论文目录 | |
| 本论文的创新点 | 第1-6页 |
| 常用缩写 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-33页 |
| 1 人副流感病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.1 人副流感病毒的发现及其分类 | 第14页 |
| 1.2 人副流感病毒3型的流行病学 | 第14页 |
| 1.3 人副流感病毒3型的形态结构 | 第14-15页 |
| 2 HPIV3的生物学特性 | 第15-25页 |
| 2.1 HPIV3的基因结构 | 第15-16页 |
| 2.2 HPIV3各蛋白简介 | 第16-17页 |
| 2.3 HPIV3的生活史 | 第17-22页 |
| 2.4 负链RNA病毒的反向遗传学 | 第22-23页 |
| 2.5 HPIV3的微基因检测 | 第23-25页 |
| 3 N蛋白与P蛋白相互作用的研究 | 第25-31页 |
| 3.1 N蛋白与P蛋白结构、功能的介绍 | 第25-27页 |
| 3.2 N-P相互作用与病毒的转录和复制 | 第27-30页 |
| 3.3 N蛋白与P蛋白相互作用研究现状 | 第30-31页 |
| 4 病毒包涵体的研究 | 第31-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-57页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 菌种和细胞 | 第33页 |
| 1.2 主要的酶系统及试剂 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-57页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第34-41页 |
| 2.2 细胞培养及转染 | 第41-44页 |
| 2.3 HPIV3微基因组的检测分析 | 第44-45页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹(Western blot)分析 | 第45-46页 |
| 2.5 细胞裂解液和细胞沉淀的检测 | 第46-47页 |
| 2.6 体内免疫共沉淀 | 第47-48页 |
| 2.7 CsCl超速离心纯化N-RNA | 第48-49页 |
| 2.8 苯酚-氯仿-异戊醇抽提RNA | 第49页 |
| 2.9 体外免疫共沉淀 | 第49-50页 |
| 2.10 T7 RNA体外转录 | 第50-51页 |
| 2.11 间接免疫荧光 | 第51-52页 |
| 2.12 重组HPIV3病毒 | 第52-53页 |
| 2.13 噬斑纯化 | 第53页 |
| 2.14 病毒滴度测定 | 第53-54页 |
| 2.15 细胞总RNA抽提 | 第54-55页 |
| 2.16 逆转录-PCR | 第55-57页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第57-103页 |
| 1 N蛋白和P蛋白相互作用的研究 | 第57-73页 |
| 1.1 N蛋白羧基21-40区域内的氨基酸对于N-P相互作用非常关键 | 第57-61页 |
| 1.2 N_(L478)是N蛋白和P蛋白的相互作用的关键位点 | 第61-64页 |
| 1.3 Leu 478是一个对转录活性非常关键的氨基酸位点 | 第64-67页 |
| 1.4 N_(L478A)丧失了N_(L478A)-RNA与P蛋白的相互作用,保持着N_(L478A)~0和P蛋白的相互作用 | 第67-73页 |
| 2 N蛋白和P蛋白形成包涵体的研究 | 第73-78页 |
| 2.1 N蛋白和P蛋白共转染可以形成包涵体 | 第73-74页 |
| 2.2 包涵体结构中含有病毒转录和复制的所有组分 | 第74-78页 |
| 3 野生型N蛋白可以弥补N_(L478A)功能的缺失 | 第78-82页 |
| 3.1 野生型N蛋白可以弥补N_(L478A)在微基因组转录功能方面的缺失 | 第78-80页 |
| 3.2 野生型N蛋白可以弥补N_(L478A）在包涵体形成方面的缺失 | 第80-82页 |
| 4 N_(L478A)突变体丧失了得到重组病毒的能力 | 第82-83页 |
| 5 包涵体形成条件的探究 | 第83-100页 |
| 5.1 P蛋白存在多个区域调节N蛋白和P蛋白的相互作用 | 第83-90页 |
| 5.2 P蛋白羧基端的100个氨基酸是维持N-RNA-P相互作用的最小区域 | 第90-91页 |
| 5.3 P N40可以互补P△N40功能的缺失 | 第91-97页 |
| 5.4 包涵体的形成是一个逐渐变大的动态过程 | 第97-98页 |
| 5.5 P蛋白氨基端更长的区域可互补P△N40转录活性的丧失 | 第98-100页 |
| 6 讨论 | 第100-103页 |
| 第四章 总结与展望 | 第103-106页 |
| 1 总结 | 第103-104页 |
| 2 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-113页 |
| 博士期间发表文章 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
