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ALA/LA对糖损伤HK-2细胞和DN db/db小鼠的作用及机制探讨

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ALA/LA对糖损伤HK-2细胞和DN db/db小鼠的作用及机制探讨
论文目录
 
中文摘要第1-6页
英文摘要第6-7页
主要缩写词表第7-16页
前言第16-22页
第一章 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞的作用及其机制探讨第22-76页
第一节 HK-2细胞糖损伤模型的建立第22-28页
1 材料第22-23页
  1.1 建模细胞第22页
  1.2 主要试剂及溶液配置第22-23页
  1.3 主要仪器和设备第23页
2 方法第23-24页
  2.1 细胞培养及处理第23页
  2.2 葡萄糖影响HK-2细胞生长的检测(MTT比色法)第23-24页
  2.3 数据处理第24页
3 结果第24-26页
  3.1 不同培养时间和葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响第24页
  3.2 不同培养时间和葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响第24-26页
4 讨论第26-27页
  4.1 MTT法的应用第26页
  4.2 不同培养时间,葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响第26-27页
  4.3 最适培养时间,葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响第27页
5 结论第27-28页
第二节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞葡萄糖吸收功能的影响第28-33页
1 材料第28页
1.1细胞与ALA,LA,EPA第28页
  1.2 主要试剂第28页
  1.3 主要仪器设备第28页
2 方法第28-30页
  2.1 细胞培养第29页
  2.2 ALA/BSA, LA/BSA, ALA/LA/BSA溶液制备第29页
  2.3 实验分组第29页
  2.4 测定细胞对葡萄糖的吸收(GOD-POD法)第29-30页
  2.5 葡萄糖吸收率的计算第30页
  2.6 数据处理第30页
3 结果第30-32页
  3.1 ALA/LA可以降低HK-2细胞培养液葡萄糖含量第30页
  3.2 ALA/LA促进HK-2细胞对葡萄糖的吸收第30-32页
4 讨论第32页
  4.1 ALA/LA对HK-2细胞培养液葡萄糖含量的影响第32页
  4.2 ALA/LA对HK-2细胞葡萄糖吸收的影响第32页
5 结论第32-33页
第三节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞氧化应激的影响第33-41页
1 材料第33-34页
  1.1 细胞与ALA,LA,EPA第33页
  1.2 主要试剂第33页
  1.3 主要仪器设备第33-34页
2 方法第34-37页
  2.1 HK-2细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)的测定第34页
  2.2 HK-2细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的测定第34-36页
  2.3 HK-2细胞过氧化氢酶(CAT)的检测第36页
  2.4 HK-2细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)的检测第36-37页
  2.5 数据处理第37页
3 结果第37-39页
  3.1 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞的SOD水平第37-39页
  3.2 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞GSH-PX水平第39页
  3.3 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞CAT水平第39页
  3.4 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞NADPH-PX水平第39页
4 讨论第39-40页
  4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的影响第39页
  4.2 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性影响第39-40页
  4.3 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞过氧化氢酶(CAT)活性的影响第40页
  4.4 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)活性的影响第40页
5 结论第40-41页
第四节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞因子的影响第41-51页
1 材料第41-42页
  1.1 HK-2细胞和ALA,LA,EPA第41页
  1.2 主要试剂第41-42页
  1.3 主要仪器设备第42页
2 方法第42-45页
  2.1 HK-2细胞TGF-p1水平的测定第42-43页
  2.2 HK-2细胞IGF-1水平的测定第43-44页
  2.3 HK-2细胞MCP-1水平的测定第44-45页
  2.4 数据处理第45页
3 结果第45-48页
  3.1 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的IGF-1水平第45页
  3.2 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的TGF-β_1水平第45页
  3.3 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的MCP-1水平第45-46页
  3.4 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的MCP-1、TGF-β_1mRNA水平第46-48页
4 讨论第48-50页
  4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞IGF-1水平的影响第48-49页
  4.2 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞TGF-β_1水平的影响第49页
  4.3 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞MCP-1水平的影响第49-50页
5 结论第50-51页
第五节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞ROS生成及细胞凋亡的影响第51-59页
1 材料第51-52页
  1.1 细胞和ALA, LA, EPA第51页
  1.2 主要试剂第51-52页
  1.3 主要仪器和设备第52页
2 方法第52-53页
  2.1 HK-2细胞培养第52页
  2.2 溶液制备第52页
  2.3 HK-2细胞ROS水平检测第52-53页
  2.4 HK-2细胞凋亡检测第53页
  2.5 数据处理第53页
3 结果第53-57页
  3.1 ALA/LA抑制糖损伤HK-2细胞ROS生成第53-55页
  3.2 ALA/LA抑制糖损伤HK-2细胞凋亡第55-57页
4 讨论第57-58页
  4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞ROS生成的影响第57页
  4.2 高糖刺激与ALA/AL对HK-2细胞凋亡的影响第57-58页
5 结论第58-59页
第六节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞P38通路及TGF-β_1 mRNA表达的影响第59-76页
1 材料第59-60页
  1.1 细胞和ALA, LA, EPA第59页
  1.2 主要试剂第59-60页
  1.3 主要仪器第60页
2 方法第60-65页
  2.1 HK-2细胞p38、TGF-β_1mRNA表达的检测第60-63页
  2.2 HK-2细胞p38/p-p38、TGF-β_1蛋白表达的检测第63-65页
  2.3 数据处理第65页
3 结果第65-74页
  3.1 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞TGF-β_1和p38 MAPK的mRNA表达量第65-68页
  3.2 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞p38和TGF-β_1的蛋白表达量第68-74页
4 讨论第74页
  4.1 p38信号通路与TGF-β_1及DN的发生发展第74页
  4.2 ALA/LA干预高糖HK-2细胞对TGF-β_1、p38及p-p38蛋白表达量的影响第74页
5 结论第74-76页
第二章 ALA/LA对DN db/db小鼠的作用及机制探讨第76-138页
第一节 db/db小鼠与DN动物模型构建第76-84页
1 材料第77页
  1.1 db/db小鼠和db/m小鼠第77页
  1.2 主要试剂第77页
  1.3 主要仪器第77页
2 方法第77-79页
  2.1 分组与建模第77页
  2.2 日饮水量测定第77页
  2.3 日摄食量测定第77-78页
  2.4 24h尿量测定第78页
  2.5 24h尿白蛋白测定第78页
  2.6 空腹血糖测定第78-79页
  2.7 数据处理第79页
3 结果第79-82页
  3.1 各组小鼠日饮水量比较第79页
  3.2 各组小鼠日摄食量比较第79-80页
  3.3 各组小鼠24h尿白蛋白含量的比较第80页
  3.4 各组小鼠24h尿量的比较第80-81页
  3.5 各组小鼠空腹血糖(FBG)的比较第81-82页
  3.6 各组小鼠体重的比较第82页
4 讨论第82-83页
  4.1 db/db小鼠的生物学特征第82-83页
  4.2 DN模型判断第83页
5 结论第83-84页
第二节 ALA/LA干预对DN db/db小鼠的作用第84-94页
1 材料第84-85页
  1.1 实验动物与ALA,LA第84页
  1.2 饲料配方第84页
  1.4 主要仪器第84-85页
2 方法第85-87页
  2.1 观察动物生长情况第85页
  2.2 标本收集与处理第85页
  2.3 血糖测走第85页
  2.4 肾功能测定第85-87页
  2.5 数据处理第87页
3 结果第87-90页
  3.1 ALA/LA降低DN db/db小鼠体重第87页
  3.2 ALA/LA降低DN db/db小鼠空腹血糖(FBG)第87-88页
  3.3 ALA/LA降低DN db/db小鼠脏体比第88页
  3.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠的肾功能第88-90页
  3.5 ALA/LA降低DN db/db小鼠血液炎性因子TNF-α、IGF-1的水平第90页
4 讨论第90-93页
  4.1 ALA/LA对DN db/db小鼠体重的影响第90-91页
  4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠空腹血糖(FBG)的影响第91页
  4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠脏体比的影响第91页
  4.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠肾功能的影响第91-92页
  4.5 ALA/LA对DN db/db小鼠分泌炎症因子的作用第92-93页
5 结论第93-94页
第三节 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏氧化应激水平的影响第94-105页
1 材料第94-95页
  1.1 实验动物与ALA,LA第94页
  1.2 主要试剂第94页
  1.3 主要仪器与设备第94-95页
2 方法第95-98页
  2.1 8-羟基脱氢鸟苷(8-OHDG)测定第95-96页
  2.2 小鼠肾脏组织T-SOD测定第96页
  2.3 小鼠肾脏组织过氧化氢酶(CAT)的检测第96-97页
  2.4 小鼠肾脏组织丙二醛(MDA)的检测第97-98页
  2.5 小鼠肾脏组织活性氧簇(ROS)的检测第98页
  2.6 数据处理第98页
3 结果第98-102页
  3.1 ALA/LA抑制DN db/db小鼠肾脏生成氧化应激产物8-OHDG和MDA第98-99页
  3.2 ALA/LA可提高DN db/db小鼠肾脏组织抗氧化酶SOD和CAT活性第99-100页
  3.3 ALA/LA能够抑制DN db/db小鼠肾脏组织ROS生成第100-102页
4 讨论第102-104页
  4.1 ALA/LA对DN db/db小鼠尿8-OHDG和肾组织MDA水平的影响第102页
  4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏组织SOD和CAT的影响第102-103页
  4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏组织ROS生成量的影响第103-104页
5 结论第104-105页
第四节 ALA/LA对DN db/db小鼠肝脏和肾脏病理形态学的影响第105-121页
1 材料第105-107页
  1.1 实验动物和ALA、LA第105页
  1.2 主要试剂及溶液配制第105-107页
  1.3 主要仪器和设备第107页
2 方法第107-111页
  2.1 苏木素-伊红(Hematoxin Eosin, HE)染色实验第108页
  2.2 过碘酸雪夫(Periodic Acid Schiff,PAS)染色第108-109页
  2.3 马松三色染色(Masson's Trichrom Stain)第109-110页
  2.4 电镜样品制作步骤第110-111页
  2.5 数据处理第111页
3 结果第111-118页
  3.1 ALA/LA可以减轻DN db/db小鼠肝脏病理形态学损伤第111-112页
  3.3 ALA/LA能够减轻DN db/db小鼠肾脏病理PAS染色形态学损伤第112-114页
  3.4 ALA/LA减轻DN db/db小鼠肾脏Masson染色病理形态学损伤第114-115页
  3.5 ALA/LA改善DN db/db小鼠电镜下肾脏病理形态学的损伤第115-118页
4 讨论第118-120页
  4.1 光镜病理切片HE、Masson和PAS染色的差别和意义第118页
  4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠肝脏病理形态学(光镜HE染色)的影响第118页
  4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏病理切片HE、PAS、Masson染色形态学的影响第118-119页
  4.4 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏电镜病理形态学损伤的影响第119-120页
5 结论第120-121页
第五节 ALA/LA对DN db/db小鼠肾组织纤维化的作用及机制探讨第121-138页
1 材料第121-123页
  1.1 实验动物和ALA、LA第121页
  1.2 主要试剂第121-122页
  1.3 主要仪器与设备第122-123页
2 方法第123-127页
  2.1 Realtime PCR第123-125页
  2.2 Westen-Blot第125-127页
  2.3 数据处理第127页
3 结果第127-135页
  3.1 ALA/LA抑制TGF-β_1、P38、ERK和COLⅣmRNA的表达第127-131页
  3.2 低剂量ALA/LA降低肾脏组织TGF-β_1、p-p38、p-ERK和COLⅣ蛋白的表达第131-135页
4 讨论第135-137页
  4.1 MAPKs与DN的发生发展第135-136页
  4.2 ALA/LA抑制P38通路,下调TGF-β_1、COLⅣ蛋白表达,抑制DN db/db小鼠的纤维化发展第136-137页
  4.3 ALA/LA抑制ERK信号通路,下调TGF-β_1、COLⅣ蛋白表达,减慢DN db/db小鼠的纤维化发展第137页
5 结论第137-138页
全文总结第138-139页
参考文献第139-150页
综述第150-169页
参考文献第162-169页
作者简介第169-171页
致谢第171页

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