论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-14页 |
第1章 绪论 | 第14-37页 |
1.1 研究的目的和意义 | 第14-15页 |
1.2 国内外相关研究领域的研究综述 | 第15-34页 |
1.2.1 帕金森氏症相关研究 | 第15-17页 |
1.2.2 Synphilin-1 蛋白研究进展 | 第17-23页 |
1.2.3 酿酒酵母人化模型的应用研究 | 第23-29页 |
1.2.4 合成遗传阵列方法的研究进展 | 第29-34页 |
1.3 相关研究中存在的问题 | 第34-35页 |
1.4 课题来源及主要研究内容 | 第35-37页 |
1.4.1 课题来源 | 第35页 |
1.4.2 主要研究内容 | 第35-37页 |
第2章 实验材料与方法 | 第37-52页 |
2.1 实验材料 | 第37-40页 |
2.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
2.1.2 培养基和相关溶液 | 第37-39页 |
2.1.3 酶和试剂 | 第39-40页 |
2.1.4 实验主要仪器 | 第40页 |
2.2 实验方法 | 第40-52页 |
2.2.1 Synphilin-1 质询菌株的构建 | 第40-41页 |
2.2.2 表达synphilin-1 的酵母突变菌株库构建 | 第41-43页 |
2.2.3 酵母阵列synphilin-1 聚集物的诱导表达 | 第43页 |
2.2.4 Synphilin-1 聚集物表型的确定 | 第43-44页 |
2.2.5 高通量图像的获取和分析 | 第44页 |
2.2.6 高通量筛选突变株的人工手动验证 | 第44-45页 |
2.2.7 质粒及基因组DNA的提取 | 第45页 |
2.2.8 质粒的酶切验证 | 第45-46页 |
2.2.9 酵母微管蛋白和肌动蛋白荧光染色 | 第46页 |
2.2.10 酿酒酵母线粒体染色 | 第46-47页 |
2.2.11 Synphilin-1 与Hsp104和Rnq1的定位 | 第47页 |
2.2.12 荧光显微镜图像的获取分析 | 第47页 |
2.2.13 Western Blot杂交 | 第47-48页 |
2.2.14 功能富集和互作网络分析 | 第48页 |
2.2.15 潮霉素B筛选标记质粒的构建 | 第48-50页 |
2.2.16 基因功能互补实验 | 第50页 |
2.2.17 酿酒酵母生长的测定 | 第50页 |
2.2.18 微管抑制剂处理 | 第50-51页 |
2.2.19 统计学方法计算及常用软件 | 第51-52页 |
第3章 表达synphilin-1 酵母突变库的构建及分析 | 第52-70页 |
3.1 引言 | 第52页 |
3.2 表达synphilin-1 酵母菌株的构建 | 第52-55页 |
3.3 表达synphilin-1 酵母突变菌株库构建 | 第55-58页 |
3.3.1 质询菌株细胞板菌落的构建 | 第55-56页 |
3.3.2 表达Synphilin-1 酵母突变库的构建 | 第56-58页 |
3.4 合成缺陷菌株筛选及物理互作分析 | 第58-69页 |
3.4.1 表达synphilin-1 突变株的合成缺陷分析 | 第59-61页 |
3.4.2 合成缺陷菌株的验证 | 第61-64页 |
3.4.3 基因功能富集和互作分析 | 第64-69页 |
3.5 本章小结 | 第69-70页 |
第4章 Synphilin-1 蛋白聚集必需基因的高通量筛选 | 第70-92页 |
4.1 引言 | 第70页 |
4.2 Synphilin-1 蛋白聚集物筛选条件的确定 | 第70-72页 |
4.3 相关基因的高通量筛选 | 第72-74页 |
4.4 高通量筛选所得突变株的手动验证 | 第74-81页 |
4.4.1 手动验证条件的确定 | 第74-75页 |
4.4.2 突变菌株手动验证 | 第75-76页 |
4.4.3 基于荧光信号强度的二级筛选 | 第76-81页 |
4.5 基因功能富集和分子机理分析 | 第81-87页 |
4.5.1 动力蛋白和细胞骨架组织相关基因 | 第84-85页 |
4.5.2 姊妹染色单体结合相关基因 | 第85-86页 |
4.5.3 糖脂生物合成途径相关基因 | 第86-87页 |
4.5.4 Cdc73/Paf1复合体相关基因 | 第87页 |
4.6 Synphilin-1 蛋白聚集物形成增加的突变株 | 第87-90页 |
4.7 本章小结 | 第90-92页 |
第5章 Synphilin-1 聚集物形成与合成缺陷研究 | 第92-114页 |
5.1 引言 | 第92页 |
5.2 聚集物筛选与合成缺陷筛选分析 | 第92-100页 |
5.2.1 双筛选中的重叠突变株分析 | 第92-96页 |
5.2.2 质粒选择抗性的转换 | 第96-98页 |
5.2.3 重叠基因的互补实验分析 | 第98-100页 |
5.3 Synphilin-1 蛋白聚集物与细胞骨架蛋白定位分析 | 第100-104页 |
5.3.1 Synphilin-1 蛋白聚集物与微管定位分析 | 第100-101页 |
5.3.2 细胞微管骨架形成抑制剂处理分析 | 第101-102页 |
5.3.3 聚集物与肌动蛋白结构定位分析 | 第102-103页 |
5.3.4 细胞骨架参与synphilin-1 聚集物形成的机理 | 第103-104页 |
5.4 Synphilin-1 蛋白聚集物的定位 | 第104-113页 |
5.4.1 细胞质量控制区域定位 | 第105-107页 |
5.4.2 与淀粉样蛋白Rnq1的定位 | 第107-109页 |
5.4.3 与线粒体的定位分析 | 第109-113页 |
5.5 本章小结 | 第113-114页 |
结论 | 第114-116页 |
参考文献 | 第116-129页 |
附录 | 第129-141页 |
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第141-143页 |
致谢 | 第143-144页 |
个人简历 | 第144页 |