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玉米抗穗粒腐病差异表达基因的分离及其功能分析

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玉米抗穗粒腐病差异表达基因的分离及其功能分析
论文目录
 
摘要第1-12页
ABSTRACT第12-17页
1 文献综述第17-47页
  · 玉米穗腐病简介第17-21页
    · 玉米穗腐病的发生与危害第17-18页
    · 病原学研究进展第18-19页
    · 发病症状及病级第19页
      · 发病症状第19页
      · 病级标准第19页
    · 病原菌侵染规律及发病规律第19-20页
      · 侵染规律第19-20页
      · 发病规律第20页
    · 毒素危害及防治第20-21页
      · 毒素危害第20-21页
      · 防治策略第21页
  · 玉米穗粒腐病的组织病理学及生理生化第21-23页
    · 病菌病害的组织病理学第21-22页
    · 抗病生理生化的变化第22-23页
  · 抗源鉴定和抗性遗传关系第23-25页
    · 玉米穗粒腐病抗源鉴定第23-24页
    · 抗穗腐病QTL定位研究第24-25页
  · 米穗粒腐病抗病分子机制研究第25-26页
  · 植物抗病性研究及抗病分子机理第26-38页
    · 植物抗病性研究第26-27页
      · 病原的致病作用第26页
      · 植物抗病性的表现第26-27页
      · 植物抗病性的遗传基础第27页
    · 植物抗病抗病分子机理第27-32页
      · 病原物激发子(elicitor)第28页
      1.5.2.2 病原物无毒基因(avirulence gene,avr基因)第28-29页
      · 植物抗病基因(R基因)第29-31页
      1.5.2.4 植物防卫基因(defense gene)第31-32页
      · 植物-病原物非亲和互作机制的模式第32页
    · 植物防卫反应第32-35页
      · 木质素(lignin)第33页
      1.5.3.2 过敏性反应(hypersensitive reaction,HR)第33-34页
      1.5.3.3 系统性抗性(systemic acquired resistance,SAR)第34-35页
      1.5.3.4 细胞程序化死亡(programmed cell death,PCD)第35页
    · 防卫反应信号传导第35-38页
      · Ca~(2+)信使第35-36页
      · 一氧化氮(NO)信号分子第36页
      · 水杨酸(SA)信号传导途径第36页
      · 烯和茉莉酸信号传导途径第36-37页
      · 活性氧信号分子(ROS)第37-38页
  · 抗病基因克隆与功能基因组学第38-44页
    · 抗病基因克隆方法第38-39页
      1.6.1.1 功能克隆(Functional Cloning)第38页
      1.6.1.2 定位克隆(Positional Cloning)第38页
      1.6.1.3 序列克隆(Sequence Cloning)第38页
      1.6.1.4 表型克隆(Phenotype Cloning)第38-39页
    · 功能基因组学第39-44页
      · 转座子标签技术和T-DNA标签技术第39页
      1.6.2.2 鸟枪克隆法(Shotgun Cloning)第39-40页
      · mRNA差异显示第40页
      · 代表性差异显示技术第40页
      · RGA技术第40-41页
      · 抑制性消减杂交技术第41-43页
      · 基因芯片技术及其应用第43-44页
  · 结合SSH和cDNA芯片技术在植物抗病基因筛选中的应用第44-45页
  1.8 分子功能注释(Molecular annotation system)第45-47页
2 研究目的及意义第47-48页
3 技术路线第48-49页
4 材料及方法第49-56页
  · 实验材料第49页
    · 玉米材料第49页
    · 病原菌的来源和制备第49页
  · 实验方法第49-56页
    · 接种鉴定方法第49页
    · 抗病资源筛选第49-50页
    · 生理生化指标测定第50-51页
      · PAL、POD、SOD及MDA活性分析第50页
      · POD同工酶谱分析第50-51页
    · 扫描电镜观察侵染病菌的组织病理学变化第51页
    · 总RNA的提取、mRNA的分离和cDNA合成第51页
      · 总RNA的提取、检测第51页
      · mRNA的分离纯化第51页
      · cDNA合成第51页
    · 抑制性差减杂交第51-53页
      · 引物和接头序列第51-52页
      4.2.6.2 双链cDNA RsaⅠ酶切第52页
      · 接头连接第52页
      · 二次差减杂交反应第52页
      · 二次抑制PCR第52-53页
    · 二次PCR产物的纯化回收第53页
    · 差减文库的构建第53页
    · 文库插入片段的检测第53页
    · 反向Northern筛选差异表达基因第53页
    · 测序及EST序列功能推测第53-54页
    · 生物芯片筛选第54页
    4.2.13 GO注释(Gene Ontology)第54页
    · 差异表达序列与抗玉米穗粒腐病QTL的共定位分析第54页
    · RT-PCR验证第54-56页
5 结果与分析第56-102页
  · 玉米穗粒腐病抗性表现第56页
  · 穗粒腐病病菌侵入过程的电镜观察第56-59页
  · 接种后发病植株表现第59-60页
  · 生理生化指标测定第60-63页
    · 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化分析第60-61页
    · 过氧化物酶(POD)活性变化分析第61页
    · 超氧化物酶(SOD)活性变化分析第61-62页
    · 丙二醛(MDA)活性变化分析第62-63页
    · 接种后过氧化物酶POD同工酶谱变化第63页
  · RNA的提取及mRNA的纯化第63-64页
  · 抑制性差减杂交的结果第64-66页
    5.6.1 cDNA双链合成、Rsa Ⅰ酶切及接头连接第64-65页
    · 消减杂交与抑制PCR第65-66页
  · 抑制性消减杂交文库的构建第66-67页
    · T/A克隆与文库构建第66-67页
    · 文库插入片段的检测第67页
  · 文库的反向Northern杂交筛选第67-69页
  · 阳性克隆的测序和生物信息学功能比对分析第69-74页
  · 生物芯片筛选第74-81页
    · RNA的提取及检测第74-75页
    · Affymetrix玉米全基因组生物芯片杂交第75-77页
    · 差异表达基因的生物信息学功能分析第77-81页
  · 结合SSH和生物芯片筛选的差异表达基因第81-82页
  5.12 GO分子功能注释(Gene Ontology)第82-91页
  · 差异表达序列与玉米穗粒腐病抗性QTL的共定位分析第91-96页
  · RT-PCR验证功能基因在不同时间段的表达第96-102页
    · SSH文库中差异表达基因的RT-PCR验证第96-98页
    · 生物芯片中差异表达基因的RT-PCR验证第98-102页
6 讨论第102-128页
  · 材料及致病菌的选择第102-103页
  · 玉米穗粒腐病抗病资源的发掘和筛选第103页
  · 玉米穗粒腐病病菌接种后菌丝侵染变化第103-105页
  · 玉米感穗粒腐病的生理生化变化第105-106页
  · SSH与与生物芯片技术相结合研究第106-109页
  · 玉米穗粒腐病差异表达基因的功能分析第109-124页
    · 参与抗病与防御基因第110-113页
    · 参与初级、次级和能量代谢基因第113-115页
    · 参与信号转导基因第115-118页
    · 参与转录调控基因第118-120页
    · 参与活性氧基因第120-123页
    · 参与穗粒腐病抗病反应其他功能基因第123-124页
  · 玉米穗粒腐病抗病机制探讨第124-126页
  · 今后的研究方向第126-128页
7 结论第128-129页
参考文献第129-143页
致谢第143-144页
附录1:分子生物学试验方法第144-155页
附录2:博士在读期间文章情况第155 页

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