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水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究

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水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究
论文目录
 
论文创新点第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-39页
  1.1 VSV的病毒学属性第13-14页
  1.2 VSV的致病机理及临床症状第14-15页
  1.3 VSV的病毒粒子的形态及结构第15-19页
    1.3.1 VSV的病毒粒子结构第15-16页
    1.3.2 VSV编码的病毒蛋白及功能第16-19页
  1.4 VSV的复制周期第19-21页
  1.5 VSV基因的转录第21-28页
    1.5.1 VSV基因的转录是有顺序的第21-22页
    1.5.2 VSV基因的转录是有极性的第22页
    1.5.3 VSV mRNA特殊的加帽机制第22页
    1.5.4 VSV的转录起始位点第22-25页
    1.5.5 转录的顺式作用元件第25-27页
    1.5.6 VSV基因转录的终止序列第27-28页
  1.6 VSV基因组的复制第28-29页
  1.7 VSV RNA的合成与包涵体的形成第29-31页
    1.7.1 细胞中VSV RNA合成的定位第29-30页
    1.7.2 微管依赖的RNA运输第30页
    1.7.3 包涵体的形成第30-31页
  1.8 VSV的微基因组复制子第31-34页
    1.8.1 DI颗粒第31-32页
    1.8.2 编码病毒结构蛋白的微基因组复制子第32-33页
    1.8.3 编码氯霉素乙酰转移酶的微基因组复制子第33-34页
  1.9 反向遗传学与重组水泡性口炎病毒第34-37页
    1.9.1 反向遗传学系统第34-36页
    1.9.2 重组VSV的获得第36-37页
  1.10 VSV在医学上的应用第37-39页
    1.10.1 VSV作为疫苗载体第37页
    1.10.2 VSV作为溶瘤病毒第37-39页
    1.10.3 VSV作为治疗用病毒的优势第39页
  1.11 本论文的研究计划第39页
2 实验材料与方法第39-55页
  2.1 实验材料第39-43页
    2.1.1 实验仪器第39-40页
    2.1.2 实验试剂及耗材第40-43页
  2.2 分子生物学实验技术第43-50页
    2.2.1 质粒提取第43-44页
    2.2.2 聚合酶链式反应(PCR)第44-45页
    2.2.3 限制性内切酶反应第45页
    2.2.4 DNA回收第45-46页
    2.2.5 DNA片段与载体连接反应第46页
    2.2.6 质粒及DNA连接产物转化第46页
    2.2.7 哺乳动物细胞RNA的抽提第46-47页
    2.2.8 逆转录第47页
    2.2.9 基因定点突变第47-48页
    2.2.10 荧光定量PCR第48页
    2.2.11 蛋白免疫印迹第48-50页
    2.2.12 GST pulldown第50页
  2.3 酵母双杂交实验第50-51页
  2.4 细胞实验技术第51-55页
    2.4.1 细胞传代培养第51页
    2.4.2 细胞冻存与复苏第51-52页
    2.4.3 细胞转染第52页
    2.4.4 CAT酶联免疫吸附测定第52-53页
    2.4.5 免疫共沉淀第53页
    2.4.6 氯化铯密度梯度离心第53-54页
    2.4.7 重组VSV病毒的包装第54-55页
3 实验结果第55-77页
  3.1 N蛋白氨基端的氨基酸在病毒复制转录中起着重要作用第55-69页
    3.1.1 实验设计第55-56页
    3.1.2 N蛋白氨基端点突变对CAT报告基因表达的影响第56-57页
    3.1.3 N蛋白氨基端的氨基酸对于CATminigenome的复制转录都非常重要第57-59页
    3.1.4 N_(4-6A3),N_(7-9A3),N_(13-15A3)和N_(R7A)这几个突变体保持了N-N,N-P间的相互作用第59-60页
    3.1.5 N_(4-6A3),N_(7-9A3),N_(13-15A3)和N_(R7A)保持特异性结合病毒基因组RNA的能力第60-62页
    3.1.6 N_(4-6A3),N_(7-9A3),N_(13-15A3)和N_(R7A)不能保护基因组RNA免受核酶的消化第62-63页
    3.1.7 N_(4-6A3),N_(7-9A3),N_(13-15A3)和N_(R7A)不能有效地形成包涵体第63-65页
    3.1.8 N_(4-6A3),N_(7-9A3),N_(13-15A3)在minigenome报告系统中有Dominantnegative的效应第65-66页
    3.1.9 基因组的N基因上带有点突变的重组VSV的包装第66-67页
    3.1.10 从结构上分析N蛋白氨基端的臂在N-RNA复合体中的重要作用第67-69页
  3.2 P蛋白氨基端60,62,64位氨基酸在病毒转录复制中的重要作用第69-77页
    3.2.1 实验设计第69-70页
    3.2.2 P3A不能支持VSV minigenome的复制与转录第70-71页
    3.2.3 P3A仍然能够寡聚化第71-73页
    3.2.4 P3A依然可以与N,L相互作用第73页
    3.2.5 P蛋白氨基端磷酸化的缺失不影响其在细胞中的定位第73-74页
    3.2.6 P3A无法指导N蛋白特异性识别病毒基因组RNA第74-77页
4 讨论与展望第77-82页
  4.1 N蛋白上的关键氨基酸突变后对病毒复制转录的影响第77-79页
  4.2 P蛋白氨基端磷酸化缺失对病毒复制转录的影响第79-81页
  4.3 总结第81-82页
5 参考文献第82-88页
攻博期间发表的科研成果目录第88-89页
致谢第89页

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