论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-45页 |
| 1.1 病毒样颗粒(VLPs)及其在疫苗研究中的应用 | 第13-21页 |
| 1.1.1 病毒样颗粒(VLPs)的特性与组装 | 第13-16页 |
| 1.1.2 病毒样颗粒(VLPs)与免疫 | 第16页 |
| 1.1.3 基于VLPs的疫苗研究 | 第16-21页 |
| 1.2 H5N1禽流感病毒及其疫苗研究 | 第21-35页 |
| 1.2.1 A型流感病毒分子生物学 | 第21-23页 |
| 1.2.2 H5N1禽流感病毒及其流行病学 | 第23-25页 |
| 1.2.3 H5N1禽流感病毒变异与免疫逃逸 | 第25-27页 |
| 1.2.4 H5N1禽流感病毒感染与治疗 | 第27-28页 |
| 1.2.5 H5N1禽流感病毒疫苗研究 | 第28-35页 |
| 1.3 呼吸道合胞体病毒(RSV)及其疫苗研究 | 第35-44页 |
| 1.3.1 呼吸道合胞病毒及其编码蛋白 | 第35-36页 |
| 1.3.2 RSV感染与治疗 | 第36-38页 |
| 1.3.3 RSV疫苗增强性疾病 | 第38-39页 |
| 1.3.4 RSV疫苗研究 | 第39-44页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第44-45页 |
| 第二章 H5N1禽流感病毒血凝素(HA)与武汉野田村病毒衣壳蛋白融合表达及嵌合病毒样颗粒(VLPs)制备 | 第45-68页 |
| 2.1 材料与方法 | 第46-56页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第46页 |
| 2.1.2 工具酶、抗体及试剂 | 第46页 |
| 2.1.3 培养基及溶液 | 第46-49页 |
| 2.1.4 武汉野田村病毒衣壳蛋白(WhNVc)结构分析 | 第49页 |
| 2.1.5 重组表达质粒构建 | 第49-53页 |
| 2.1.6 重组蛋白表达与鉴定 | 第53-54页 |
| 2.1.7 重组蛋白纯化与复性 | 第54-56页 |
| 2.1.8 嵌合病毒样颗粒鉴定 | 第56页 |
| 2.2 实验结果 | 第56-65页 |
| 2.2.1 武汉野田村病毒衣壳蛋白(WhNVc)结构分析 | 第56-58页 |
| 2.2.2 表达质粒pWhNVc,pWhNVc△N及pWhNVc△NC构建与鉴定 | 第58-59页 |
| 2.2.3 WhNVc蛋白及其截短突变体的表达 | 第59-60页 |
| 2.2.4 WhNVc蛋白及其截短突变体的纯化与病毒样颗粒制备 | 第60-61页 |
| 2.2.5 重组质粒pWhNVc△NC-HA2与pWhNVc△NC-HAe构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 2.2.6 重组蛋白WhNVc△NC-HA2/-HAe表达 | 第62-63页 |
| 2.2.7 重组蛋白WhNVc△NC-HA2/-HAe纯化与嵌合病毒样颗粒制备 | 第63-64页 |
| 2.2.8 嵌合病毒样颗粒(VLPs-WhNVe△NC-HA2/-HAe)的抗原性 | 第64-65页 |
| 2.3 讨论 | 第65-68页 |
| 第三章 嵌合HA抗原的病毒样颗粒免疫原性及抗H5N1禽流感病毒感染免疫研究 | 第68-85页 |
| 3.1 材料与方法 | 第68-73页 |
| 3.1.1 病毒、细胞、抗体及试剂 | 第68-69页 |
| 3.1.2 细胞培养基 | 第69页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第69页 |
| 3.1.4 H5N1流感病毒的扩增与效价测定 | 第69-70页 |
| 3.1.5 小鼠免疫与攻毒感染 | 第70页 |
| 3.1.6 小鼠血清抗体检测 | 第70-71页 |
| 3.1.7 小鼠脾脏细胞因子检测 | 第71-72页 |
| 3.1.8 肺组织病毒效价测定 | 第72-73页 |
| 3.1.9 肺组织病理切片分析(HE染色与免疫组化分析) | 第73页 |
| 3.2 结果 | 第73-81页 |
| 3.2.1 嵌合H5N1 HA的VLPs诱导特异性体液免疫应答 | 第73-75页 |
| 3.2.2 嵌合H5N1 HA的VLPs诱导特异性细胞免疫反应 | 第75-76页 |
| 3.2.3 嵌合HA的VLPs诱导机体抗H5N1同源病毒免疫保护 | 第76-78页 |
| 3.2.4 嵌合HA的VLPs诱导机体抗H5N1异源病毒免疫保护 | 第78-81页 |
| 3.3 讨论 | 第81-85页 |
| 第四章 基于HBc载体蛋白的重组RSV G蛋白嵌合病毒样颗粒制备及抗RSV感染免疫 | 第85-105页 |
| 4.1 材料与方法 | 第85-91页 |
| 4.1.1 质粒、病毒、细胞与菌株 | 第85-86页 |
| 4.1.2 工具酶、抗体及试剂 | 第86页 |
| 4.1.3 细胞培养基及溶液 | 第86页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第86-87页 |
| 4.1.5 重组蛋白的表达与鉴定 | 第87页 |
| 4.1.6 嵌合病毒样颗粒的制备与鉴定 | 第87页 |
| 4.1.7 RSV-A2的扩增与效价测定 | 第87-88页 |
| 4.1.8 小鼠免疫与攻毒试验 | 第88-89页 |
| 4.1.9 ELISA检测小鼠血清抗体 | 第89页 |
| 4.1.10 空斑减数试验检测血清中和抗体 | 第89页 |
| 4.1.11 小鼠细胞因子检测(ELISA) | 第89-90页 |
| 4.1.12 攻毒后小鼠肺组织病毒效价测定 | 第90-91页 |
| 4.1.13 肺组织病理分析 | 第91页 |
| 4.2 结果 | 第91-102页 |
| 4.2.1 嵌合蛋白(HBc△-tG与HBc△-tG/M2)表达 | 第91-93页 |
| 4.2.2 嵌合病毒样颗粒(HBc△-tG及HBc△-tG/M2)制备 | 第93页 |
| 4.2.3 嵌合病毒样颗粒(HBc△-tG及HBc△-tG/M2)诱导的体液免疫应答 | 第93-95页 |
| 4.2.4 嵌合病毒样颗粒(HBc△-tG及HBc△-tG/M2)诱导特异性细胞免疫应答 | 第95-98页 |
| 4.2.5 嵌合病毒样颗粒诱导针对RSV感染的免疫保护 | 第98-99页 |
| 4.2.6 融合CTL表位的VLPs显著减轻免疫小鼠RSV攻毒感染后的肺组织病理损伤 | 第99-101页 |
| 4.2.7 HBc△-tG/M2 VLPs免疫接种小鼠肺组织的细胞应答 | 第101-102页 |
| 4.3 讨论 | 第102-105页 |
| 研究总结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 博士期间发表与待发表的论文 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
