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ECM膜片及eIF4E基因治疗促皮肤创面愈合

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ECM膜片及eIF4E基因治疗促皮肤创面愈合
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
缩略语对照表第10-17页
第一章 文献回顾第17-37页
  1.1 创面愈合的基本过程第17-20页
    1.1.1 凝血期第17页
    1.1.2 炎症期第17-18页
    1.1.3 增殖期第18-19页
    1.1.4 重塑期第19-20页
  1.2 创面愈合的影响因素第20-23页
    1.2.1 PI3K-AKT-mTOR信号通路第20-21页
    1.2.2 Wnt/β-catenin信号通路第21-23页
    1.2.3 Hippo-YAP信号通路第23页
  1.3 糖尿病难愈创面的分子成因第23-26页
    1.3.1 eIF4F复合物简介第24页
    1.3.2 eIF4F复合物的多种下游分子参与创面愈合第24-25页
    1.3.3 调控eIF4F复合物上游信号通路影响创面愈合第25页
    1.3.4 糖尿病与AKT-mTOR-4EBP1信号通路异常第25-26页
    1.3.5 Wnt/β-catenin信号通路异常第26页
  1.4 创面愈合治疗现状第26-37页
    1.4.1 生长因子第26-29页
    1.4.2 激素类第29页
    1.4.3 干细胞第29-31页
    1.4.4 细胞膜片技术第31-32页
    1.4.5 生物高分子材料第32-34页
    1.4.6 化学高分子材料第34-35页
    1.4.7 复合材料第35页
    1.4.8 辅助手段第35-37页
第二章 MSC-ECM膜片的制备及特性第37-65页
  2.1 前言第37-39页
    2.1.1 生物材料研究现状第37-38页
    2.1.2 ECM的优势第38-39页
  2.2 实验材料及方法第39-48页
    2.2.1 实验材料第39页
    2.2.2 实验试剂第39页
    2.2.3 实验仪器第39-40页
    2.2.4 主要实验试剂配制第40-41页
    2.2.5 实验方法第41-48页
      2.2.5.1 MSCs原代培养第41-42页
      2.2.5.2 MSCs传代第42页
      2.2.5.3 MSCs条件培养第42-43页
      2.2.5.4 MSC膜片脱细胞处理第43页
      2.2.5.5 MSC膜片及其来源的ECM膜片取材、固定、脱水、包埋及组织切片第43页
      2.2.5.6 MSC膜片及其来源的ECM膜片天狼猩红染色第43-44页
      2.2.5.7 扫描电子显微镜观察ECM膜片超微结构第44页
      2.2.5.8 原子力显微镜观察ECM膜片表面形貌第44页
      2.2.5.9 MSC膜片及其来源的ECM膜片总蛋白提取第44-45页
      2.2.5.10 BCA法测定总蛋白浓度第45页
      2.2.5.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳第45-47页
      2.2.5.12 Western blot检测目的蛋白第47-48页
      2.2.5.13 MSCs来源的ECM膜片抗拉强度测定第48页
  2.3 实验结果第48-62页
    2.3.1 MSCs体外培养及形态观察第48-50页
    2.3.2 MSC-ECM膜片的大体特征第50页
    2.3.3 MSC膜片及其来源的ECM膜片的组织学特征第50-52页
    2.3.4 MSC-ECM膜片的超微结构第52-54页
    2.3.5 MSC-ECM膜片的表面形貌及3-D结构第54-57页
    2.3.6 化学条件培养激活MSC膜片中β-catenin和HIF-1α通路第57-58页
    2.3.7 化学条件培养促MSC膜片中胶原和创面愈合相关生长因子表达第58-61页
    2.3.8 MSC-ECM膜片的抗拉强度检测第61-62页
  2.4 讨论第62-65页
第三章 ECM膜片促普通及糖尿病皮肤创面愈合第65-89页
  3.1 前言第65-66页
    3.1.1 ECM与创面愈合第65页
    3.1.2 糖尿病对创面愈合的影响第65-66页
  3.2 实验材料及试剂第66-72页
    3.2.1 实验材料第66页
    3.2.2 实验试剂第66页
    3.2.3 实验仪器第66-67页
    3.2.4 主要实验试剂配制第67-68页
    3.2.5 实验方法第68-72页
      3.2.5.1 ECM膜片敷块制备第68页
      3.2.5.2 糖尿病小鼠模型构建第68页
      3.2.5.3 在体动物实验第68页
      3.2.5.4 皮肤组织取材、固定、脱水、包埋及组织切片第68-69页
      3.2.5.5 皮肤切片组织学染色第69-72页
  3.3 实验结果第72-85页
    3.3.1 ECM膜片促小鼠普通创面愈合第72-78页
      3.3.1.1 ECM膜片促进小鼠普通创面愈合第72-74页
      3.3.1.2 ECM膜片促创面再上皮化和肉芽组织形成第74-75页
      3.3.1.3 ECM膜片促创面血管生成第75-76页
      3.3.1.4 ECM膜片促创面胶原累积及与正常组织整合第76-78页
    3.3.2 ECM膜片促小鼠糖尿病创面愈合第78-85页
      3.3.2.1 小鼠糖尿病模型构建第78页
      3.3.2.2 ECM膜片促小鼠糖尿病创面愈合第78-80页
      3.3.2.3 ECM膜片促糖尿病创面再上皮化和肉芽组织形成第80-82页
      3.3.2.4 ECM膜片促糖尿病创面血管生成第82页
      3.3.2.5 ECM膜片促糖尿病创百胶原累积及与边缘未受损组织整合第82-85页
  3.4 讨论第85-89页
第四章 eIF4F复合物在创面愈合中的作用第89-121页
  4.1 前言第89-92页
    4.1.1 翻译控制概述第89页
    4.1.2 翻译起始复合物及其功能第89-91页
    4.1.3 4EBP1与100k蛋白对eIF4F复合物活性的影响第91-92页
  4.2 实验材料及方法第92-107页
    4.2.1 实验材料第92页
    4.2.2 实验试剂第92-93页
    4.2.3 实验仪器第93页
    4.2.4 主要实验试剂配制第93-96页
    4.2.5 实验方法第96-107页
      4.2.5.1 真核表达载体构建第96-99页
      4.2.5.2 质粒大提及内毒素去除第99-100页
      4.2.5.3 在体转染复合物配制第100页
      4.2.5.4 动物实验第100-101页
      4.2.5.5 皮肤组织取材、固定、脱水、包埋及组织切片第101-102页
      4.2.5.6 H&E染色第102-103页
      4.2.5.7 HaCaT细胞体外培养、冻存及复苏第103页
      4.2.5.8 HaCaT细胞转染第103-104页
      4.2.5.9 划痕法检测HaCaT细胞迁移第104页
      4.2.5.10 细胞总蛋白提取第104页
      4.2.5.11 BCA法测定总蛋白浓度第104-105页
      4.2.5.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳第105-106页
      4.2.5.13 Western blot检测目的蛋白第106-107页
  4.3 实验结果第107-118页
    4.3.1 载体构建第107-110页
    4.3.2 质粒大提第110页
    4.3.3 调控eIF4F复合物对创面愈合相关因子表达的影响第110-112页
    4.3.4 调控eIF4F复合物对HaCaT细胞迁移的影响第112-113页
    4.3.5 在体转染质粒与PEI比例的确定第113-114页
    4.3.6 Pluronic F-127水凝胶是否影响PEI在体转染效率的确定第114-115页
    4.3.7 调控eIF4F复合物对普通创面愈合的影响第115-116页
    4.3.8 调控eIF4F复合物对肉芽组织形成和再上皮化的影响第116-118页
    4.3.9 调控eIF4F复合物对血管生成的影响第118页
  4.4 讨论第118-121页
第五章 eIF4E1基因治疗促糖尿病创面愈合第121-135页
  5.1 前言第121-122页
  5.2 实验材料及方法第122-123页
    5.2.1 实验材料第122页
    5.2.2 实验试剂第122页
    5.2.3 实验仪器第122页
    5.2.4 主要实验试剂配制第122页
    5.2.5 实验方法第122-123页
      5.2.5.1 HaCaT细胞体外高糖条件下培养、转染第122页
      5.2.5.2 糖尿病创面模型构建第122-123页
      5.2.5.3 其它实验方法第123页
  5.3 实验结果第123-132页
    5.3.1 真核表达载体构建第123-126页
    5.3.2 过表达eIF4E1及其模拟磷酸化突变体促创面愈合相关因子表达第126-128页
    5.3.3 过表达eIF4E1及其模拟磷酸化突变体促高糖培养条件下细胞迁移第128-129页
    5.3.4 过表达eIF4E1及其模拟磷酸化突变体促糖尿病创面愈合第129-130页
    5.3.5 过表达eIF4E1及其模拟磷酸化突变体促糖尿病创面肉芽组织形成及再上皮化第130-131页
    5.3.6 过表达eIF4E1及其模拟磷酸化突变体促糖尿病创面血管生成第131-132页
  5.4 讨论第132-135页
第六章 总结和展望第135-139页
  6.1 论文总结第135-136页
    6.1.1 MSC-ECM膜片的制备及特性部分的总结第135页
    6.1.2 ECM膜片促普通及糖尿病皮肤创面愈合部分的总结第135页
    6.1.3 eIF4F复合物在创面愈合中的作用部分的总结第135-136页
    6.1.4 eIF4E1基因治疗促糖尿病创面愈合部分的总结第136页
  6.2 论文创新性第136页
  6.3 工作中待解决的问题第136-137页
  6.4 前景与展望第137-139页
参考文献第139-159页
附录第159-165页
致谢第165-167页
攻读博士学位期间取得的科研成果第167-169页
作者简介第169页

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