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Clorf61基因在人肝细胞肝癌中的表达和功能研究

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Clorf61基因在人肝细胞肝癌中的表达和功能研究
论文目录
 
论文创新点第1-10页
摘要第10-12页
Abstract第12-15页
  1. 引言第15-36页
  1.1 肝癌第15-17页
    1.1.1 肝癌的病因与诊断第15-16页
    1.1.2 肝癌的预防和治疗第16-17页
  1.2 HBV与肝癌第17-19页
    1.2.1 HBV基因组结构和编码蛋白第17-18页
    1.2.2 HBV感染和HCC肿瘤发生第18-19页
  1.3 HCC相关的信号转导途径及关键致癌分子第19-25页
    1.3.1 Wnt/β-catenin信号通路第20-22页
    1.3.2 Epidermal growth factor(EGF)信号途径第22-23页
    1.3.3 TGF-β与HCC第23-24页
    1.3.4 抑癌基因P53第24-25页
  1.4 EMT与HCC第25-30页
    1.4.1 EMT与HCC肿瘤迁移和侵袭第25-28页
    1.4.2 肿瘤发生中EMT的其它作用第28-30页
  1.5 Clorf61基因研究进展第30-33页
    1.5.1 Clorf61基因的发现第30-31页
    1.5.2 Clorf61的结构第31页
    1.5.3 Clorf61基因的功能第31-33页
  1.6 本研究出发点第33-36页
  2. 实验材料与方法第36-57页
  2.1 实验材料第36-40页
    2.1.1 细胞株和菌株第36页
    2.1.2 药品试剂第36-37页
    2.1.3 抗体第37页
    2.1.4 质粒及转染试剂第37页
    2.1.5 主要实验仪器设备第37-38页
    2.1.6 主要试剂的配制第38-40页
    2.1.7 生物学软件第40页
  2.2 实验方法第40-57页
    2.2.1 RNA的提取和定量第40-41页
      2.2.1.1 细胞系总RNA的提取第40-41页
      2.2.1.2 总RNA浓度测定与检测第41页
    2.2.2 RT-PCR第41页
    2.2.3 PCR扩增反应第41-42页
    2.2.4 电泳第42页
    2.2.5 Quantitative PCR检测Clorf61 mRNA表达水平第42-43页
    2.2.6 大肠杆菌感受态DH5α的制备第43页
    2.2.7 感受态细胞转化第43-44页
    2.2.8 重组质粒的构建及酶切鉴定第44-47页
    2.2.9 多克隆抗体制备和分析第47页
    2.2.10 组织芯片第47-49页
    2.2.11 免疫组化打分第49页
    2.2.12 细胞转染第49页
    2.2.13 激光共聚焦显微分析(Confocal)第49-50页
    2.2.14 细胞复苏、传代及冻存第50-51页
    2.2.15 慢病毒包装及细胞感染第51页
    2.2.16 流式细胞仪分选细胞第51-52页
    2.2.17 细胞总蛋白的提取及定量第52页
    2.2.18 Western Blot第52-53页
    2.2.19 细胞增殖实验第53页
    2.2.20 细胞周期分析第53-54页
    2.2.21 平板克隆形成实验第54页
    2.2.22 细胞划痕愈合实验第54-55页
    2.2.23 细胞迁移实验第55页
    2.2.24 细胞侵袭实验第55-56页
    2.2.25 统计学分析第56-57页
  3. 实验结果第57-91页
  3.1 Clorf61在人类胚胎发育过程中的表达第57-58页
  3.2 Clorf61基因的染色体定位与克隆第58-61页
  3.3 Clorf61多克隆抗体的制备和分析第61-63页
    3.3.1 Clorf61多克隆抗体的制备第61页
    3.3.2 Clorf61多克隆抗体的效价和特异性检测第61-63页
  3.4 Clorf61的流行病学调查第63-74页
    3.4.1 Clorf61在骨骼疾病患者中的表达调查第64-68页
    3.4.2 Clorf61在肝脏疾病患者中的表达调查第68-74页
      3.4.2.1 Clorf61的表达变化与肝脏疾病进展相关第68-71页
      3.4.2.2 HCC中Clorf61的表达与HBV感染相关第71-74页
  3.5 Clorf61基因在肝癌细胞株中的表达检测第74-79页
    3.5.1 Western Blotting和Q-PCR检测Clorf61的表达第74-76页
    3.5.2 Clorf61的亚细胞定位第76-79页
  3.6 Clorf61稳转细胞系的建立第79-81页
    3.6.1 慢病毒载体的构建第79页
    3.6.2 稳转细胞系的分选和鉴定第79-81页
  3.7 Clorf61对细胞增值和克隆形成的影响第81-84页
    3.7.1 Clorf61促进细胞增殖第81页
    3.7.2 Clorf61促进细胞克隆形成第81-83页
    3.7.3 Clorf61对细胞周期及周期相关蛋白的影响第83-84页
  3.8 Clorf61促进细胞迁移和侵袭第84-87页
  3.9 Clorf61诱导细胞发生EMT第87-91页
    3.9.1 Clorf61对EMT标记蛋白表达的影响第87-89页
    3.9.2 Clorf61促使细胞形态变化第89-91页
  4. 讨论第91-104页
  4.1 研究背景第91-92页
  4.2 Clorf61基因的克隆和抗体制备第92-93页
  4.3 Clorf61的流行病学调查第93-95页
  4.4 HBV促进Clorf61的表达第95-96页
  4.5 Clorf61的细胞系表达谱和亚细胞定位第96-98页
  4.6 Clorf61促进细胞增殖和克隆形成第98-99页
  4.7 Clorf61促进细胞迁移和侵袭第99-100页
  4.8 Clorf61促进细胞发生EMT转换第100-104页
研究总结与展望第104-106页
参考文献第106-120页
缩略词第120-121页
博士研究生期间发表的论文第121-122页
致谢第122-123页

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