论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-21页 |
主要符号表 | 第21-26页 |
1 绪论 | 第26-53页 |
1.1 动脉粥样硬化概述 | 第26-27页 |
1.2 动脉粥样硬化的发病机理 | 第27-29页 |
1.3 氧化低密度脂蛋白与动脉粥样硬化 | 第29-35页 |
1.3.1 氧化低密度脂蛋白的形成 | 第29-31页 |
1.3.2 oxLDL的致病性 | 第31-33页 |
1.3.3 oxLDL氧化衍生物与动脉粥样硬化 | 第33-35页 |
1.4 巨噬细胞泡沫化在动脉粥样硬化中的作用 | 第35-45页 |
1.4.1 巨噬细胞的由来及分型 | 第35-36页 |
1.4.2 巨噬细胞的泡沫化过程 | 第36-37页 |
1.4.3 清道夫受体CD36的研究现状 | 第37-41页 |
1.4.4 清道夫受体LOX-1的研究现状 | 第41-43页 |
1.4.5 脂筏蛋白Caveolin-1的研究现状 | 第43-45页 |
1.5 胆固醇逆转运作用 | 第45-49页 |
1.5.1 胆固醇逆转运过程 | 第45-47页 |
1.5.2 ABCA1的研究现状 | 第47-49页 |
1.6 动脉粥样硬化的治疗策略 | 第49-51页 |
1.7 本文的研究思路 | 第51-53页 |
2 新型配体oxLig-1介导oxLDL与CD36及LOX-1的结合作用 | 第53-70页 |
2.1 引言 | 第53页 |
2.2 实验材料与仪器 | 第53-56页 |
2.2.1 实验材料与试剂 | 第53-55页 |
2.2.2 试剂配制 | 第55-56页 |
2.3 实验方法 | 第56-60页 |
2.3.1 分子对接模拟 | 第56页 |
2.3.2 LDL的体外氧化修饰 | 第56-57页 |
2.3.3 oxLig-1的化学合成 | 第57-58页 |
2.3.4 ELISA方法分析CD36及LOX-1与oxLig-1的结合活性 | 第58-59页 |
2.3.5 ELISA分析oxLig-1在oxLDL与CD36及LOX-1结合过程中的作用 | 第59页 |
2.3.6 通过表面等离子共振技术分析oxLig-1与CD36的结合力强弱 | 第59-60页 |
2.3.7 数据统计学分析 | 第60页 |
2.4 结果与讨论 | 第60-69页 |
2.4.1 oxLig-1与CD36结合作用的分子对接分析 | 第60-61页 |
2.4.2 ELISA方法分析oxLig-1与CD36的结合机制 | 第61-63页 |
2.4.3 表面等离子共振技术分析oxLig-1与CD36的结合力强弱 | 第63-65页 |
2.4.4 oxLig-1与LOX-1结合作用的分子对接分析 | 第65-66页 |
2.4.5 ELISA方法分析oxLig-1与LOX-1的结合机制 | 第66-69页 |
2.5 本章小结 | 第69-70页 |
3 慢病毒介导的CD36及LOX-1基因沉默细胞株的构建 | 第70-95页 |
3.1 引言 | 第70页 |
3.2 实验材料和仪器 | 第70-74页 |
3.2.1 细胞株与菌株来源 | 第70-71页 |
3.2.2 试剂和仪器 | 第71-73页 |
3.2.3 试剂配制 | 第73-74页 |
3.3 实验方法 | 第74-88页 |
3.3.1 J774a.1与293T细胞的复苏与培养 | 第74-75页 |
3.3.2 Total RNA的提取 | 第75页 |
3.3.3 RT-PCR | 第75-76页 |
3.3.4 CD36及LOX-1目的基因的调取 | 第76-77页 |
3.3.5 CD36及LOX-1目的基因的切胶回收 | 第77-78页 |
3.3.6 CD36及LOX-1目的基因的TA克隆 | 第78-79页 |
3.3.7 CD36及LOX-1目的基因片段亚克隆至psiCHECK~(TM)-Ⅱ质粒 | 第79-81页 |
3.3.8 CD36-shRNA与LOX-1-shRNA序列设计及慢病毒干扰载体的构建 | 第81-82页 |
3.3.9 有效shRNA干扰序列的筛选 | 第82-84页 |
3.3.10 慢病毒的包装 | 第84页 |
3.3.11 慢病毒的浓缩与纯化 | 第84-85页 |
3.3.12 嘌呤霉素有效致死浓度的筛选 | 第85页 |
3.3.13 Polygreen转染增强剂浓度筛选 | 第85页 |
3.3.14 J774a.1细胞的慢病毒侵染及稳转细胞株的筛选 | 第85-86页 |
3.3.15 Western blotting分析 | 第86-87页 |
3.3.16 激光共聚焦检测CD36、LOX-1与oxLig-1共定位情况 | 第87-88页 |
3.3.17 数据统计学分析 | 第88页 |
3.4 结果与讨论 | 第88-93页 |
3.4.1 CD36与LOX-1基因调取及亚克隆 | 第88页 |
3.4.2 CD36与LOX-1干扰序列的筛选 | 第88-91页 |
3.4.3 Western blot分析稳转基因沉默细胞株干扰效率 | 第91页 |
3.4.4 细胞水平分析oxLig-1与CD36、LOX-1的结合作用 | 第91-93页 |
3.4.5 细胞水平上分析ω-COOH在oxLig-1与CD36、LOX-1结合过程中的作用 | 第93页 |
3.5 本章小结 | 第93-95页 |
4 oxLig-1与CD36的结合作用对oxLDL吞噬摄取过程的影响 | 第95-118页 |
4.1 引言 | 第95页 |
4.2 实验材料和仪器 | 第95-96页 |
4.3 实验方法 | 第96-100页 |
4.3.1 细胞培养 | 第96页 |
4.3.2 激光共聚焦分析Caveolin-1在oxLDL摄取过程中的作用 | 第96页 |
4.3.3 siRNA瞬时转染 | 第96-97页 |
4.3.4 Western blotting分析 | 第97页 |
4.3.5 CD36、LOX-1、Caveolin-1在巨噬细胞胆固醇蓄积过程中的作用.. | 第97页 |
4.3.6 MTT实验检测药物刺激对细胞活力的影响 | 第97-98页 |
4.3.7 oxLig-1、me-oxLig-1药物刺激作用对Caveolin-1蛋白表达的影响. | 第98页 |
4.3.8 oxLig-1、me-oxLig-1药物刺激作用对Caveolin-1细胞内分布的影响 | 第98页 |
4.3.9 免疫共沉淀 | 第98-99页 |
4.3.10 oxLig-1、me-oxLig-1药物刺激作用对Fyn、JNK、ERK以及NF-κBp65磷酸化的影响 | 第99页 |
4.3.11 oxLig-1、me-oxLig-1药物刺激作用对NF-κB p65入核作用的影响 | 第99-100页 |
4.3.12 蛋白激酶抑制剂预处理对Caveolin-1蛋白表达的影响 | 第100页 |
4.3.13 数据统计学分析 | 第100页 |
4.4 结果与讨论 | 第100-117页 |
4.4.1 CD36以及Caveolin-1的基因沉默对胆固醇酯蓄积作用的影响 | 第100-102页 |
4.4.2 Caveolin-1在oxLDL吞噬摄取过程中的作用 | 第102页 |
4.4.3 oxLig-1与CD36的结合作用对Caveolin-1膜向移位和聚集的影响 | 第102-105页 |
4.4.4 oxLig-1与CD36的结合作用对Caveolin-1蛋白表达的影响 | 第105-109页 |
4.4.5 CD36-Src-JNK/ERK信号传导通路对Caveolin-1蛋白表达的调控作用 | 第109-112页 |
4.4.6 核转录因子NF-κB在oxLig-1诱导的Caveolin-1蛋白表达过程中的作用 | 第112-117页 |
4.5 本章小结 | 第117-118页 |
5. oxLig-1与LOX-1的结合作用对胆固醇逆转运作用的影响 | 第118-133页 |
5.1 引言 | 第118页 |
5.2 实验材料和仪器 | 第118-119页 |
5.3 实验方法 | 第119-122页 |
5.3.1 细胞培养 | 第119页 |
5.3.2 PPARy双荧光素酶报告基因检测模型的建立 | 第119-120页 |
5.3.3 激光共聚焦检测LOX-1过表达情况 | 第120页 |
5.3.4 Western blotting分析 | 第120页 |
5.3.5 oxLig-1的刺激作用对PPARγ转录活性的影响 | 第120页 |
5.3.6 LOX-1在PPARγ激活过程中的作用 | 第120-121页 |
5.3.7 oxLig-1、me-oxLig-1药物刺激作用对LXRα、ABCA1、LOX-1蛋白表达的影响 | 第121页 |
5.3.8 蛋白激酶抑制剂预处理对LXRα及ABCA1蛋白表达的影响 | 第121页 |
5.3.9 siRNA瞬时转染 | 第121-122页 |
5.3.10 数据统计学分析 | 第122页 |
5.4 结果与讨论 | 第122-132页 |
5.4.1 oxLig-1与LOX-1的结合作用对ABCA1蛋白表达的影响 | 第122-125页 |
5.4.2 oxLig-1与LOX-1的结合作用对PPARγ激活的影响 | 第125-127页 |
5.4.3 oxLig-1与LOX-1的结合作用对LXRα蛋白表达的影响 | 第127-129页 |
5.4.4 oxLig-1与LOX-1的结合作用经由PPARy-LXRα-ABCA1信号传导通路上调ABCA1的蛋白表达 | 第129-132页 |
5.5 本章小结 | 第132-133页 |
6 结论与展望 | 第133-135页 |
6.1 结论 | 第133页 |
6.2 创新点 | 第133-134页 |
6.3 展望 | 第134-135页 |
参考文献 | 第135-147页 |
附录 | 第147-152页 |
作者简介 | 第152页 |
攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第152-154页 |
致谢 | 第154页 |