论文目录 | |
摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
中英文缩略词表 | 第11-14页 |
第一部分 引言 | 第14-23页 |
1.1 概述 | 第14页 |
1.2 血管生成 | 第14-16页 |
1.3 ALK1—全新的抗血管生成药物靶点 | 第16-20页 |
1.3.1 TGF-β家族概述 | 第16-18页 |
1.3.2 ALK1与血管生成 | 第18-19页 |
1.3.3 ALK1抗肿瘤血管生成靶标 | 第19-20页 |
1.4 AMPK | 第20-21页 |
1.5 命题的前提与假设 | 第21-23页 |
第二部分AMPK抑制BMP9信号通路及血管生成 | 第23-58页 |
2.1 材料 | 第24-28页 |
2.1.1 实验细胞 | 第24页 |
2.1.2 主要试剂 | 第24-27页 |
2.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
2.2 方法 | 第28-44页 |
2.2.1 细胞复苏、传代、冻存与培养 | 第28-29页 |
2.2.2 Western Blot检测 | 第29-31页 |
2.2.3 Tube formation实验 | 第31-32页 |
2.2.4 基质胶塞实验Matrigel plug model | 第32页 |
2.2.5 Cy5-labeled lectin染色 | 第32-33页 |
2.2.6 AMPK a1永久性活性突变体腺病毒的制备 | 第33-40页 |
2.2.7 AMPK a1显性负性突变体腺病毒重组质粒的构建 | 第40页 |
2.2.8 AMPK a1永久性活性突变和显性负性突变体腺病毒的包装、扩增和浓缩 | 第40-43页 |
2.2.9 腺病毒感染HUVECs | 第43页 |
2.2.10 Tube formation体外检测AMPK CA/DN对血管生成的影响 | 第43-44页 |
2.2.11 Western体外检测AMPK CA、AMPK DN对BMP信号通路的影响 | 第44页 |
2.2.12 结果统计与分析 | 第44页 |
2.3 结果 | 第44-55页 |
2.3.1 Metformin对HUVECs细胞BMP信号通路影响 | 第44-45页 |
2.3.2 Metformin抑制BMP9介导的管腔形成 | 第45-47页 |
2.3.3 多种AMPK激活剂抑制BMP9介导的信号通路及管腔形成 | 第47-49页 |
2.3.4 成功构建表达AMPK CA、AMPK DN的腺病毒 | 第49-50页 |
2.3.5 AMPK CA对BMP9信号通路的影响 | 第50页 |
2.3.6 AMPK CA对tube formation的影响 | 第50-52页 |
2.3.7 AMPK DN对Smad1/5 磷酸化的影响 | 第52页 |
2.3.8 AMPK DN对tube formation的影响 | 第52-53页 |
2.3.9 Metformin抑制BMP9介导的血管生成 | 第53-55页 |
2.4 讨论 | 第55-58页 |
第三部分AMPK抑制ALK1介导的信号通路及管腔形成 | 第58-84页 |
3.1 材料 | 第58-62页 |
3.1.1 实验细胞 | 第58页 |
3.1.2 主要试剂 | 第58-61页 |
3.1.3 主要仪器 | 第61-62页 |
3.2 方法 | 第62-76页 |
3.2.1 细胞培养 | 第62页 |
3.2.2 ALK1永久性活性突变体(Q201D)腺病毒的制备 | 第62-72页 |
3.2.3 ALK-AAD腺病毒的包装、扩增和浓缩 | 第72-74页 |
3.2.4 腺病毒感染HUVECs | 第74-75页 |
3.2.5 Tube formation体外检测二甲双胍对ALK1 AAD介导血管生成影响 | 第75页 |
3.2.6 Western体外检测AMPK激活剂对ALK1 AAD信号通路的影响 | 第75-76页 |
3.3 结果 | 第76-82页 |
3.3.1 成功扩增ALK1 AAD序列 | 第76-77页 |
3.3.2 Topo Blunt连接成功 | 第77页 |
3.3.3 成功将ALK1 AAD插入到p-Adtrack CMV载体中 | 第77-78页 |
3.3.4 成功构建ALK1 AAD腺病毒重组质粒 | 第78页 |
3.3.5 成功包装表达ALK1 AAD腺病毒 | 第78-79页 |
3.3.6 二甲双胍抑制ALK1介导的信号通路 | 第79-80页 |
3.3.7 AMPK激活剂抑制ALK1介导的信号通路 | 第80页 |
3.3.8 二甲双胍抑制ALK1介导的tube formation | 第80-81页 |
3.3.9AMPK抑制ALK1介导的信号通路 | 第81-82页 |
3.4 讨论 | 第82-84页 |
第四部分 二甲双胍通过负性调节ALK1抑制Laser-induced CNV | 第84-105页 |
4.1 材料 | 第86-89页 |
4.1.1 实验细胞 | 第86页 |
4.1.2 主要试剂 | 第86-87页 |
4.1.3 主要仪器 | 第87-89页 |
4.2 方法 | 第89-96页 |
4.2.1 细胞复苏、传代与培养 | 第89页 |
4.2.2 高糖培养观察BMPs家族成员变化 | 第89-92页 |
4.2.3 Laser-induced CNV动物模型的复制 | 第92-93页 |
4.2.4 观察二甲双胍对Laser-induced CNV的影响 | 第93-94页 |
4.2.5 观察LDN212854对Laser-induced CNV的影响 | 第94页 |
4.2.6 免疫荧光 | 第94-95页 |
4.2.7 结果统计与分析 | 第95-96页 |
4.3 结果 | 第96-103页 |
4.3.1 高糖对ALK1蛋白表达的影响 | 第96页 |
4.3.2 高糖对BMPs家族成员mRNA表达量的影响 | 第96-98页 |
4.3.3 LDN212854抑制Laser-induced CNV | 第98-99页 |
4.3.4 二甲双胍抑制Laser-induced CNV | 第99-101页 |
4.3.5 免疫荧光双标结果显示二甲双胍抑制Laser-induced CNV中ALK1的表达 | 第101-102页 |
4.3.6 二甲双胍对Laser-induced CNV中TGF-β1 的表达影响 | 第102-103页 |
4.4 讨论 | 第103-105页 |
第五部分 结论与展望 | 第105-106页 |
5.1 结论 | 第105页 |
5.2 展望 | 第105-106页 |
致谢 | 第106-107页 |
参考文献 | 第107-117页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第117-118页 |
综述 | 第118-126页 |
参考文献 | 第123-126页 |
附录 | 第126页 |