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腺病毒介导IL-10基因与抗CD20单克隆抗体联合干预对NOD鼠T1D自然发病早期胰岛β细胞的保护作用及机制研究

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腺病毒介导IL-10基因与抗CD20单克隆抗体联合干预对NOD鼠T1D自然发病早期胰岛β细胞的保护作用及机制研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-14页
引言第14-17页
第一部分 富集与扩增携有鼠白细胞介素-10 基因的重组腺病毒载体第17-35页
实验材料第17-18页
1 主要仪器第17页
2 主要耗材及试剂第17-18页
实验方法第18-26页
1 重组腺病毒包装的细胞准备第18-20页
  1.1 HEK293细胞计数第18-19页
  1.2 HEK293细胞活性计数第19页
  1.3 HEK293细胞的冻存第19页
  1.4 HEK293细胞的复苏第19页
  1.5 HEK293细胞的传代第19-20页
2 重组腺病毒的包装第20-22页
3 重组腺病毒的扩增、富集与滴度测定第22-26页
  3.1 Ad-IL-10 的富集第22-23页
  3.2 Ad-IL-10 的扩增第23页
  3.3 Ad-IL-10 的滴度测定(TCID50法)第23-26页
结果第26-27页
1 重组腺病毒的富集第26-27页
2 重组腺病毒的扩增和滴度测定第27页
讨论第27-30页
结论第30-31页
参考文献第31-35页
第二部分 腺病毒介导的IL-10基因与抗CD20单克隆抗体联合干预对发病早期非肥胖性糖尿病鼠(NOD)鼠胰岛 β 细胞的保护作用及机制研究第35-80页
实验材料第35-40页
1 主要仪器第35-36页
  1.1 HE染色相关仪器第35页
  1.2 TUNEL染色相关仪器第35页
  1.3 免疫组化相关仪器第35页
  1.4 qRT-PCR相关仪器第35-36页
  1.5 Western Blot相关仪器第36页
2 主要试剂和耗材第36-39页
  2.1 HE染色相关试剂和耗材第36-37页
  2.2 TUNEL染色相关试剂和耗材第37页
  2.3 免疫组化相关试剂和耗材第37-38页
  2.4 qRT-PCR相关试剂和耗材第38页
  2.5 Western Blot相关试剂和耗材第38-39页
3 实验动物第39-40页
实验方法第40-54页
1 实验动物分组、处理及标本采集第40页
  1.1 动物分组第40页
  1.2 动物处理及标本采集第40页
2 体重、血糖及基本生命体征的监测第40-41页
3 HE染色评价胰岛炎症情况第41页
4 TUNEL染色观察胰岛 β 细胞凋亡情况第41-42页
5 免疫组化法测CD20、IL-10 表达情况第42-43页
6 ELISA法测血清相关指标第43-47页
  6.1 血清C-肽测定第43-44页
  6.2 血清TNF-α 测定第44-45页
  6.3 血清IFN-γ 测定第45页
  6.4 血清IL-10 测定第45-46页
  6.5 血清IL-4 测定第46页
  6.6 胰腺胰岛素测定第46-47页
7 qRT-PCR测凋亡相关基因的表达情况第47-50页
  7.1 RNA的提取第47页
  7.2 RNA浓度和纯度的测定第47页
  7.3 引物设计第47-48页
  7.4 cDNA第一链合成第48-49页
  7.5 qRT-PCR预实验第49页
  7.6 qRT-PCR实验第49-50页
8 Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况第50-54页
  8.1 蛋白制备第50页
  8.2 蛋白定量第50-51页
  8.3 SDS-PAGE电泳第51-53页
  8.4 免疫印迹第53-54页
  8.5 图像分析第54页
9 统计学方法分析第54页
结果第54-72页
1 体重、血糖及基本生命体征的监测第54-56页
  1.1 小鼠的一般情况第54页
  1.2 各组NOD鼠体质量比较第54-55页
  1.3 各组NOD鼠血糖比较第55-56页
2 HE染色评价胰岛炎症情况第56-58页
3 TUNEL染色观察胰岛 β 细胞凋亡第58-59页
4 免疫组化第59-61页
  4.1 胰腺局部IL-10 表达情况第59-60页
  4.2 胰腺局部CD20表达情况第60-61页
5 ELISA法测血清相关指标第61-62页
  5.1 血清IL-10、C-肽、胰腺胰岛素分泌情况第61页
  5.2 血清TNF-α、IFN-γ、IL-4 分泌情况第61-62页
6 qRT-PCR测凋亡相关基因的表达情况第62-66页
  6.1 胰腺局部IL-10 mRNA表达情况第62页
  6.2 胰腺局部CD20 mRNA表达情况第62-63页
  6.3 胰腺局部insulin mRNA表达情况第63-64页
  6.4 胰腺局部Bcl-2、Bax mRNA表达情况第64-66页
7 Western Blot法测凋亡相关蛋白的表达情况第66-72页
  7.1 胰腺局部pro-caspase3、cleaved-caspase-3、cleaved -caspase-8、cleaved-caspase-9 蛋白表达情况第66-69页
  7.2 胰腺局部Bcl-2、Bax蛋白表达情况第69-72页
讨论第72-76页
结论第76-77页
参考文献第77-80页
综述 1型糖尿病胰岛 β 细胞保护策略研究进展第80-137页
一、T1D发病机制的研究进展第80-91页
  1. B细胞与T1D第80-81页
  2. T细胞与T1D第81-89页
  3. NK细胞与T1D第89页
  4. 单核-巨噬细胞与T1D第89-90页
  5. DC细胞与T1D第90-91页
二、与胰岛 β 细胞凋亡相关的信号转导通路第91-98页
  1. MAPK信号转导通路第91-92页
  2. JNK通路第92页
  3. P38通路第92-93页
  4. NF-κB通路第93-94页
  5. mTORC1-S6K1信号通路第94-95页
  6. HIF-1α-Bcl-xL通路第95页
  7. Wnt信号通路第95-96页
  8. PI3K-Akt/PKB信号通路第96-98页
三、T1D的免疫治疗新方法第98-105页
  1. 单克隆抗体第98-100页
  2. 抗原特异性疫苗第100-102页
  3. 细胞因子第102-103页
  4. 免疫抑制剂第103-104页
  5. 酶抑制剂第104页
  6. 多种治疗策略的联合应用第104-105页
四、胰岛 β 细胞的转化与再生第105-111页
  1.1 将胰岛 α 细胞转化为 β 细胞第106页
  1.2 将肝细胞转化为胰岛 β 细胞第106-108页
  1.3 将胰岛 δ 细胞转化为 β 细胞第108-111页
五、胰岛移植与干细胞移植第111-113页
综述参考文献第113-137页
攻读学位期间的研究成果第137-138页
附录第138-141页
致谢第141-142页

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