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酿酒酵母中synphilin-1蛋白聚集物形成分子机理的研究

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酿酒酵母中synphilin-1蛋白聚集物形成分子机理的研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-14页
第1章 绪论第14-37页
  1.1 研究的目的和意义第14-15页
  1.2 国内外相关研究领域的研究综述第15-34页
    1.2.1 帕金森氏症相关研究第15-17页
    1.2.2 Synphilin-1 蛋白研究进展第17-23页
    1.2.3 酿酒酵母人化模型的应用研究第23-29页
    1.2.4 合成遗传阵列方法的研究进展第29-34页
  1.3 相关研究中存在的问题第34-35页
  1.4 课题来源及主要研究内容第35-37页
    1.4.1 课题来源第35页
    1.4.2 主要研究内容第35-37页
第2章 实验材料与方法第37-52页
  2.1 实验材料第37-40页
    2.1.1 菌株和质粒第37页
    2.1.2 培养基和相关溶液第37-39页
    2.1.3 酶和试剂第39-40页
    2.1.4 实验主要仪器第40页
  2.2 实验方法第40-52页
    2.2.1 Synphilin-1 质询菌株的构建第40-41页
    2.2.2 表达synphilin-1 的酵母突变菌株库构建第41-43页
    2.2.3 酵母阵列synphilin-1 聚集物的诱导表达第43页
    2.2.4 Synphilin-1 聚集物表型的确定第43-44页
    2.2.5 高通量图像的获取和分析第44页
    2.2.6 高通量筛选突变株的人工手动验证第44-45页
    2.2.7 质粒及基因组DNA的提取第45页
    2.2.8 质粒的酶切验证第45-46页
    2.2.9 酵母微管蛋白和肌动蛋白荧光染色第46页
    2.2.10 酿酒酵母线粒体染色第46-47页
    2.2.11 Synphilin-1 与Hsp104和Rnq1的定位第47页
    2.2.12 荧光显微镜图像的获取分析第47页
    2.2.13 Western Blot杂交第47-48页
    2.2.14 功能富集和互作网络分析第48页
    2.2.15 潮霉素B筛选标记质粒的构建第48-50页
    2.2.16 基因功能互补实验第50页
    2.2.17 酿酒酵母生长的测定第50页
    2.2.18 微管抑制剂处理第50-51页
    2.2.19 统计学方法计算及常用软件第51-52页
第3章 表达synphilin-1 酵母突变库的构建及分析第52-70页
  3.1 引言第52页
  3.2 表达synphilin-1 酵母菌株的构建第52-55页
  3.3 表达synphilin-1 酵母突变菌株库构建第55-58页
    3.3.1 质询菌株细胞板菌落的构建第55-56页
    3.3.2 表达Synphilin-1 酵母突变库的构建第56-58页
  3.4 合成缺陷菌株筛选及物理互作分析第58-69页
    3.4.1 表达synphilin-1 突变株的合成缺陷分析第59-61页
    3.4.2 合成缺陷菌株的验证第61-64页
    3.4.3 基因功能富集和互作分析第64-69页
  3.5 本章小结第69-70页
第4章 Synphilin-1 蛋白聚集必需基因的高通量筛选第70-92页
  4.1 引言第70页
  4.2 Synphilin-1 蛋白聚集物筛选条件的确定第70-72页
  4.3 相关基因的高通量筛选第72-74页
  4.4 高通量筛选所得突变株的手动验证第74-81页
    4.4.1 手动验证条件的确定第74-75页
    4.4.2 突变菌株手动验证第75-76页
    4.4.3 基于荧光信号强度的二级筛选第76-81页
  4.5 基因功能富集和分子机理分析第81-87页
    4.5.1 动力蛋白和细胞骨架组织相关基因第84-85页
    4.5.2 姊妹染色单体结合相关基因第85-86页
    4.5.3 糖脂生物合成途径相关基因第86-87页
    4.5.4 Cdc73/Paf1复合体相关基因第87页
  4.6 Synphilin-1 蛋白聚集物形成增加的突变株第87-90页
  4.7 本章小结第90-92页
第5章 Synphilin-1 聚集物形成与合成缺陷研究第92-114页
  5.1 引言第92页
  5.2 聚集物筛选与合成缺陷筛选分析第92-100页
    5.2.1 双筛选中的重叠突变株分析第92-96页
    5.2.2 质粒选择抗性的转换第96-98页
    5.2.3 重叠基因的互补实验分析第98-100页
  5.3 Synphilin-1 蛋白聚集物与细胞骨架蛋白定位分析第100-104页
    5.3.1 Synphilin-1 蛋白聚集物与微管定位分析第100-101页
    5.3.2 细胞微管骨架形成抑制剂处理分析第101-102页
    5.3.3 聚集物与肌动蛋白结构定位分析第102-103页
    5.3.4 细胞骨架参与synphilin-1 聚集物形成的机理第103-104页
  5.4 Synphilin-1 蛋白聚集物的定位第104-113页
    5.4.1 细胞质量控制区域定位第105-107页
    5.4.2 与淀粉样蛋白Rnq1的定位第107-109页
    5.4.3 与线粒体的定位分析第109-113页
  5.5 本章小结第113-114页
结论第114-116页
参考文献第116-129页
附录第129-141页
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果第141-143页
致谢第143-144页
个人简历第144页

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