论文目录 | |
本论文的创新点 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
常用缩写 | 第11-16页 |
第一章 前言 | 第16-33页 |
1. VHL研究概况 | 第16-31页 |
1.1 VHL相关疾病 | 第16-17页 |
1.2 VHL疾病的临床分类及其致病原因 | 第17-19页 |
1.3 VHL基因及其蛋白质的结构 | 第19-20页 |
1.4 VHL的细胞定位 | 第20-21页 |
1.5 VHL蛋白质的转录后修饰 | 第21-26页 |
1.6 VHL蛋白质的功能 | 第26-31页 |
2. VHL与WNT通路 | 第31页 |
3. VHL疾病的治疗 | 第31-32页 |
4. 本论文研究的目的和意义 | 第32-33页 |
第二章 一种改进的酵母双杂交方法的建立 | 第33-51页 |
1. 酵母双杂交方法介绍 | 第33-35页 |
2. 材料 | 第35-36页 |
2.1 质粒和菌种 | 第35页 |
2.2 主要试剂和试剂盒 | 第35-36页 |
2.3 试剂配方 | 第36页 |
3. 方法 | 第36-44页 |
3.1 bait pGBKT7-VHL构建 | 第36-40页 |
3.2 用pGBKT7-VHL在人脑cDNA文库中筛选相互作用的蛋白质 | 第40-44页 |
4. 结果 | 第44-47页 |
4.1 pGBKT7-VHL的构建 | 第44页 |
4.2 酵母双杂交筛选到的猎物的PCR验证 | 第44-45页 |
4.3 酵母双杂交筛选到的猎物对应的基因及其蛋白质区段 | 第45-46页 |
4.4 酵母双杂交筛选到的猎物回转验证 | 第46-47页 |
5. 讨论 | 第47-51页 |
5.1 用酵母双杂交筛选VHL互作蛋白的原因以及新构建的酵母双杂交系统的优缺点 | 第47-48页 |
5.2 对筛到的猎物与VHL互作的功能分析 | 第48-51页 |
第三章 VHL促进Dvl2 K301位发生K48位泛素化降解 | 第51-67页 |
1. WNT通路与DVL关系的介绍 | 第51-56页 |
1.1 WNT通路介绍 | 第51页 |
1.2 Dvl蛋白质的结构 | 第51-53页 |
1.3 Dvl蛋白质的功能 | 第53-54页 |
1.4 Dvl的磷酸化调控 | 第54-55页 |
1.5 Dvl的稳定性调控 | 第55页 |
1.6 Dvl缺失小鼠模型 | 第55-56页 |
2. 材料 | 第56-59页 |
2.1 菌种和细胞系 | 第56页 |
2.2 抗体、转染试剂和化学试剂 | 第56-57页 |
2.3 引物和载体构建 | 第57-59页 |
3. 方法 | 第59-63页 |
3.1 构建定点突变和缺失突变以及干涉载体反向PCR的具体操作 | 第59-60页 |
3.2 哺乳动物细胞系的传代培养 | 第60页 |
3.3 细胞冻存 | 第60页 |
3.4 细胞复苏 | 第60-61页 |
3.5 哺乳动物细胞的转染(表达用) | 第61页 |
3.6 免疫共沉淀实验 | 第61-62页 |
3.7 蛋白质电泳、Westernblot和泛素化检测 | 第62页 |
3.8 报告基因分析 | 第62-63页 |
4. 结果 | 第63-65页 |
4.1 VHL介导Dvl2的K301发生泛素分子K48位的泛素化而不是K63位的泛素化 | 第63-64页 |
4.2 VHL通过下调Dvl2的表达来降低LEF启动子活性 | 第64-65页 |
5. 讨论 | 第65-67页 |
第四章 VHL调控AR通路的分子机制 | 第67-99页 |
1. UXT蛋白质的研究概况 | 第67-76页 |
1.1 雄性激素受体(AR) | 第70-73页 |
1.2 AR与前列腺癌 | 第73-74页 |
1.3 蛋白质的核质穿梭 | 第74-76页 |
2. 材料 | 第76-79页 |
2.1 菌种和细胞系 | 第76页 |
2.2 抗体、转染试剂和化学试剂 | 第76-77页 |
2.3 试剂配方 | 第77页 |
2.4 引物和载体构建 | 第77-79页 |
3. 方法 | 第79-81页 |
3.1 常规的分子和细胞操作 | 第79页 |
3.2 GST Pulldown实验 | 第79-80页 |
3.3 免疫荧光定位分析 | 第80-81页 |
3.4 细胞核质分离实验 | 第81页 |
4. 结果 | 第81-96页 |
4.1 酵母双杂交验证UXT与VHL互作 | 第81-82页 |
4.2 UXT与VHL在体外和体内的相互作用 | 第82-86页 |
4.3 VHL与UXT互作的区域的确定 | 第86页 |
4.4 大转录本UXT-V1和小转录本与VHL的互作 | 第86-87页 |
4.5 大转录本UXT-V1和小转录本与AR互作,并不依赖于配体雄激素DHT | 第87-88页 |
4.6 VHL与雄激素受体AR互作 | 第88-89页 |
4.7 VHL诱导AR泛素化 | 第89-93页 |
4.8 VHL调控AR转录激活活性 | 第93-96页 |
5. 讨论 | 第96-99页 |
研究总结 | 第99-100页 |
参考文献 | 第100-110页 |
博士期间发表文章 | 第110-111页 |
致谢 | 第111-112页 |