论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-53页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 人多能干细胞的研究背景 | 第12-18页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞的发现及分离 | 第13页 |
| 1.2.2 干细胞的人工诱导即细胞重编程 | 第13-18页 |
| 1.3 干细胞应用研究 | 第18-31页 |
| 1.3.1 人多能干细胞的临床移植应用现状 | 第19-26页 |
| 1.3.2 基于干细胞分化的细胞疾病模型 | 第26-30页 |
| 1.3.3 iPSC对神经系统疾病和损伤的应用重要性 | 第30-31页 |
| 1.4 胚胎神经发育和干细胞神经分化过程调控机制 | 第31-47页 |
| 1.4.1 胚胎神经系统发生过程 | 第31-34页 |
| 1.4.2 神经系统发生调控机制 | 第34-47页 |
| 1.5 人神经细胞体外诱导方法研究 | 第47-53页 |
| 1.5.1 EB法诱导人神经干细胞 | 第47-48页 |
| 1.5.2 单层法诱导人神经干细胞 | 第48-49页 |
| 1.5.3 转分化诱导人神经干细胞或神经前体细胞 | 第49-51页 |
| 1.5.4 其他神经细胞定向诱导 | 第51-53页 |
| 第二章 人多能干细胞的神经分化过程中GSK3与ERK通路的调控初步研究 | 第53-80页 |
| 2.1 引言 | 第53-55页 |
| 2.2 材料 | 第55-59页 |
| 2.2.1 细胞 | 第55-59页 |
| 2.3 方法 | 第59-68页 |
| 2.3.1 无饲养层(Feeder-free)人多能干细胞培养 | 第59-60页 |
| 2.3.2 人神经干细胞诱导 | 第60-62页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR | 第62-67页 |
| 2.3.4 细胞流式检测 | 第67-68页 |
| 2.4 结果 | 第68-78页 |
| 2.4.1 人多能干细胞体外神经诱导方法的建立 | 第68-72页 |
| 2.4.2 GSK3和ERK通路的抑制影响PAX6的表达 | 第72-76页 |
| 2.4.3 GSK3与ERK抑制后诱导细胞增殖能力差别明显 | 第76-78页 |
| 2.5 讨论 | 第78-79页 |
| 2.6 结论 | 第79-80页 |
| 第三章 GSK3通路在人多能干细胞神经分区分化中的调控作用研究 | 第80-117页 |
| 3.1 引言 | 第80-82页 |
| 3.2 材料 | 第82页 |
| 3.3 方法 | 第82-91页 |
| 3.3.1 人神经干细胞单层诱导 | 第82页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR | 第82页 |
| 3.3.3 蛋白印迹反应和磷酸化蛋白印迹反应 | 第82-85页 |
| 3.3.4 神经干细胞成球实验和神经干细胞扩增培养 | 第85-86页 |
| 3.3.5 细胞周期检测 | 第86-87页 |
| 3.3.6 BrdU检测细胞增殖比率 | 第87-88页 |
| 3.3.7 神经干细胞的神经元分化 | 第88-89页 |
| 3.3.8 神经元电生理检测 | 第89页 |
| 3.3.9 细胞全基因组表达谱测序(RNA-seq) | 第89页 |
| 3.3.10 病毒包装感染 | 第89-91页 |
| 3.3.11 基因knock down细胞系的建立 | 第91页 |
| 3.4 结果 | 第91-115页 |
| 3.4.1 GSK3的抑制阻遏PAX6表达但不影响干细胞的神经分化 | 第91-95页 |
| 3.4.2 S/D/C-NPC具有强的自我更新能力及较高的神经胶质细胞分化效率 | 第95-100页 |
| 3.4.3 S/D/C-NPC表现出后脑神经前体细胞特征 | 第100-102页 |
| 3.4.4 S/D/C-NPC与S/D-NPC具有不同的亚型神经细胞分化倾向 | 第102-106页 |
| 3.4.5 人神经干细胞分区分化的分子机制 | 第106-115页 |
| 3.5 结论 | 第115-117页 |
| 第四章 诱导人神经干细胞的体内移植研究 | 第117-128页 |
| 4.1 引言 | 第117页 |
| 4.2 材料 | 第117-118页 |
| 4.3 方法 | 第118-120页 |
| 4.4 结果 | 第120-126页 |
| 4.4.1 人神经干细胞移植新生鼠正常存活分化迁移 | 第120-124页 |
| 4.4.2 人神经干细胞移植成体大鼠侧脑室后整合至海马区 | 第124-126页 |
| 4.5 讨论 | 第126-127页 |
| 4.6 结论 | 第127-128页 |
| 结语 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-146页 |
| 附录 | 第146-148页 |
| 附表一: 实验所用抗体信息 | 第146页 |
| 附表二 实验所用Q-PCR引物序列 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148-151页 |
| 研究生在读期间成果 | 第151页 |
