论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-33页 |
| 1.1 前列腺癌概述 | 第12页 |
| 1.2 前列腺癌主要信号通路 | 第12-14页 |
| 1.3 雄激素受体（AR）的结构与功能 | 第14-17页 |
| 1.3.1 N-端区域（NTD) | 第14页 |
| 1.3.2 DNA结合区域(DBD) | 第14-15页 |
| 1.3.3 铰链区域（H） | 第15页 |
| 1.3.4 配体结合区域（LBD） | 第15-17页 |
| 1.4 去势抵抗型前列腺癌发生原因 | 第17-18页 |
| 1.5 前列腺癌及去势抵抗型前列腺癌治疗手段与策略 | 第18-20页 |
| 1.5.1 以结构为基础的AR靶向药物的开发 | 第19页 |
| 1.5.2 主要前列腺癌药物的作用机理 | 第19-20页 |
| 1.5.3 CRPC治疗策略与手段 | 第20页 |
| 1.6 FKBP51与前列腺癌发生发展关系 | 第20-26页 |
| 1.6.1 FKBP51在前列腺癌中的功能 | 第20-22页 |
| 1.6.2 FKBP51在体内的其他功能 | 第22-23页 |
| 1.6.3 FKBP51的结构与功能域 | 第23-25页 |
| 1.6.4 FKBP51的药物发现与设计 | 第25-26页 |
| 1.7 对硝基酚(PNP)与前列腺癌 | 第26-28页 |
| 1.7.1 环境污染物－对硝基酚 | 第26-27页 |
| 1.7.2 对硝基酚在前列腺癌中的抗雄作用 | 第27-28页 |
| 1.8 雷帕霉素(rapamycin)与前列腺癌 | 第28-29页 |
| 1.8.1 Rapamycin的抗肿瘤功能 | 第28-29页 |
| 1.8.2 Rapamycin与FKBP51的相互作用 | 第29页 |
| 1.9 前期工作、立题依据和本课题主要研究内容 | 第29-33页 |
| 1.9.1 前期工作 | 第29-30页 |
| 1.9.2 立题依据 | 第30页 |
| 1.9.3 本课题主要研究内容 | 第30-33页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第33-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-38页 |
| 2.1.1 实验菌株和载体质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第33页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第34-37页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.1.6 实验中用到的软件 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-58页 |
| 2.2.1 蛋白表达 | 第38-40页 |
| 2.2.2 蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 蛋白浓缩 | 第41-42页 |
| 2.2.4 蛋白质结晶及结构分析 | 第42-45页 |
| 2.2.5 虚拟筛选小分子 | 第45-46页 |
| 2.2.6 蛋白与小分子相互作用实验 （ 荧光淬灭实验 ， florescencequenching assay） | 第46-48页 |
| 2.2.7 结合自由能计算 | 第48页 |
| 2.2.8 分子动力学（MD)模拟 | 第48-49页 |
| 2.2.9 前列腺癌细胞的复苏、培养、传代及冻存 | 第49页 |
| 2.2.10 细胞培养及细胞传代 | 第49-50页 |
| 2.2.11 MTT法检测细胞生长增殖 | 第50-51页 |
| 2.2.12 qRT-PCR检测AR所调控的下游基因的表达 | 第51-53页 |
| 2.2.13 统计学方法 | 第53页 |
| 2.2.14 前列腺癌细胞的蛋白提取： | 第53-54页 |
| 2.2.15 BCA法测定目的蛋白浓度： | 第54页 |
| 2.2.16 Western blotting －聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳） | 第54-58页 |
| 第三章 实验结果 | 第58-79页 |
| 3.1 对硝基酚（PNP）通过与FKBP51相互作用抑制AR信号通路 | 第58-68页 |
| 3.1.1 FKBP51的FK1区域的纯化 | 第58页 |
| 3.1.2 FKBP51的FK1区域与对硝基酚（PNP)的相互作用 | 第58-60页 |
| 3.1.3 FK1与 对硝基酚（PNP）结合的复合物（FK1-PNP complex）结构 | 第60-62页 |
| 3.1.4 分子动力学(MD)模拟FK1与对硝基酚（PNP）结合的稳定性 | 第62-64页 |
| 3.1.5 FK1区域与对硝基酚（PNP）结合的结合自由能 | 第64页 |
| 3.1.6 热点氨基酸残基自由能分布 | 第64-65页 |
| 3.1.7 对硝基酚（PNP）抑制了前列腺癌细胞AR的信号通路 | 第65-67页 |
| 3.1.8 FKBP51和FKBP52的序列比对 | 第67-68页 |
| 3.2 虚拟筛选FKBP51的小分子抑制剂及rapamycin抑制AR信号通路 | 第68-79页 |
| 3.2.1 纯化FKBP51的FK1蛋白 | 第68-69页 |
| 3.2.2 FKBP51蛋白与小分子相互作用（分子淬灭实验） | 第69-71页 |
| 3.2.3 虚拟筛选小分子结合FKBP51蛋白的解离常数 | 第71-73页 |
| 3.2.4 Rapamycin抑制前列腺癌细胞生长 | 第73-74页 |
| 3.2.5 Rapamycin与FKBP51的相互作用（淬灭反应） | 第74-75页 |
| 3.2.6 FKBP51与rapamycin结合复合物的结构（X-晶体衍射） | 第75-77页 |
| 3.2.7 Rapamycin抑制AR调控的下游基因mRNA的表达 | 第77-78页 |
| 3.2.8 Rapamycin抑制AR调控的下游基因蛋白水平的表达 | 第78-79页 |
| 第四章 讨论 | 第79-87页 |
| 4.1 对硝基酚（PNP）通过与FKBP51相互作用抑制AR信号通路 | 第79-82页 |
| 4.2 靶向FKBP51的虚拟筛选小分子 | 第82-84页 |
| 4.3 Rapamycin抑制AR信号通路 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 在学期间的研究成果 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
