论文目录 | |
缩略语表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
英文摘要 | 第12-16页 |
前言 | 第16-17页 |
文献回顾 | 第17-32页 |
第一部分 胃癌病因学研究的最新进展 | 第17-22页 |
1 感染因素 | 第17-18页 |
2 胃癌发病中机体对幽门螺杆菌的免疫应答 | 第18-20页 |
3 表观遗传学 | 第20-22页 |
第二部分 miR-218 的重要作用 | 第22-25页 |
1 miR-218 在肿瘤组织中的表达与作用 | 第23-24页 |
2 miR-218 参与的与肿瘤相关的重要通路 | 第24-25页 |
3 miR-218 在胃癌中的研究 | 第25页 |
第三部分 POU2F2与肿瘤的相关性 | 第25-28页 |
1 POU家族 | 第25-26页 |
2 POU2F2 | 第26-27页 |
3 POU2F2与肿瘤 | 第27-28页 |
第四部分 NF-κB通路在肿瘤中的重要作用 | 第28-32页 |
1 NF-κB的作用机制 | 第28页 |
2 NF-κB在多种肿瘤中的作用 | 第28-30页 |
3 NF-κB与POU2F2的联系 | 第30-32页 |
第一部分 POU2F2促进胃癌侵袭转移的研究 | 第32-48页 |
1 材料 | 第32-34页 |
1.1 胃癌细胞系 | 第32页 |
1.2 主要实验试剂及耗材 | 第32-33页 |
1.3 组织芯片 | 第33页 |
1.4 主要试剂盒 | 第33页 |
1.5 裸鼠 | 第33页 |
1.6 主要试验器材 | 第33-34页 |
2 方法 | 第34-42页 |
2.1 细胞中RNA提取 | 第34页 |
2.2 mRNA逆转录合成cDNA | 第34-35页 |
2.3 mRNA的q-PCR | 第35页 |
2.4 Western blot | 第35-36页 |
2.5 免疫组化 | 第36页 |
2.6 质粒构建 | 第36-39页 |
2.7 慢病毒包装 | 第39-40页 |
2.8 细胞转染及筛选 | 第40页 |
2.9 Transwell侵袭小室实验 | 第40-41页 |
2.10 肿瘤细胞裸鼠体内转移模型 | 第41页 |
2.11 本部分相关的序列信息 | 第41-42页 |
3 结果 | 第42-46页 |
3.1 不同胃癌细胞系中POU2F2的表达水平与胃癌细胞转移能力正相关 | 第42-43页 |
3.2 POU2F2在胃癌及其相关组织中的表达与胃癌的转移能力密切相关 | 第43页 |
3.3 POU2F2与患者转归密切相关 | 第43-44页 |
3.4 POU2F2促进胃癌侵袭转移的体外及体内研究 | 第44-46页 |
4 讨论 | 第46-48页 |
第二部分 POU2F2上调ROBO1转录水平促进胃癌侵袭转移的研究 | 第48-61页 |
1 材料 | 第48-49页 |
1.1 胃癌细胞系 | 第48页 |
1.2 主要实验试剂及耗材 | 第48页 |
1.3 主要试剂盒 | 第48-49页 |
1.4 裸鼠 | 第49页 |
1.5 主要试验器材 | 第49页 |
2 方法 | 第49-54页 |
2.1 凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第49-51页 |
2.2 双荧光酶素报告基因实验 | 第51-52页 |
2.3 染色质免疫共沉淀及DNA测序(Chromatin immunoprecipitation andDNA sequencing,CHIP-Seq) | 第52-54页 |
2.4 本部分序列信息 | 第54页 |
3 结果 | 第54-59页 |
3.1 POU2F2下游位点预测 | 第54-55页 |
3.2 POU2F2增加ROBO1的表达 | 第55页 |
3.3 POU2F2与ROBO1启动子区有特异性结合 | 第55-57页 |
3.4 ROBO1是POU2F2促进胃癌侵袭转移中必不可少的因子 | 第57-58页 |
3.5 ROBO1配体SLIT2参与POU2F2调节胃癌细胞侵袭与转移 | 第58-59页 |
4 讨论 | 第59-61页 |
第三部分 NF-κB信号通路上调POU2F2促进胃癌侵袭转移的研究 | 第61-70页 |
1 材料 | 第61-62页 |
1.1 胃癌细胞系 | 第61页 |
1.2 主要实验试剂及耗材 | 第61-62页 |
1.3 主要试剂盒 | 第62页 |
1.4 裸鼠 | 第62页 |
1.5 主要试验器材 | 第62页 |
2 方法 | 第62-63页 |
2.1 NF-κB信号通路活性检测 | 第62页 |
2.2 用作NF-κB信号通路活性检测的细胞LPS处理 | 第62-63页 |
2.3 用作侵袭小室实验的细胞LPS处理 | 第63页 |
2.4 裸鼠肿瘤细胞体内转移实验中LPS的处理 | 第63页 |
2.5 其余同第一,第二部分 | 第63页 |
2.6 本部分相关序列信息 | 第63页 |
3 结果 | 第63-68页 |
3.1 NF-κB信号通路的激活上调POU2F2以及ROBO1的表达 | 第63-64页 |
3.2 NF-κB与POU2F2启动子区结合位点的预测以及验证 | 第64-66页 |
3.3 NF-κB通过上调POU2F2促进胃癌侵袭与转移 | 第66-68页 |
3.4 NF-κB,POU2F2以及ROBO1在胃癌组织中的表达存在相关性 | 第68页 |
4 讨论 | 第68-70页 |
第四部分 miR-218 对NF-κB/POU2F2/SLIT2/ROBO1通路调节的研究 | 第70-78页 |
1 材料 | 第70-71页 |
1.1 胃癌细胞系 | 第70页 |
1.2 主要实验试剂及耗材 | 第70页 |
1.3 主要试剂盒 | 第70页 |
1.4 裸鼠 | 第70-71页 |
1.5 主要试验器材 | 第71页 |
2 方法 | 第71-72页 |
2.1 miRNA逆转录合成cDNA | 第71页 |
2.2 miRNA的q-PCR | 第71页 |
2.3 用作NF-κB信号通路活性检测的细胞转染处理 | 第71-72页 |
2.4 其余同第一,第二部分 | 第72页 |
2.5 本部分相关序列信息 | 第72页 |
3 结果 | 第72-76页 |
3.1 miR-218 通过下调IκK-β 抑制NF-κB信号通路 | 第72-73页 |
3.2 miR-218 下调POU2F2和ROBO1的表达 | 第73-74页 |
3.3 miR-218 通过直接调节NF-κB信号通路关键激酶以及POU2F2和ROBO1的水平抑制胃癌侵袭与转移 | 第74-76页 |
4 讨论 | 第76-78页 |
小结 | 第78-80页 |
参考文献 | 第80-101页 |
个人简历和研究成果 | 第101-103页 |
致谢 | 第103页 |