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BCCIP维持Lamin B1依赖的细胞核功能的研究

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BCCIP维持Lamin B1依赖的细胞核功能的研究
论文目录
 
前言第1-5页
中文摘要第5-7页
Abstract第7-13页
英文缩写词表第13-14页
第1章 绪论第14-26页
  1.1 真核细胞细胞核结构与功能第14-15页
  1.2 核纤层蛋白与疾病第15-19页
    1.2.1 核纤层的组成第15页
    1.2.2 核纤层蛋白第15-18页
    1.2.3 Lamin蛋白缺陷导致的遗传疾病第18-19页
  1.3 BCCIP研究进展第19-25页
    1.3.1 BCCIP基因及蛋白第19-20页
    1.3.2 BCCIP的细胞生物学功能第20-23页
    1.3.3 BCCIP与肿瘤的相关性第23-24页
    1.3.4 BCCIP对小鼠胚胎发育的影响第24页
    1.3.5 BCCIP对小鼠神经发育的影响第24-25页
  1.4 BCCIP维持Lamin B1依赖的细胞核功能第25-26页
第2章 实验材料与方法第26-48页
  2.1 实验材料第26-31页
    2.1.1 细胞系及培养条件第26页
    2.1.2 主要试剂及来源第26-28页
    2.1.3 质粒、菌株及融合蛋白第28页
    2.1.4 主要仪器第28-29页
    2.1.5 常用试剂的配制第29-31页
  2.2 实验方法第31-47页
    2.2.1 细胞培养和冻存第31页
    2.2.2 BCCIP条件性敲低质粒构建第31-33页
    2.2.3 感受态细菌的制备及细菌的转化第33-36页
    2.2.4 BCCIP条件性敲低细胞系构建第36页
    2.2.5 BCCIP蛋白shRNA抗性突变体制备第36-38页
    2.2.6 腺病毒的制备第38页
    2.2.7 腺病毒感染第38-39页
    2.2.8 逆转录病毒的制备第39页
    2.2.9 逆转录病毒感染第39-40页
    2.2.10 细胞集落形成实验第40页
    2.2.11 生长曲线的绘制第40页
    2.2.12 免疫印迹检测第40-42页
    2.2.13 细胞免疫荧光染色第42页
    2.2.14 LMNB1基因克隆及载体构建第42-43页
    2.2.15 免疫共沉淀反应第43-44页
    2.2.16 His标记重组蛋白诱导表达及纯化第44页
    2.2.17 体外重组蛋白免疫共沉淀反应第44页
    2.2.18 免疫共沉淀反应鉴定BCCIP与LB1相互作用结合区域第44-45页
    2.2.19 总RNA提取第45-46页
    2.2.20 逆转录合成cDNA及半定量RT-PCR检测Lamin B1 mRNA水平第46-47页
    2.2.21 蛋白稳定性研究第47页
  2.3 数据的获取及分析第47-48页
    2.3.1 数据的获取第47页
    2.3.2 凝胶成像及分析第47页
    2.3.3 细胞核形态分析第47页
    2.3.4 荧光信号强度分析第47页
    2.3.5 统计分析第47-48页
第3章 实验结果第48-74页
  3.1 BCCIP基因条件性敲低细胞系实验系统构建第48-51页
    3.1.1 pBS/U6-ploxPneo条件性基因敲低系统第48页
    3.1.2 BCCIP条件性敲低细胞系HT-CKD第48-49页
    3.1.3 BCCIP条件性敲低细胞系的鉴定第49-50页
    3.1.4 Cre介导的HT-CKD细胞中外源BCCIP条件性敲低第50-51页
  3.2 BCCIP条件性敲除MEF细胞第51-52页
  3.3 BCCIP的表达对细胞生长的影响第52-56页
    3.3.1 HT-CKD细胞生长曲线第52-53页
    3.3.2 MEF-CKO细胞生长曲线第53-54页
    3.3.3 BCCIP蛋白表达补偿实验第54-56页
  3.4 BCCIP表达对染色质及细胞核形态的影响第56-57页
    3.4.1 BCCIP基因对染色质结构的影响第56-57页
    3.4.2 BCCIP表达对细胞核形态的影响第57页
  3.5 BCCIP蛋白与Lamin B1蛋白在细胞核膜的共定位第57-58页
  3.6 BCCIP与Lamin B1的相互作用第58-63页
    3.6.1 Lamin B1与BCCIP免疫共沉淀第58-59页
    3.6.2 外源性BCCIP与Lamin B1免疫共沉淀第59-60页
    3.6.3 融合重组蛋白GST沉降分析第60-61页
    3.6.4 外源性BCCIP片段与Lamin B1的免疫共沉淀第61-62页
    3.6.5 外源性Lamin B1片段与BCCIP的免疫共沉淀第62-63页
  3.7 BCCIP对Lamin B1蛋白核膜定位及表达水平的影响第63-68页
    3.7.1 BCCIP表达缺陷降低Lamin B1在HT-CKD细胞核膜定位及蛋白表达第63-65页
    3.7.2 BCCIP表达缺失降低Lamin B1在MEF-CKO细胞核膜定位及蛋白表达第65-68页
  3.8 BCCIP的表达对Lamin B1依赖的细胞核功能的影响第68-71页
    3.8.1 BCCIP表达缺失导致核仁分布异常第68-70页
    3.8.2 BCCIP表达缺失导致RNA聚合酶Ⅱ转录活性降低第70-71页
  3.9 BCCIP蛋白对Lamin B1蛋白表达水平的调控第71-74页
    3.9.1 Lamin B1 mRNA检测第71-72页
    3.9.2 Lamin B1蛋白稳定性的研究第72-74页
第4章 讨论第74-86页
  4.1 RNA干涉第75-76页
  4.2 pBS/U6-loxPneo条件性基因敲低系统第76-77页
  4.3 BCCIP基因条件性敲低细胞系及BCCIP互补修复系统第77-78页
  4.4 BCCIP基因条件性敲除小鼠胚胎成纤维细胞第78-80页
  4.5 发现和鉴定BCCIP相互作用蛋白—Lamin B1第80-81页
  4.6 BCCIP的表达对染色质结构和细胞核形态的影响第81页
  4.7 BCCIP表达对核仁分布和细胞转录功能的影响第81-82页
  4.8 共聚焦显微镜技术在Lamin B1核膜定位研究中的应用第82-83页
  4.9 BCCIP对Lamin B1蛋白表达水平的调控第83-84页
  4.10 BCCIP基因缺陷与肿瘤的相关性第84-86页
第5章 结论第86-88页
第6章 实验创新点第88-90页
参考文献第90-102页
作者简介及在学期间科研成果第102-104页
致谢第104页

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