论文目录 | |
中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
主要缩写词表 | 第7-16页 |
前言 | 第16-22页 |
第一章 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞的作用及其机制探讨 | 第22-76页 |
第一节 HK-2细胞糖损伤模型的建立 | 第22-28页 |
1 材料 | 第22-23页 |
1.1 建模细胞 | 第22页 |
1.2 主要试剂及溶液配置 | 第22-23页 |
1.3 主要仪器和设备 | 第23页 |
2 方法 | 第23-24页 |
2.1 细胞培养及处理 | 第23页 |
2.2 葡萄糖影响HK-2细胞生长的检测(MTT比色法) | 第23-24页 |
2.3 数据处理 | 第24页 |
3 结果 | 第24-26页 |
3.1 不同培养时间和葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响 | 第24页 |
3.2 不同培养时间和葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响 | 第24-26页 |
4 讨论 | 第26-27页 |
4.1 MTT法的应用 | 第26页 |
4.2 不同培养时间,葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响 | 第26-27页 |
4.3 最适培养时间,葡萄糖浓度对HK-2细胞存活率的影响 | 第27页 |
5 结论 | 第27-28页 |
第二节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞葡萄糖吸收功能的影响 | 第28-33页 |
1 材料 | 第28页 |
1.1细胞与ALA,LA,EPA | 第28页 |
1.2 主要试剂 | 第28页 |
1.3 主要仪器设备 | 第28页 |
2 方法 | 第28-30页 |
2.1 细胞培养 | 第29页 |
2.2 ALA/BSA, LA/BSA, ALA/LA/BSA溶液制备 | 第29页 |
2.3 实验分组 | 第29页 |
2.4 测定细胞对葡萄糖的吸收(GOD-POD法) | 第29-30页 |
2.5 葡萄糖吸收率的计算 | 第30页 |
2.6 数据处理 | 第30页 |
3 结果 | 第30-32页 |
3.1 ALA/LA可以降低HK-2细胞培养液葡萄糖含量 | 第30页 |
3.2 ALA/LA促进HK-2细胞对葡萄糖的吸收 | 第30-32页 |
4 讨论 | 第32页 |
4.1 ALA/LA对HK-2细胞培养液葡萄糖含量的影响 | 第32页 |
4.2 ALA/LA对HK-2细胞葡萄糖吸收的影响 | 第32页 |
5 结论 | 第32-33页 |
第三节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞氧化应激的影响 | 第33-41页 |
1 材料 | 第33-34页 |
1.1 细胞与ALA,LA,EPA | 第33页 |
1.2 主要试剂 | 第33页 |
1.3 主要仪器设备 | 第33-34页 |
2 方法 | 第34-37页 |
2.1 HK-2细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)的测定 | 第34页 |
2.2 HK-2细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的测定 | 第34-36页 |
2.3 HK-2细胞过氧化氢酶(CAT)的检测 | 第36页 |
2.4 HK-2细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)的检测 | 第36-37页 |
2.5 数据处理 | 第37页 |
3 结果 | 第37-39页 |
3.1 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞的SOD水平 | 第37-39页 |
3.2 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞GSH-PX水平 | 第39页 |
3.3 ALA/LA提升糖损伤HK-2细胞CAT水平 | 第39页 |
3.4 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞NADPH-PX水平 | 第39页 |
4 讨论 | 第39-40页 |
4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的影响 | 第39页 |
4.2 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性影响 | 第39-40页 |
4.3 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞过氧化氢酶(CAT)活性的影响 | 第40页 |
4.4 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH-PX)活性的影响 | 第40页 |
5 结论 | 第40-41页 |
第四节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞因子的影响 | 第41-51页 |
1 材料 | 第41-42页 |
1.1 HK-2细胞和ALA,LA,EPA | 第41页 |
1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
1.3 主要仪器设备 | 第42页 |
2 方法 | 第42-45页 |
2.1 HK-2细胞TGF-p1水平的测定 | 第42-43页 |
2.2 HK-2细胞IGF-1水平的测定 | 第43-44页 |
2.3 HK-2细胞MCP-1水平的测定 | 第44-45页 |
2.4 数据处理 | 第45页 |
3 结果 | 第45-48页 |
3.1 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的IGF-1水平 | 第45页 |
3.2 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的TGF-β_1水平 | 第45页 |
3.3 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的MCP-1水平 | 第45-46页 |
3.4 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞的MCP-1、TGF-β_1mRNA水平 | 第46-48页 |
4 讨论 | 第48-50页 |
4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞IGF-1水平的影响 | 第48-49页 |
4.2 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞TGF-β_1水平的影响 | 第49页 |
4.3 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞MCP-1水平的影响 | 第49-50页 |
5 结论 | 第50-51页 |
第五节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞ROS生成及细胞凋亡的影响 | 第51-59页 |
1 材料 | 第51-52页 |
1.1 细胞和ALA, LA, EPA | 第51页 |
1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
1.3 主要仪器和设备 | 第52页 |
2 方法 | 第52-53页 |
2.1 HK-2细胞培养 | 第52页 |
2.2 溶液制备 | 第52页 |
2.3 HK-2细胞ROS水平检测 | 第52-53页 |
2.4 HK-2细胞凋亡检测 | 第53页 |
2.5 数据处理 | 第53页 |
3 结果 | 第53-57页 |
3.1 ALA/LA抑制糖损伤HK-2细胞ROS生成 | 第53-55页 |
3.2 ALA/LA抑制糖损伤HK-2细胞凋亡 | 第55-57页 |
4 讨论 | 第57-58页 |
4.1 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞ROS生成的影响 | 第57页 |
4.2 高糖刺激与ALA/AL对HK-2细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
5 结论 | 第58-59页 |
第六节 ALA/LA对糖损伤HK-2细胞P38通路及TGF-β_1 mRNA表达的影响 | 第59-76页 |
1 材料 | 第59-60页 |
1.1 细胞和ALA, LA, EPA | 第59页 |
1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
1.3 主要仪器 | 第60页 |
2 方法 | 第60-65页 |
2.1 HK-2细胞p38、TGF-β_1mRNA表达的检测 | 第60-63页 |
2.2 HK-2细胞p38/p-p38、TGF-β_1蛋白表达的检测 | 第63-65页 |
2.3 数据处理 | 第65页 |
3 结果 | 第65-74页 |
3.1 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞TGF-β_1和p38 MAPK的mRNA表达量 | 第65-68页 |
3.2 ALA/LA降低糖损伤HK-2细胞p38和TGF-β_1的蛋白表达量 | 第68-74页 |
4 讨论 | 第74页 |
4.1 p38信号通路与TGF-β_1及DN的发生发展 | 第74页 |
4.2 ALA/LA干预高糖HK-2细胞对TGF-β_1、p38及p-p38蛋白表达量的影响 | 第74页 |
5 结论 | 第74-76页 |
第二章 ALA/LA对DN db/db小鼠的作用及机制探讨 | 第76-138页 |
第一节 db/db小鼠与DN动物模型构建 | 第76-84页 |
1 材料 | 第77页 |
1.1 db/db小鼠和db/m小鼠 | 第77页 |
1.2 主要试剂 | 第77页 |
1.3 主要仪器 | 第77页 |
2 方法 | 第77-79页 |
2.1 分组与建模 | 第77页 |
2.2 日饮水量测定 | 第77页 |
2.3 日摄食量测定 | 第77-78页 |
2.4 24h尿量测定 | 第78页 |
2.5 24h尿白蛋白测定 | 第78页 |
2.6 空腹血糖测定 | 第78-79页 |
2.7 数据处理 | 第79页 |
3 结果 | 第79-82页 |
3.1 各组小鼠日饮水量比较 | 第79页 |
3.2 各组小鼠日摄食量比较 | 第79-80页 |
3.3 各组小鼠24h尿白蛋白含量的比较 | 第80页 |
3.4 各组小鼠24h尿量的比较 | 第80-81页 |
3.5 各组小鼠空腹血糖(FBG)的比较 | 第81-82页 |
3.6 各组小鼠体重的比较 | 第82页 |
4 讨论 | 第82-83页 |
4.1 db/db小鼠的生物学特征 | 第82-83页 |
4.2 DN模型判断 | 第83页 |
5 结论 | 第83-84页 |
第二节 ALA/LA干预对DN db/db小鼠的作用 | 第84-94页 |
1 材料 | 第84-85页 |
1.1 实验动物与ALA,LA | 第84页 |
1.2 饲料配方 | 第84页 |
1.4 主要仪器 | 第84-85页 |
2 方法 | 第85-87页 |
2.1 观察动物生长情况 | 第85页 |
2.2 标本收集与处理 | 第85页 |
2.3 血糖测走 | 第85页 |
2.4 肾功能测定 | 第85-87页 |
2.5 数据处理 | 第87页 |
3 结果 | 第87-90页 |
3.1 ALA/LA降低DN db/db小鼠体重 | 第87页 |
3.2 ALA/LA降低DN db/db小鼠空腹血糖(FBG) | 第87-88页 |
3.3 ALA/LA降低DN db/db小鼠脏体比 | 第88页 |
3.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠的肾功能 | 第88-90页 |
3.5 ALA/LA降低DN db/db小鼠血液炎性因子TNF-α、IGF-1的水平 | 第90页 |
4 讨论 | 第90-93页 |
4.1 ALA/LA对DN db/db小鼠体重的影响 | 第90-91页 |
4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠空腹血糖(FBG)的影响 | 第91页 |
4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠脏体比的影响 | 第91页 |
4.4 ALA/LA改善DN db/db小鼠肾功能的影响 | 第91-92页 |
4.5 ALA/LA对DN db/db小鼠分泌炎症因子的作用 | 第92-93页 |
5 结论 | 第93-94页 |
第三节 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏氧化应激水平的影响 | 第94-105页 |
1 材料 | 第94-95页 |
1.1 实验动物与ALA,LA | 第94页 |
1.2 主要试剂 | 第94页 |
1.3 主要仪器与设备 | 第94-95页 |
2 方法 | 第95-98页 |
2.1 8-羟基脱氢鸟苷(8-OHDG)测定 | 第95-96页 |
2.2 小鼠肾脏组织T-SOD测定 | 第96页 |
2.3 小鼠肾脏组织过氧化氢酶(CAT)的检测 | 第96-97页 |
2.4 小鼠肾脏组织丙二醛(MDA)的检测 | 第97-98页 |
2.5 小鼠肾脏组织活性氧簇(ROS)的检测 | 第98页 |
2.6 数据处理 | 第98页 |
3 结果 | 第98-102页 |
3.1 ALA/LA抑制DN db/db小鼠肾脏生成氧化应激产物8-OHDG和MDA | 第98-99页 |
3.2 ALA/LA可提高DN db/db小鼠肾脏组织抗氧化酶SOD和CAT活性 | 第99-100页 |
3.3 ALA/LA能够抑制DN db/db小鼠肾脏组织ROS生成 | 第100-102页 |
4 讨论 | 第102-104页 |
4.1 ALA/LA对DN db/db小鼠尿8-OHDG和肾组织MDA水平的影响 | 第102页 |
4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏组织SOD和CAT的影响 | 第102-103页 |
4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏组织ROS生成量的影响 | 第103-104页 |
5 结论 | 第104-105页 |
第四节 ALA/LA对DN db/db小鼠肝脏和肾脏病理形态学的影响 | 第105-121页 |
1 材料 | 第105-107页 |
1.1 实验动物和ALA、LA | 第105页 |
1.2 主要试剂及溶液配制 | 第105-107页 |
1.3 主要仪器和设备 | 第107页 |
2 方法 | 第107-111页 |
2.1 苏木素-伊红(Hematoxin Eosin, HE)染色实验 | 第108页 |
2.2 过碘酸雪夫(Periodic Acid Schiff,PAS)染色 | 第108-109页 |
2.3 马松三色染色(Masson's Trichrom Stain) | 第109-110页 |
2.4 电镜样品制作步骤 | 第110-111页 |
2.5 数据处理 | 第111页 |
3 结果 | 第111-118页 |
3.1 ALA/LA可以减轻DN db/db小鼠肝脏病理形态学损伤 | 第111-112页 |
3.3 ALA/LA能够减轻DN db/db小鼠肾脏病理PAS染色形态学损伤 | 第112-114页 |
3.4 ALA/LA减轻DN db/db小鼠肾脏Masson染色病理形态学损伤 | 第114-115页 |
3.5 ALA/LA改善DN db/db小鼠电镜下肾脏病理形态学的损伤 | 第115-118页 |
4 讨论 | 第118-120页 |
4.1 光镜病理切片HE、Masson和PAS染色的差别和意义 | 第118页 |
4.2 ALA/LA对DN db/db小鼠肝脏病理形态学(光镜HE染色)的影响 | 第118页 |
4.3 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏病理切片HE、PAS、Masson染色形态学的影响 | 第118-119页 |
4.4 ALA/LA对DN db/db小鼠肾脏电镜病理形态学损伤的影响 | 第119-120页 |
5 结论 | 第120-121页 |
第五节 ALA/LA对DN db/db小鼠肾组织纤维化的作用及机制探讨 | 第121-138页 |
1 材料 | 第121-123页 |
1.1 实验动物和ALA、LA | 第121页 |
1.2 主要试剂 | 第121-122页 |
1.3 主要仪器与设备 | 第122-123页 |
2 方法 | 第123-127页 |
2.1 Realtime PCR | 第123-125页 |
2.2 Westen-Blot | 第125-127页 |
2.3 数据处理 | 第127页 |
3 结果 | 第127-135页 |
3.1 ALA/LA抑制TGF-β_1、P38、ERK和COLⅣmRNA的表达 | 第127-131页 |
3.2 低剂量ALA/LA降低肾脏组织TGF-β_1、p-p38、p-ERK和COLⅣ蛋白的表达 | 第131-135页 |
4 讨论 | 第135-137页 |
4.1 MAPKs与DN的发生发展 | 第135-136页 |
4.2 ALA/LA抑制P38通路,下调TGF-β_1、COLⅣ蛋白表达,抑制DN db/db小鼠的纤维化发展 | 第136-137页 |
4.3 ALA/LA抑制ERK信号通路,下调TGF-β_1、COLⅣ蛋白表达,减慢DN db/db小鼠的纤维化发展 | 第137页 |
5 结论 | 第137-138页 |
全文总结 | 第138-139页 |
参考文献 | 第139-150页 |
综述 | 第150-169页 |
参考文献 | 第162-169页 |
作者简介 | 第169-171页 |
致谢 | 第171页 |