-peptide fusions) | 第62
页 |
| · 结语 | 第62-63
页 |
| · 本论文的研究背景和研究目的 | 第63-64
页 |
| 第三章 研究方法 | 第64-73
页 |
| · 质粒DNA的制备和纯化 | 第64-65
页 |
| · 质粒DNA的小量制备 | 第64
页 |
| · 质粒DNA的大量制备 | 第64-65
页 |
| · DNA的溴化乙锭—氯化铯浮力密度梯度离心纯化 | 第65
页 |
| · 限制性酶消化反应 | 第65
页 |
| · 载体去磷酸化 | 第65-66
页 |
| · 从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第66-67
页 |
| · 玻璃奶法 | 第66
页 |
| · 低熔点琼脂糖法 | 第66-67
页 |
| · DNA连接反应 | 第67
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第67-68
页 |
| · 氯化钙法 | 第67
页 |
| · 电转化法 | 第67-68
页 |
| · 病毒的增殖、分离和提纯 | 第68-69
页 |
| · 毒源制备及病毒在螯虾中增殖 | 第68
页 |
| · 病毒的提取与纯化 | 第68-69
页 |
| · 原代虾细胞培养 | 第69
页 |
| · 噬菌体展示技术 | 第69-71
页 |
| · 文库的淘洗 | 第69-70
页 |
| · 文库噬菌体的拯救 | 第70
页 |
| · ELISA和测序 | 第70-71
页 |
| · 空斑减少中和试验 | 第71
页 |
| · 膜蛋白的抽提 | 第71-72
页 |
| 3.12 Western blot分析 | 第72
页 |
| · 激光共聚焦显微镜 | 第72-73
页 |
| 第四章 对虾的原代细胞培养及白斑病毒对原代细胞的感染 | 第73-82
页 |
| · 引言 | 第73
页 |
| · 材料与方法 | 第73-75
页 |
| · 材料 | 第73
页 |
| · 研究方法 | 第73-75
页 |
| 4.2.2.1.毒源制备及病毒在螯虾中增殖 | 第73-74
页 |
| · 病毒的提取与纯化 | 第74
页 |
| · 原代虾细胞培养 | 第74
页 |
| · TCID50测定 | 第74-75
页 |
| · MTT法检测细胞存活 | 第75
页 |
| · 电镜负染 | 第75
页 |
| · 病毒感染细胞的超薄切片电镜观察 | 第75
页 |
| · 研究结果 | 第75-80
页 |
| · 类淋巴组织可成功地培养对虾原代细胞 | 第75-76
页 |
| · TCID50法对病毒的滴定结果 | 第76-77
页 |
| · MTT法滴定结果 | 第77-79
页 |
| · 电镜负染结果 | 第79
页 |
| · 细胞超薄切片显示病毒存在于感染细胞内 | 第79-80
页 |
| · 讨论 | 第80-82
页 |
| 第五章 囊膜蛋白VP28在WSSV感染中的功能鉴定 | 第82-103
页 |
| · 引言 | 第82-84
页 |
| · 材料 | 第84-85
页 |
| · 试剂 | 第84
页 |
| · 载体 | 第84
页 |
| · 引物 | 第84-85
页 |
| · 菌株和实验动物 | 第85
页 |
| · 试验方法 | 第85-90
页 |
| · 病毒的生产和纯化 | 第85
页 |
| · 重组质粒的构建 | 第85-87
页 |
| · 重组蛋白的表达和纯化 | 第87
页 |
| · VP28多克隆抗体的制备 | 第87-88
页 |
| · 原代虾细胞培养 | 第88
页 |
| · 病毒感染实验 | 第88
页 |
| · VP28-EGFP融合蛋白与细胞结合试验 | 第88
页 |
| 5.3.8 膜蛋白的抽提和Western blot分析 | 第88-89
页 |
| · 激光共聚焦显微镜观察VP28-EGFP融合蛋白与细胞的结合 | 第89
页 |
| · 竞争性ELISA | 第89-90
页 |
| · 病毒感染和抗体阻断试验 | 第90
页 |
| · 研究结果 | 第90-99
页 |
| · 重组表达质粒pET28+28和pET28+28G的鉴定 | 第90-92
页 |
| · 重组蛋白VP28和VP28-EGFP的表达和纯化 | 第92-93
页 |
| · VP28与对虾细胞膜的结合能力与pH有关 | 第93-95
页 |
| 5.4.4.VP28从细胞膜向细胞质的运输 | 第95-97
页 |
| 5.4.5.VP28与WSSV竞争性结合对虾原代细胞 | 第97-98
页 |
| 5.4.6.VP28多克隆抗体阻断了WSSV对细胞的感染 | 第98-99
页 |
| · 讨论 | 第99-103
页 |
| 第六章 与对虾白斑病毒特异性结合的噬菌体展示单链抗体的淘洗 | 第103-116
页 |
| · 引言 | 第103-104
页 |
| · 材料与方法 | 第104-108
页 |
| · 实验材料 | 第104-105
页 |
| · 病毒来源 | 第104
页 |
| · 试验动物 | 第104
页 |
| · 文库、质粒和菌体 | 第104
页 |
| · 试剂等材料 | 第104-105
页 |
| · 实验方法 | 第105-108
页 |
| · 病毒的增殖、分离和提纯 | 第105
页 |
| · 噬菌体抗体展示文库的扩增 | 第105
页 |
| · 将噬菌体展示文库转化成噬菌体形式 | 第105
页 |
| · 文库噬菌体的滴定 | 第105-106
页 |
| · 在免疫管中筛选(panning) | 第106
页 |
| · 辅助噬菌体KM13的扩增、培养和滴定 | 第106-107
页 |
| · 文库噬菌体的拯救 | 第107
页 |
| 6.2.2.8 单克隆phage ELISA | 第107-108
页 |
| · 抗体基因片段的序列测定 | 第108
页 |
| · 结果 | 第108-114
页 |
| · WSSV特异性抗体的亲和筛选 | 第108-109
页 |
| · 阳性噬菌体展示抗体的特异性评价 | 第109
页 |
| · 抗体的序列及其分析 | 第109-114
页 |
| · 讨论 | 第114-116
页 |
| 研究总结 | 第116-118
页 |
| 参考文献 | 第118-140
页 |
| 已发表和待发表的论文 | 第140-141
页 |
| 致谢 | 第141-142
页 |
