论文目录 | |
中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
缩略语 | 第11-14页 |
前言 | 第14-18页 |
研究现状、成果 | 第14-15页 |
研究目的、方法 | 第15-18页 |
一、PINK1在细胞周期中呈现周期性波动变化 | 第18-41页 |
1.1 对象和方法 | 第20-26页 |
1.1.1 细胞培养 | 第20页 |
1.1.2 主要试剂及配制 | 第20-21页 |
1.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
1.1.4 免疫印迹 | 第22-24页 |
1.1.5 细胞周期同步化处理 | 第24-26页 |
1.1.6 细胞周期时相分析 | 第26页 |
1.2 结果 | 第26-35页 |
1.2.1 胸腺嘧啶双阻断Hela细胞,释放后检测不同时间点PINK1的含量 | 第26-29页 |
1.2.2 诺考达唑同步化细胞后,检测PINK1随细胞周期变化而波动 | 第29-32页 |
1.2.3 T98G分析细胞周期中PINK1的变化 | 第32-33页 |
1.2.4 其他细胞类型PINK1随细胞周期的变化 | 第33-35页 |
1.3 讨论 | 第35-40页 |
1.3.1 有丝分裂后期促进复合体的功能 | 第35-36页 |
1.3.2 APC结构 | 第36-37页 |
1.3.3 泛素-蛋白酶系统 | 第37-38页 |
1.3.4 Parkin激活机制 | 第38-39页 |
1.3.5 线粒体质量控制 | 第39-40页 |
1.3.6 细胞同步化方法 | 第40页 |
1.4 小结 | 第40-41页 |
二、Cdc20于转录后水平下调PINK1的含量 | 第41-55页 |
2.1 对象和方法 | 第41-49页 |
2.1.1 细胞培养 | 第41页 |
2.1.2 主要试剂及配制 | 第41-42页 |
2.1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
2.1.4 总RNA提取 | 第43-44页 |
2.1.5 反转录合成cDNA | 第44-45页 |
2.1.6 实时定量PCR | 第45-46页 |
2.1.7 shCDC20, shCDH1质粒构建 | 第46-48页 |
2.1.8 慢病毒(Lentivirus)包装 | 第48页 |
2.1.9 慢病毒感染 | 第48-49页 |
2.2 结果 | 第49-51页 |
2.2.1 Cdc20的敲低延长PINK1的半衰期 | 第49-50页 |
2.2.2 Cdc20的敲低不影响PINK1的mRNA含量 | 第50页 |
2.2.3 Cdc20的敲低上调PINK1的蛋白水平 | 第50-51页 |
2.3 讨论 | 第51-54页 |
2.3.1 Cdh1特点及结构 | 第51-53页 |
2.3.2 Cdh1与Cdc20底物选择特点 | 第53-54页 |
2.4 小结 | 第54-55页 |
三、Cdc20的WD40结构域识别PINK1的D-box,促进其泛素化降解 | 第55-67页 |
3.1 对象和方法 | 第58-61页 |
3.1.1 细胞培养 | 第58页 |
3.1.2 主要试剂及配制 | 第58-59页 |
3.1.3 主要仪器 | 第59-60页 |
3.1.4 质粒构建 | 第60页 |
3.1.5 293T细胞瞬时转染 | 第60-61页 |
3.1.6 免疫共沉淀(Co-IP) | 第61页 |
3.2 结果 | 第61-64页 |
3.2.1 Cdc20的WD40结构域可以识别并结合PINK1 | 第61-62页 |
3.2.2 Cdc20促进了PINK1的泛素化 | 第62-63页 |
3.2.3 PINK1中D-box对于Cdc20引起的泛素化是必需的 | 第63-64页 |
3.3 讨论 | 第64-66页 |
3.3.1 PINK1中的D-box模序 | 第64页 |
3.3.2 KEN-box APC识别的另外的一种信号 | 第64-65页 |
3.3.3 CRY-box是Cdc20降解的第二个信号 | 第65-66页 |
3.4 小结 | 第66-67页 |
四、Cdc20的低表达增强CCCP诱导的线粒体自噬 | 第67-90页 |
4.1 对象和方法 | 第71-79页 |
4.1.1 细胞培养 | 第71页 |
4.1.2 主要试剂及配制 | 第71-73页 |
4.1.3 主要仪器 | 第73-74页 |
4.1.4 质粒构建 | 第74-78页 |
4.1.5 慢病毒颗粒的包装 | 第78-79页 |
4.1.6 稳定细胞株构建 | 第79页 |
4.1.7 CCCP诱导线粒体自噬 | 第79页 |
4.2 结果 | 第79-85页 |
4.2.1 Hela YFP-Parkin,mt-Keima细胞系功能鉴定 | 第79-82页 |
4.2.2 TOMM20,COX II,Hsp60于蛋白水平检测线粒体自噬 | 第82-83页 |
4.2.3 mt-Keima评估线粒体自噬指标 | 第83-85页 |
4.3 讨论 | 第85-89页 |
4.3.1 Parkin,mt-Keima与线粒体自噬 | 第85-86页 |
4.3.2 线粒体蛋白与线粒体自噬 | 第86-87页 |
4.3.3 氧化应激,缺氧与线粒体自噬 | 第87-88页 |
4.3.4 线粒体自噬,肿瘤发生以及细胞死亡 | 第88-89页 |
4.4 小结 | 第89-90页 |
全文结论 | 第90-92页 |
论文创新点 | 第92-93页 |
参考文献 | 第93-103页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第103-104页 |
综述 线粒体自噬分子机制及紊乱所致相关疾病 | 第104-124页 |
综述参考文献 | 第116-124页 |
致谢 | 第124-125页 |
个人简历 | 第125页 |