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INSR和GPCR信号通路串话激活胰腺癌细胞内YAP机制研究

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INSR和GPCR信号通路串话激活胰腺癌细胞内YAP机制研究
论文目录
 
中文摘要第1-7页
Abstract第7-13页
缩略语/符号说明第13-15页
前言第15-17页
研究现状、成果第15-16页
研究目的、方法第16-17页
一、胰腺癌中GPCR和Insulin/IGF-1 信号串话对YAP调控第17-46页
  1.1 实验材料第17-19页
    1.1.1 胰腺癌细胞株第17页
    1.1.2 试验试剂和耗材第17-19页
    1.1.3 主要仪器第19页
  1.2 实验方法第19-29页
    1.2.1 细胞培养第19-20页
    1.2.2 Western Blot免疫蛋白印迹法检测胰腺癌细胞的蛋白磷酸化水平第20-22页
    1.2.3 细胞增殖计数及克隆形成实验观察neurotensin与insulin对胰腺癌细胞株生长影响第22-23页
    1.2.4 qRT-PCR方法检测胰腺癌细胞株YAP下游相关因子mRNA表达水平第23-26页
    1.2.5 阳离子脂质体Lipofectamine~(TM) RNAiMax干扰siRNA转染PANC-1 和Mia Pa Ca-2 胰腺癌细胞株第26-27页
    1.2.6 PANC-1 和MiaPaCa-2 胰腺癌细胞株免疫荧光染色观察YAP在细胞内迁移情况第27-28页
    1.2.7 ~3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法([~3H]-Thymidine Incorporation)检测转染后的胰腺癌细胞DNA深入量第28-29页
  1.3 实验结果第29-39页
    1.3.1 免疫荧光染色观察YAP在PANC-1 和MiaPaCa-2 胰腺癌细胞内迁移情况第29-32页
    1.3.2 Western Blot监测YAP磷酸化表达水平第32-34页
    1.3.3 qRT-PCR技术监测下游靶基因mRNA水平第34-36页
    1.3.4 Lipofectamine~(TM) RNAiMax siRNA转染第36-37页
    1.3.5 细胞增殖计数和克隆形成实验结果第37-39页
    1.3.6 [~3H]-Thymidine Incorporation分析DNA合成结果第39页
  1.4 统计学处理第39页
  1.5 讨论第39-45页
  1.6 小结第45-46页
二、PI3K/m TOR在Insulin/IGF-1 和GPCRs信号串话对YAP调控中的作用第46-63页
  2.1 实验材料第46-48页
    2.1.1 胰腺癌细胞株第46页
    2.1.2 试验试剂和耗材第46-47页
    2.1.3 主要仪器第47-48页
  2.2 实验方法第48-49页
    2.2.1 PANC-1 和MiaPaC-2 胰腺癌细胞培养第48页
    2.2.2 Western Blot检测药物处理前后胰腺癌细胞蛋白表达第48页
    2.2.3 qRT-PCR技术检测胰腺癌细胞药物治疗后相关因子mRNA表达第48页
    2.2.4 Lipofectamine~(TM)3000介导AKT-PH-GFP转染PANC-1 和MiaPaCa-2细胞第48-49页
  2.3 结果第49-57页
    2.3.1 免疫蛋白印迹法检测药物剂量依赖的蛋白磷酸化水平第50-51页
    2.3.2 Insulin/IGF-1 受体和G蛋白偶联受体激动剂增强细胞膜PIP3表达第51-52页
    2.3.3 PI3K抑制剂减弱PIP3在细胞膜聚集第52-55页
    2.3.4 qRT-PCR技术监测PI3K和mTOR抑制剂对YAP下游靶基因mRNA表达水平影响第55-57页
  2.4 统计学处理第57页
  2.5 讨论第57-62页
  2.6 小结第62-63页
三、PKD在Insulin/IGF-1 和GPCRs信号串话对YAP调控中的作用第63-76页
  3.1 实验材料第63-65页
    3.1.1 胰腺癌细胞株第63页
    3.1.2 实验试剂和耗材第63-64页
    3.1.3 主要仪器第64-65页
  3.2 实验方法第65-66页
    3.2.1 细胞培养第65页
    3.2.2 免疫蛋白印迹法检测胰腺癌细胞蛋白表达水平第65页
    3.2.3 qRT-PCR方法检测药物治疗胰腺癌细胞后YAP-TEAD下游相关因子mRNA表达水平第65页
    3.2.4 PKD特异性siRNA转染PANC-1 和MiaPaCa-2 胰腺癌细胞第65-66页
  3.3 结果第66-71页
    3.3.1 Western Blot监测药物剂量依赖的蛋白磷酸化水平表达第66-68页
    3.3.2 qRT-PCR技术检测YAP下游靶基因mRNA表达水平第68-69页
    3.3.3 PKD特异性siRNA转染细胞对YAP下游靶基因mRNA水平和PKD磷酸化水平影响第69-71页
  3.4 统计学处理第71页
  3.5 讨论第71-75页
  3.6 小结第75-76页
四、他汀类药物对YAP活性的影响第76-92页
  4.1 实验材料第76-77页
    4.1.1 胰腺癌细胞株第76页
    4.1.2 试验试剂和耗材第76-77页
    4.1.3 主要仪器第77页
  4.2 实验方法第77-79页
    4.2.1 PANC-1 和MiaPaC-2 胰腺癌细胞培养第77页
    4.2.2 免疫荧光染色观察他汀类药物对YAP核质移位影响第77-78页
    4.2.3 细胞计数及克隆形成实验观察他汀类药物对胰腺癌细胞株生长增殖的影响第78-79页
    4.2.4 qRT-PCR方法检测胰腺癌细胞药物治疗后YAP下游相关因子mRNA表达水第79页
  4.3 实验结果第79-86页
    4.3.1 Cerivastatin和Simvastatin对PANC-1 细胞内YAP核质迁移影响第79-80页
    4.3.2 细胞增殖计数与克隆形成检测他汀类药物对胰腺癌细胞生长增殖影响第80-82页
    4.3.3 qRT-PCR技术检测他汀类药物治疗胰腺癌细胞后YAP-TEAD下游相关因子mRNA水平的表达第82-86页
  4.4 统计学处理第86页
  4.5 讨论第86-90页
  4.6 小结第90-92页
全文结论第92-94页
论文创新点第94-95页
参考文献第95-107页
发表论文和参加科研情况说明第107-108页
综述 Hippo-YAP信号通路在肿瘤中的研究进展第108-125页
综述参考文献第117-125页
致谢第125-126页
个人简历第126页

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