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APCCdc20通过泛素化降解PINK1抑制线粒体自噬

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APCCdc20通过泛素化降解PINK1抑制线粒体自噬
论文目录
 
中文摘要第1-6页
Abstract第6-11页
缩略语第11-14页
前言第14-18页
研究现状、成果第14-15页
研究目的、方法第15-18页
一、PINK1在细胞周期中呈现周期性波动变化第18-41页
  1.1 对象和方法第20-26页
    1.1.1 细胞培养第20页
    1.1.2 主要试剂及配制第20-21页
    1.1.3 主要仪器第21-22页
    1.1.4 免疫印迹第22-24页
    1.1.5 细胞周期同步化处理第24-26页
    1.1.6 细胞周期时相分析第26页
  1.2 结果第26-35页
    1.2.1 胸腺嘧啶双阻断Hela细胞,释放后检测不同时间点PINK1的含量第26-29页
    1.2.2 诺考达唑同步化细胞后,检测PINK1随细胞周期变化而波动第29-32页
    1.2.3 T98G分析细胞周期中PINK1的变化第32-33页
    1.2.4 其他细胞类型PINK1随细胞周期的变化第33-35页
  1.3 讨论第35-40页
    1.3.1 有丝分裂后期促进复合体的功能第35-36页
    1.3.2 APC结构第36-37页
    1.3.3 泛素-蛋白酶系统第37-38页
    1.3.4 Parkin激活机制第38-39页
    1.3.5 线粒体质量控制第39-40页
    1.3.6 细胞同步化方法第40页
  1.4 小结第40-41页
二、Cdc20于转录后水平下调PINK1的含量第41-55页
  2.1 对象和方法第41-49页
    2.1.1 细胞培养第41页
    2.1.2 主要试剂及配制第41-42页
    2.1.3 主要仪器第42-43页
    2.1.4 总RNA提取第43-44页
    2.1.5 反转录合成cDNA第44-45页
    2.1.6 实时定量PCR第45-46页
    2.1.7 shCDC20, shCDH1质粒构建第46-48页
    2.1.8 慢病毒(Lentivirus)包装第48页
    2.1.9 慢病毒感染第48-49页
  2.2 结果第49-51页
    2.2.1 Cdc20的敲低延长PINK1的半衰期第49-50页
    2.2.2 Cdc20的敲低不影响PINK1的mRNA含量第50页
    2.2.3 Cdc20的敲低上调PINK1的蛋白水平第50-51页
  2.3 讨论第51-54页
    2.3.1 Cdh1特点及结构第51-53页
    2.3.2 Cdh1与Cdc20底物选择特点第53-54页
  2.4 小结第54-55页
三、Cdc20的WD40结构域识别PINK1的D-box,促进其泛素化降解第55-67页
  3.1 对象和方法第58-61页
    3.1.1 细胞培养第58页
    3.1.2 主要试剂及配制第58-59页
    3.1.3 主要仪器第59-60页
    3.1.4 质粒构建第60页
    3.1.5 293T细胞瞬时转染第60-61页
    3.1.6 免疫共沉淀(Co-IP)第61页
  3.2 结果第61-64页
    3.2.1 Cdc20的WD40结构域可以识别并结合PINK1第61-62页
    3.2.2 Cdc20促进了PINK1的泛素化第62-63页
    3.2.3 PINK1中D-box对于Cdc20引起的泛素化是必需的第63-64页
  3.3 讨论第64-66页
    3.3.1 PINK1中的D-box模序第64页
    3.3.2 KEN-box APC识别的另外的一种信号第64-65页
    3.3.3 CRY-box是Cdc20降解的第二个信号第65-66页
  3.4 小结第66-67页
四、Cdc20的低表达增强CCCP诱导的线粒体自噬第67-90页
  4.1 对象和方法第71-79页
    4.1.1 细胞培养第71页
    4.1.2 主要试剂及配制第71-73页
    4.1.3 主要仪器第73-74页
    4.1.4 质粒构建第74-78页
    4.1.5 慢病毒颗粒的包装第78-79页
    4.1.6 稳定细胞株构建第79页
    4.1.7 CCCP诱导线粒体自噬第79页
  4.2 结果第79-85页
    4.2.1 Hela YFP-Parkin,mt-Keima细胞系功能鉴定第79-82页
    4.2.2 TOMM20,COX II,Hsp60于蛋白水平检测线粒体自噬第82-83页
    4.2.3 mt-Keima评估线粒体自噬指标第83-85页
  4.3 讨论第85-89页
    4.3.1 Parkin,mt-Keima与线粒体自噬第85-86页
    4.3.2 线粒体蛋白与线粒体自噬第86-87页
    4.3.3 氧化应激,缺氧与线粒体自噬第87-88页
    4.3.4 线粒体自噬,肿瘤发生以及细胞死亡第88-89页
  4.4 小结第89-90页
全文结论第90-92页
论文创新点第92-93页
参考文献第93-103页
发表论文和参加科研情况说明第103-104页
综述 线粒体自噬分子机制及紊乱所致相关疾病第104-124页
综述参考文献第116-124页
致谢第124-125页
个人简历第125页

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