论文目录 | |
缩略语表 | 第1-10页 |
中文摘要 | 第10-14页 |
ABSTRACT | 第14-19页 |
前言 | 第19-21页 |
文献回顾 | 第21-32页 |
第一部分 耐药胃癌细胞EMT表型的验证及潜在调控信号的筛选 | 第32-53页 |
引言 | 第32页 |
1 材料 | 第32-34页 |
1.1 细胞株 | 第32页 |
1.2 75 例胃癌组织 | 第32页 |
1.3 裸鼠 | 第32-33页 |
1.4 PCR引物序列 | 第33页 |
1.5 PCR反转录试剂盒及SYBR Green | 第33页 |
1.6 主要试剂 | 第33-34页 |
1.7 主要仪器 | 第34页 |
2 方法 | 第34-45页 |
2.1 cDNA芯片检测 | 第34-35页 |
2.2 细胞复苏及传代培养 | 第35-36页 |
2.3 SGC7901和SGC7901/ADR细胞侵袭迁移实验 | 第36-37页 |
2.4 RNA抽提 | 第37-38页 |
2.5 反转录 | 第38-39页 |
2.6 SYBR Green法Real-time PCR | 第39页 |
2.7 蛋白提取 | 第39-40页 |
2.8 BCA法测定蛋白浓度 | 第40页 |
2.9 western blot | 第40-41页 |
2.10 构建稳定转染Luciferase的标记细胞 | 第41-42页 |
2.11 尾静脉注射 | 第42页 |
2.12 小动物活体生物发光成像 | 第42-43页 |
2.13 免疫荧光染色 | 第43页 |
2.14 石蜡包埋切片与肝肺转移灶H&E染色 | 第43-44页 |
2.15 免疫组织化学染色 | 第44-45页 |
3 结果 | 第45-51页 |
3.1 胃癌耐药细胞的侵袭迁移能力显著增强 | 第45-46页 |
3.2 胃癌耐药细胞发生EMT | 第46-47页 |
3.3 促进胃癌耐药细胞发生EMT的潜在信号通路的筛选 | 第47-48页 |
3.4 临床胃癌标本验证FOXL2、HMGA2与EMT的关系 | 第48-51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
第二部分 FOXL2和HMGA2参与调控耐药胃癌细胞的侵袭迁移和EMT | 第53-67页 |
引言 | 第53页 |
1 材料 | 第53-55页 |
1.1 细胞株 | 第53页 |
1.2 细胞培养相关材料及试剂 | 第53页 |
1.3 小干扰RNA | 第53-54页 |
1.4 RT-PCR引物 | 第54页 |
1.5 转染相关试剂 | 第54页 |
1.6 反转录及RT-PCR相关试剂 | 第54页 |
1.7 慢病毒构建相关 | 第54页 |
1.8 western一抗 | 第54-55页 |
1.9 裸鼠 | 第55页 |
2 方法 | 第55-57页 |
2.1 siRNA转染 | 第55页 |
2.2 质粒过表达 | 第55页 |
2.3 体外侵袭迁移实验 | 第55-56页 |
2.4 沉默或过表达FOXL2(或HMGA2)稳转细胞系的建立 | 第56页 |
2.5 原位模型 | 第56页 |
2.6 western blot | 第56-57页 |
3 结果 | 第57-65页 |
3.1 FOXL2促进胃癌细胞的的体内外侵袭迁移 | 第57-60页 |
3.2 FOXL2参与对耐药细胞EMT的调控 | 第60-61页 |
3.3 HMGA2促进胃癌细胞发生体内外侵袭和转移 | 第61-63页 |
3.4 HMGA2参与对耐药细胞EMT的调控 | 第63-64页 |
3.5 化疗药物诱导HMGA2和FOXL2表达 | 第64-65页 |
4 讨论 | 第65-67页 |
第三部分 HMGA2通过靶向FOXL2调节肿瘤细胞侵袭迁移和EMT | 第67-74页 |
引言 | 第67页 |
1 材料 | 第67-68页 |
1.1 细胞株 | 第67页 |
1.2 细胞培养相关材料及试剂 | 第67页 |
1.3 质粒 | 第67页 |
1.4 siRNA | 第67页 |
1.5 RT-PCR引物 | 第67页 |
1.6 转染相关试剂 | 第67-68页 |
1.7 反转录及RT-PCR相关试剂 | 第68页 |
1.8 慢病毒构建相关 | 第68页 |
1.9 Western blot一抗 | 第68页 |
1.10 裸鼠 | 第68页 |
2 方法 | 第68-69页 |
2.1 siRNA转染 | 第68页 |
2.2 质粒转染 | 第68页 |
2.3 侵袭迁移实验 | 第68页 |
2.4 慢病毒转染 | 第68-69页 |
2.5 裸鼠原位模型 | 第69页 |
2.6 H&E染色 | 第69页 |
2.7 western blot | 第69页 |
3 结果 | 第69-72页 |
3.1 HMGA2参与调控FOXL2的表达 | 第69-70页 |
3.2 FOXL2是HMGA2调控EMT的重要下游分子 | 第70-72页 |
4 讨论 | 第72-74页 |
第四部分 HMGA2和PRB的相互作用促进E2F1对FOXL2的转录 | 第74-87页 |
引言 | 第74页 |
1 材料 | 第74-76页 |
1.1 细胞株 | 第74页 |
1.2 细胞培养相关材料及试剂 | 第74页 |
1.3 siRNA | 第74-75页 |
1.4 RT-PCR引物 | 第75页 |
1.5 转染相关试剂 | 第75页 |
1.6 反转录及RT-PCR相关试剂 | 第75页 |
1.7 慢病毒构建相关 | 第75页 |
1.8 western blot一抗 | 第75-76页 |
2 方法 | 第76-77页 |
2.1 荧光素酶报告基因实验 | 第76页 |
2.2 PCR反应 | 第76页 |
2.3 western blot | 第76页 |
2.4 免疫共沉淀(全程冰上操作) | 第76-77页 |
3 结果 | 第77-85页 |
3.1 E2F1在胃癌耐药细胞中转录活性增强 | 第77-78页 |
3.2 FOXL2的表达受E2F1调控 | 第78-80页 |
3.3 E2F1可与FOXL2启动子区结合 | 第80页 |
3.4 HMGA2促进E2F1的转录活性 | 第80-82页 |
3.5 pRb与HMGA2结合促进了E2F1对FOXL2的转录活性 | 第82-85页 |
4 讨论 | 第85-87页 |
第五部分 FOXL2下游靶分子的筛选和验证 | 第87-96页 |
引言 | 第87页 |
1 材料 | 第87-88页 |
1.1 细胞株 | 第87页 |
1.2 细胞培养相关材料及试剂 | 第87页 |
1.3 质粒 | 第87页 |
1.4 siRNA | 第87页 |
1.5 转染相关试剂 | 第87-88页 |
1.6 慢病毒构建相关 | 第88页 |
1.7 Westernblot一抗 | 第88页 |
1.8 裸鼠 | 第88页 |
2 方法 | 第88-89页 |
2.1 mRNA芯片 | 第88页 |
2.2 western blot | 第88页 |
2.3 Transwell | 第88页 |
2.4 免疫荧光 | 第88页 |
2.5 原位模型 | 第88-89页 |
2.6 H&E染色 | 第89页 |
3 结果 | 第89-94页 |
3.1 采用基因芯片筛选FOXL2的下游靶分子 | 第89页 |
3.2 ITGA2表达受FOXL2的调控 | 第89-90页 |
3.3 ITGA2参与调控EMT | 第90-91页 |
3.4 ITGA2促进了胃癌耐药细胞的侵袭转移 | 第91-93页 |
3.5 ITGA2可作为FOXL2下游分子参与EMT调控 | 第93-94页 |
4 讨论 | 第94-96页 |
第六部分 HMGA2、FOXL2等分子在胃癌组织中的表达的临床意义 | 第96-104页 |
引言 | 第96页 |
1 材料 | 第96-97页 |
1.1 胃癌组织芯片来源 | 第96页 |
1.2 免疫组化染色试剂 | 第96-97页 |
2 方法 | 第97页 |
2.1 免疫组织化学染色 | 第97页 |
3 结果 | 第97-103页 |
3.1 HMGA2、FOXL2、ITGA2在胃癌转移灶表达升高 | 第97-100页 |
3.2 HMGA2、FOXL2、ITGA2表达与胃癌病人的不良预后正相关 | 第100-103页 |
4 讨论 | 第103-104页 |
小结 | 第104-105页 |
参考文献 | 第105-123页 |
个人简历和研究成果 | 第123-125页 |
致谢 | 第125页 |