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血管相关迁移细胞蛋白调控血管新生及血管平滑肌细胞迁移

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血管相关迁移细胞蛋白调控血管新生及血管平滑肌细胞迁移
论文目录
 
中文摘要第1-6页
英文摘要第6-15页
主要缩写词第15-17页
1 绪论第17-47页
  1.1 AAMP的研究进展第17-20页
    1.1.1 AAMP蛋白的结构和功能第17-19页
    1.1.2 AAMP与疾病的关系第19-20页
  1.2 血管新生研究现状第20-31页
    1.2.1 新血管生成的主要方式第20-22页
    1.2.2 Angiogenesis的具体过程及其调控机制第22-28页
    1.2.3 血管新生过程中的内皮细胞迁移第28-31页
  1.3 核受体PPARγ 与内皮功能和血管新生第31-42页
    1.3.1 PPARγ 的活化和调控基因表达第31-33页
    1.3.2 PPARγ 与内皮细胞功能第33-36页
    1.3.3 PPARγ 调控血管新生第36-42页
  1.4 问题的提出第42-45页
  1.5 整体研究思路及创新点第45-47页
2 AAMP的生物信息学分析和在血管新生中的作用第47-75页
  2.1 引言第47-48页
  2.2 实验材料与实验方法第48-58页
    2.2.1 主要实验仪器和实验材料第48-50页
    2.2.2 AAMP生物信息学分析第50页
    2.2.3 细胞培养第50页
    2.2.4 蛋白的免疫印迹Western Blot第50-51页
    2.2.5 细胞免疫荧光染色第51-52页
    2.2.6 AAMP干扰质粒的构建第52-53页
    2.2.7 细胞培养和细胞转染第53-54页
    2.2.8 血管内皮细胞体外管腔形成第54页
    2.2.9 大鼠主动脉环培养第54-55页
    2.2.10 小鼠后肢缺血模型的建立第55页
    2.2.11 小鼠组织总蛋白的提取第55-56页
    2.2.12 小鼠组织总RNA的提取第56页
    2.2.13 小鼠多种组织中AAMP的RT-PCR和蛋白免疫印迹第56-57页
    2.2.14 AAMP表达的荧光定量PCR第57-58页
    2.2.15 统计分析第58页
  2.3 实验结果第58-71页
    2.3.1 不同物种AAMP蛋白的比对分析第58-60页
    2.3.2 人AAMP基因的定位及基因结构分析第60-61页
    2.3.3 人AAMP蛋白的结构和可能互作用蛋白的预测第61-62页
    2.3.4 AAMP在多种细胞中的表达第62-64页
    2.3.5 AAMP在成年小鼠多种组织中的表达第64页
    2.3.6 AAMP与血管新生有关第64-66页
    2.3.7 AAMP干扰载体的构建和干扰效果验证第66-70页
    2.3.8 降低AAMP的表达或阻断AAMP的功能抑制体外血管新生第70-71页
  2.4 讨论第71-73页
    2.4.1 AAMP基因和蛋白结构与功能的关系第71-72页
    2.4.2 AAMP的表达模式与其功能的关系第72页
    2.4.3 AAMP参与血管新生与管腔形成和细胞出芽都有关系第72-73页
  2.5 本章小结第73-75页
3 AAMP通过调控内皮细胞迁移调控血管新生第75-107页
  3.1 引言第75-76页
  3.2 材料与方法第76-83页
    3.2.1 主要实验仪器和实验材料第76-78页
    3.2.2 AAMP高表达质粒的构建第78-80页
    3.2.3 带FLAG标签的AAMP表达质粒的构建第80页
    3.2.4 细胞培养及细胞转染第80页
    3.2.5 细胞增殖第80页
    3.2.6 细胞迁移,细胞粘附和细胞铺展第80-81页
    3.2.7 Western Blot和细胞免疫荧光染色第81页
    3.2.8 HUVECs中AAMP蛋白荧光强度分析第81页
    3.2.9 细胞膜Rho A的提取第81-82页
    3.2.10 细胞骨架应力纤维染色第82页
    3.2.11 凝胶收缩实验第82-83页
    3.2.12 跨膜区的预测第83页
    3.2.13 统计分析第83页
  3.3 实验结果第83-100页
    3.3.1 C端FLAG标签标记的AAMP真核表达载体的构建及细胞转染第83-85页
    3.3.2 AAMP蛋白在ECs上的定位第85-87页
    3.3.3 AAMP的表达受VEGF的诱导第87-88页
    3.3.4 VEGF调控AAMP蛋白的亚细胞定位第88-89页
    3.3.5 AAMP通过影响内皮细胞的迁移,粘附,铺展调节血管新生第89-94页
    3.3.6 AAMP与细胞骨架重构相关第94页
    3.3.7 AAMP影响Rho A在细胞膜上的定位第94-95页
    3.3.8 AAMP高表达载体的构建及细胞转染第95-97页
    3.3.9 Y27632抑制AAMP高表达诱导的细胞迁移和血管新生第97-100页
  3.4 讨论第100-105页
    3.4.1 AAMP定位于细胞质与细胞膜上与其功能密切相关第100-102页
    3.4.2 AAMP调控血管新生主要通过调控细胞迁移起作用第102-103页
    3.4.3 细胞骨架重构是AAMP调控细胞迁移过程中的重要事件第103-104页
    3.4.4 RhoA/ROCK信号参与AAMP调控的血管新生第104-105页
  3.5 本章小结第105-107页
4 罗格列酮激活的PPARΓ 信号参与调控AAMP介导的血管新生第107-133页
  4.1 引言第107-108页
  4.2 实验材料与实验方法第108-112页
    4.2.1 主要实验仪器和实验材料第108-109页
    4.2.2 细胞复苏及细胞培养第109-110页
    4.2.3 三维胶原基质上的内皮细胞管腔形成和主动脉血管环培养第110页
    4.2.4 细胞增殖和细胞迁移实验第110页
    4.2.5 细胞免疫荧光第110页
    4.2.6 细胞膜蛋白和胞浆蛋白的分离第110-111页
    4.2.7 蛋白免疫印迹第111页
    4.2.8 统计分析第111-112页
  4.3 实验结果第112-126页
    4.3.1 PPARγ 激动剂Rosiglitazone抑制血管新生第112页
    4.3.2 RSG抑制血管新生通过抑制细胞增殖和细胞迁移实现第112-114页
    4.3.3 RSG可以抑制AAMP的表达并依赖于PPARγ 的激活第114-118页
    4.3.4 AAMP高表达可以部分回救RSG抑制的细胞迁移和血管新生第118-120页
    4.3.5 RSG抑制AAMP的表达与p53的上调相关第120-123页
    4.3.6 RSG抑制AAMP向细胞膜转移与PPARγ 和p53相关第123页
    4.3.7 抑制p53可以缓解RSG对细胞迁移和血管新生的抑制作用第123-126页
  4.4 讨论第126-131页
    4.4.1 PPARγ 抑制血管新生与内皮细胞增殖和迁移有关第126-128页
    4.4.2 RSG抑制AAMP的表达依赖于PPAR-γ 表达上调,这一过程可能依赖于正反馈调节机制第128-129页
    4.4.3 RSG抑制细胞迁移与细胞膜上AAMP蛋白的量有相关性第129-130页
    4.4.4 RSG对细胞迁移和血管新生的抑制作用依赖于p53的上调第130-131页
  4.5 本章小结第131-133页
5 AAMP参与OX-LDL诱导的VSMC迁移第133-153页
  5.1 引言第133-134页
  5.2 实验材料与实验方法第134-138页
    5.2.1 主要实验仪器和实验材料第134-135页
    5.2.2 大鼠胸腹主动脉VSMCs的原代培养和鉴定第135-136页
    5.2.3 细胞转染第136页
    5.2.4 细胞的油红O染色第136-137页
    5.2.5 细胞迁移和细胞增殖第137页
    5.2.6 细胞凋亡检测第137-138页
    5.2.7 细胞膜蛋白和胞浆蛋白的分离第138页
    5.2.8 蛋白免疫印迹实验第138页
    5.2.9 统计分析第138页
  5.3 实验结果第138-148页
    5.3.1 大鼠VSMCs的原代培养和鉴定第138-140页
    5.3.2 低浓度的ox-LDL促进VSMCs的迁移和增殖,高浓度的ox-LDL诱导VSMCs凋亡第140-142页
    5.3.3 VSMCs的胞内脂质含量与细胞生理功能相关第142-143页
    5.3.4 低浓度的ox-LDL可以诱导AAMP的表达和增加细胞膜上的Rac I及Rho A含量第143-145页
    5.3.5 干扰AAMP的表达抑制ox-LDL诱导的Rho A向细胞膜的转移和细胞迁移第145-146页
    5.3.6 整合素 β3 与ox-LDL诱导的VSMCs迁移有关第146-148页
  5.4 讨论第148-151页
    5.4.1 不同浓度的ox-LDL对VSMCs的生理功能影响不一样第148-149页
    5.4.2 ox-LDL通过促进AAMP的表达和RhoA信号的激活促进VSMCs迁移第149-150页
    5.4.3 整合素 β3 与ox-LDL诱导的VSMCs迁移有关第150-151页
  5.5 本章小结第151-153页
6 结论与展望第153-159页
  6.1 主要结论第153-156页
  6.2 后续研究工作的建议第156-159页
致谢第159-161页
参考文献第161-185页
附录第185-186页
A .作者在攻读博士学位期间的科研论文第185-186页
  B. 作者在攻读博士学位期间参与的科研项目第186页

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