论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-15页 |
| 符号说明 | 第15-17页 |
| 第1章 引言 | 第17-31页 |
| 1.1 概述 | 第17-18页 |
| 1.2 心血管疾病和TFA的研究 | 第18-25页 |
| 1.2.1 TFA的分布 | 第18-19页 |
| 1.2.2 TFA摄入量 | 第19页 |
| 1.2.3 反式脂肪酸对心血管疾病的影响 | 第19-25页 |
| 1.3 蛋白质组学技术与心血管疾病研究 | 第25-29页 |
| 1.3.1 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE） | 第25-26页 |
| 1.3.2 质谱分析 | 第26页 |
| 1.3.3 蛋白质组信息学 | 第26-27页 |
| 1.3.4 心血管疾病研究中蛋白质组学的应用 | 第27-28页 |
| 1.3.5 蛋白质组学在营养素研究中的应用 | 第28-29页 |
| 1.4 课题研究的目的、意义及主要内容 | 第29-31页 |
| 1.4.1 课题来源 | 第29页 |
| 1.4.2 研究的价值与意义 | 第29-30页 |
| 1.4.3 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 第2章 反式脂肪酸对人脐静脉内皮细胞损伤的影响 | 第31-50页 |
| 2.1 概述 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2.2 仪器 | 第33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.3.2 台盼蓝排斥实验检测细胞增殖能力 | 第34-35页 |
| 2.3.3 细胞生长曲线的绘制 | 第35页 |
| 2.3.4 细胞毒性检测 | 第35-36页 |
| 2.3.5 细胞NO和NOS的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 统计学分析 | 第37页 |
| 2.4 实验结果 | 第37-46页 |
| 2.4.1 HUVEC生长曲线与细胞活力 | 第37-38页 |
| 2.4.2 反油酸对HUVEC存活率的影响 | 第38-39页 |
| 2.4.3 细胞浓度对反油酸作用的影响 | 第39页 |
| 2.4.4 反油酸与反亚油酸浓度对细胞增殖能力的影响 | 第39-42页 |
| 2.4.5 反油酸与反亚油酸对细胞NOS的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.6 反亚油酸和反油酸对细胞NO分泌量的影响 | 第44-45页 |
| 2.4.7 反亚油酸和反油酸对细胞LDH渗出率的影响 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-49页 |
| 2.5.1 不同饱和度TFA均抑制细胞增殖，影响细胞调控功能 | 第46-47页 |
| 2.5.2 不同饱和度TFA均能降低NOS活性以抑制NO分泌量 | 第47-48页 |
| 2.5.3 不同饱和度TFA均能增加细胞内LDH渗出率，导致氧化应激水平升高 | 第48-49页 |
| 2.6 小结 | 第49-50页 |
| 第3章 反式脂肪酸对人脐静脉内皮细胞脂肪酸组成和膜流动性的影响 | 第50-62页 |
| 3.1 前言 | 第50-51页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第51-53页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.2.2 仪器 | 第52-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 3.3.1 脂肪酸成分的测定 | 第53页 |
| 3.3.2 膜流动性的测定 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与分析 | 第54-59页 |
| 3.4.1 反油酸造成的内皮细胞脂肪酸成分的变化 | 第54-56页 |
| 3.4.2 反亚油酸造成的HUVEC脂肪酸成分的变化 | 第56-57页 |
| 3.4.3 反油酸对HUVEC膜流动性的影响 | 第57-59页 |
| 3.5 讨论 | 第59-61页 |
| 3.5.1 TFA改变脂质代谢 | 第59-60页 |
| 3.5.2 反油酸导致细胞膜流动性降低 | 第60-61页 |
| 3.6 小结 | 第61-62页 |
| 第4章 反油酸对人脐静脉内皮细胞蛋白质组成的影响 | 第62-83页 |
| 4.1 前言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第63-65页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.2.2 仪器 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-69页 |
| 4.3.1 2-DE试剂的配制 | 第65-66页 |
| 4.3.2 细胞蛋白的提取 | 第66页 |
| 4.3.3 2-DE | 第66-67页 |
| 4.3.4 qRT-PCR分析 | 第67-68页 |
| 4.3.5 Western Blot分析 | 第68-69页 |
| 4.3.6 数据分析及计算 | 第69页 |
| 4.4 结果 | 第69-78页 |
| 4.4.1 2-DE结果 | 第69-71页 |
| 4.4.2 质谱分析结果 | 第71-74页 |
| 4.4.3 qRT-PCR分析结果 | 第74-77页 |
| 4.4.4 Western Blot分析结果 | 第77-78页 |
| 4.5 讨论 | 第78-81页 |
| 4.5.1 反油酸减弱了HUVEC抗氧化蛋白质表达 | 第78-79页 |
| 4.5.2 反油酸减弱了HUVEC抗凋亡的能力 | 第79页 |
| 4.5.3 反油酸干扰细胞脂肪代谢和能量代谢 | 第79-80页 |
| 4.5.4 反油酸对DNA损伤的影响 | 第80-81页 |
| 4.6 小结 | 第81-83页 |
| 4.6.1 降低细胞抗氧化能力 | 第81页 |
| 4.6.2 促进内皮细胞凋亡 | 第81页 |
| 4.6.3 干扰脂质代谢和能量代谢 | 第81-82页 |
| 4.6.4 加强细胞DNA损伤 | 第82-83页 |
| 第5章 反式脂肪酸对人脐静脉内皮细胞分泌的影响 | 第83-98页 |
| 5.1 前言 | 第83-84页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第84-85页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第84-85页 |
| 5.2.2 仪器 | 第85页 |
| 5.3 实验方法 | 第85-87页 |
| 5.3.1 HUVEC的培养 | 第85-86页 |
| 5.3.2 细胞因子分泌水平的测定 | 第86-87页 |
| 5.3.3 数据处理 | 第87页 |
| 5.4 实验结果 | 第87-95页 |
| 5.4.1 培养上清液中P-selectin含量变化 | 第87-89页 |
| 5.4.2 培养上清液中SICAM-1 含量变化 | 第89-90页 |
| 5.4.3 培养上清液中TNF-α的含量变化 | 第90-92页 |
| 5.4.4 培养上清液中PGI-2 含量变化 | 第92-93页 |
| 5.4.5 培养上清液中ET-1 的含量变化 | 第93-94页 |
| 5.4.6 培养上清液中TXA2的含量变化 | 第94-95页 |
| 5.5 讨论 | 第95-97页 |
| 5.6 小结 | 第97-98页 |
| 第6章 反式脂肪酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡通路的研究 | 第98-121页 |
| 6.1 前言 | 第98-101页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第101-103页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第101-102页 |
| 6.2.2 仪器 | 第102-103页 |
| 6.3 实验方法 | 第103-107页 |
| 6.3.1 细胞凋亡的检测 | 第103页 |
| 6.3.2 RT-PCR分析 | 第103-106页 |
| 6.3.3 western blot | 第106-107页 |
| 6.3.4 数据处理 | 第107页 |
| 6.4 实验结果 | 第107-117页 |
| 6.4.1 反油酸对HUVEC凋亡的影响 | 第107-110页 |
| 6.4.2 检测总RNA和cDNA完整性 | 第110-112页 |
| 6.4.3 反油酸作用后HUVEC中CDK4、CyclinD1、Bcl-2、p21、p53、PSME3的表达变化 | 第112-114页 |
| 6.4.4 western blot检测反油酸作用前后HUVEC蛋白表达量的改变 | 第114-117页 |
| 6.5 讨论 | 第117-119页 |
| 6.6 小结 | 第119-121页 |
| 第7章 结论与展望 | 第121-125页 |
| 7.1 结论 | 第121-123页 |
| 7.1.1 不同TFA均造成内皮细胞抑制 | 第121页 |
| 7.1.2 不同TFA能干扰HUVEC脂肪酸的代谢 | 第121-122页 |
| 7.1.3 反油酸引起相关蛋白质含量改变 | 第122页 |
| 7.1.4 反油酸引发内皮细胞分泌功能紊乱 | 第122页 |
| 7.1.5 反油酸通过p53介导内皮细胞周期阻滞诱导细胞凋亡 | 第122-123页 |
| 7.2 本研究的创新点 | 第123页 |
| 7.3 进一步工作方向 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-144页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第144页 |
