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容量性钙内流在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

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容量性钙内流在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究
论文目录
 
缩略语表第1-8页
中文摘要第8-12页
ABSTRACT第12-16页
前言第16-17页
文献回顾第17-44页
一、缺血性脑卒中研究现状第17-29页
1、脑卒中流行病学及分类第17-18页
2、缺血性脑卒中第18-20页
3、缺血再灌注损伤第20-29页
(1)脑缺血再灌注损伤的致伤机制第20-25页
(2)缺血再灌注损伤干预研究现状第25-29页
二、容量性钙内流与神经系统疾病第29-35页
1、容量性钙内流第30-32页
2、容量性钙内流与神经元生理功能调节第32-33页
3、容量性钙内流与神经系统疾病第33-35页
三、自噬、钙信号与急性神经系统损伤第35-44页
1、自噬调节第36-38页
2、钙与自噬第38-41页
(1)钙离子是细胞自噬的启动机制第38-39页
(2)钙信号抑制细胞自噬第39-40页
(3)容量性钙内流与细胞自噬第40-41页
3、自噬与急性神经系统损伤第41-44页
(1)自噬与兴奋性毒性第41页
(2)自噬与急性神经毒性反应第41-42页
(3)自噬与脑外伤第42-43页
(4)自噬与脑卒中第43-44页
第一部分 容量性钙内流在脑缺血再灌注损伤中的作用第44-66页
1 材料第45-48页
  1.1 实验动物第45页
  1.2 实验试剂及材料第45-46页
  1.3 PCR引物序列第46-47页
  1.4 实验设备第47-48页
2 方法第48-54页
  2.1 原代海马神经元分离与培养第48页
  2.2 OGD/Rep.模型制作第48-49页
  2.3 神经元蛋白提取及样品制备第49页
  2.4 神经元RNA提取及实时定量PCR(RT-qPCR)第49-50页
  2.5 神经元毒性检测第50-51页
  2.6 神经元凋亡染色(TUNEL染色)第51页
  2.7 免疫蛋白印迹(Western blotting,WB)第51-52页
  2.8 质粒转染第52页
  2.9 细胞内钙成像第52-53页
  2.10 慢病毒转染第53-54页
  2.11 统计与分析第54页
3 结果第54-64页
3.1、神经元氧糖剥夺再灌注(OGD/Rep.)模型建立及验证第54-57页
3.2、神经元OGD/Rep.处理后CCE主要构成分子时空表达变化第57-60页
3.3、神经元OGD/Rep.处理后细胞内钙水平及CCE改变第60-61页
3.4、抑制CCE对OGD/Rep.介导的神经元损伤的作用第61-64页
4 讨论第64-66页
第二部分 抑制容量性钙内流介导的神经保护作用的具体机制研究第66-83页
1 材料第66-68页
  1.1 实验动物第66页
  1.2 实验试剂第66-67页
  1.3 实验设备第67-68页
2 方法第68-69页
  2.1 原代海马神经元分离与培养第68页
  2.2 海马神经元OGD/Rep.模型制作第68页
  2.3 神经元蛋白提取及样品制备第68页
  2.4 神经元RNA提取及样品制备第68页
  2.5 神经元毒性检测第68页
  2.6 免疫蛋白印迹(WB)第68页
  2.7 细胞自噬水平荧光检测第68-69页
  2.8 统计与分析第69页
3 结果第69-80页
  3.1 神经元OGD/Rep.损伤后自噬流改变第69-73页
  3.2 调节自噬水平对神经元OGD/Rep.损伤的影响第73-74页
  3.3 抑制CCE对OGD/Rep.引起的自噬流的影响第74-77页
  3.4 抑制CCE对Ca~(2+)-CaMKII-m TOR通路的影响第77-79页
  3.5 CaMKII-mTOR信号在CCE抑制介导的神经保护中的作用第79-80页
4 讨论第80-83页
第三部分 HOMER1A与容量性钙内流间相互作用关系研究第83-103页
1 材料第84-85页
  1.1 实验细胞第84页
  1.2 实验试剂第84-85页
  1.3 实验设备第85页
2 方法第85-88页
  2.1 细胞复苏、培养与传代第85-86页
  2.2 氧化应激造模第86页
  2.3 蛋白提取及样品制备第86页
  2.4 细胞活力及毒性检测第86页
  2.5 线粒体氧化应激水平检测第86页
  2.6 STIM1、Orai1空间分布检测第86-87页
  2.7 免疫荧光染色第87页
  2.8 免疫共沉淀第87页
  2.9 质粒构建及慢病毒包装第87-88页
2.10细胞钙成像第88页
  2.11 统计与分析第88页
3 结果第88-100页
  3.1 氧化应激损伤造模第88-89页
  3.2 氧化应激损伤后,CCE主要构成分子时空变化第89-91页
  3.3 抑制CCE对谷氨酸诱导的氧化应激损伤的影响第91-94页
  3.4 氧化应激损伤后,Homer蛋白水平改变第94页
  3.5 调控Homer1a蛋白水平对氧化应激损伤的影响第94-96页
  3.6 调控Homer1a蛋白水平对氧化应激介导的钙超载及线粒体氧化水平的影响第96-98页
  3.7 调控Homer1a蛋白水平对CCE所介导的钙内流的影响第98-99页
  3.8 调控Homer1a蛋白水平对STIM1-Orai1蛋白复合体形成的影响第99-100页
4 讨论第100-103页
小结第103-105页
参考文献第105-121页
个人简历和研究成果第121-124页
致谢第124页

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