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人巨细胞病毒相互作用蛋白的系统筛选和功能研究

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人巨细胞病毒相互作用蛋白的系统筛选和功能研究
论文目录
 
中文摘要第1-8页
Abstract第8-13页
英文缩略词表第13-14页
第一章 引言第14-40页
  1.1 人巨细胞病毒(HCMV)第14-24页
    1.1.1 人巨细胞病毒概述第14-19页
    1.1.2 人巨细胞病毒DNA复制概述第19-21页
    1.1.3 病毒及宿主的相互作用网络图第21-24页
  1.2 人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)第24-28页
    1.2.1 人免疫缺陷病毒概述第24-26页
    1.2.2 HCMV-HIV共感染第26-28页
  1.3 小泛素样修饰蛋白(SUMO)第28-33页
    1.3.1 小泛素样修饰蛋白概述第28-29页
    1.3.2 疱疹病毒与SUMO的关系第29-33页
  1.4 酵母双杂交技术第33-38页
    1.4.1 酵母双杂交技术原理第33-35页
    1.4.2 酵母双杂交技术应用1:寻找相互作用蛋白(文库筛选)第35页
    1.4.3 酵母双杂交技术应用2:高通量验证蛋白-蛋白间相互作用(酵母交配)第35-36页
    1.4.5 酵母双杂交技术的新发展第36-38页
  1.5 验证蛋白质相互作用的常见方法第38-40页
    1.5.1 Pull-down技术第38页
    1.5.2 激光共聚焦第38页
    1.5.3 免疫共沉淀第38-39页
    1.5.4 其他(生物传感器、非变性胶、质谱等)第39-40页
第二章 实验材料与方法第40-60页
  2.1 通用实验仪器和设备第40页
  2.2 通用实验试剂第40-41页
  2.3 常规分子克隆实验第41-45页
    2.3.1 制备大肠杆菌化学方法感受态细胞第41-42页
    2.3.2 制备大肠杆菌电击转化感受态细胞第42-43页
    2.3.3 碱裂解法小量质粒提取第43-44页
    2.3.4 文库质粒的大规模提取第44-45页
    2.3.5 PCR和限制性酶切第45页
    2.3.6 定点突变PCR第45页
  2.4 酵母双杂交涉及的实验第45-51页
    2.4.1 酵母双杂交实验中涉及的试剂信息第45页
    2.4.2 文库滴定和扩增第45-46页
    2.4.3 酵母培养基第46-48页
    2.4.4 制备酵母感受态第48页
    2.4.5 酵母质粒提取第48-49页
    2.4.7 酵母双杂交文库筛选第49-50页
    2.4.8 酵母交配第50-51页
  2.5 细胞学实验第51-54页
    2.5.1 细胞培养基和冻存液第51-52页
    2.5.2 细胞传代培养第52-53页
    2.5.3 磷酸钙转染第53页
    2.5.4 脂质体转染第53-54页
  2.6 蛋白质学实验第54-59页
    2.6.1 原核表达和纯化第54-55页
    2.6.2 PAGE电泳和Western blot第55-58页
    2.6.3 His-Pull down第58页
    2.6.4 激光共聚焦第58页
    2.6.5 免疫共沉淀第58-59页
  2.7 生物信息学实验第59-60页
第三章 系统筛选人巨细胞病毒DNA复制蛋白的相互作用细胞蛋白第60-91页
  3.1 概述第60-62页
  3.2 实验过程与结果第62-81页
    3.2.1 酵母双杂交以及哺乳细胞表达质粒的构建第63-64页
    3.2.2 DNA-BD/bait的酵母转化及鉴定第64页
    3.2.3 BD/bait蛋白的自激活实验第64页
    3.2.4 文库的扩增与滴度测定第64页
    3.2.5 文库筛选和阳性克隆的x-gal显色试验第64-65页
    3.2.6 酵母质粒的提取和prey质粒的分离第65-67页
    3.2.7 假阳性克隆的排除(酵母回交实验)第67页
    3.2.8 序列分析和整理第67-74页
    3.2.9 免疫共沉淀验证第74-76页
    3.2.10 蛋白质相互作用网络图的拓扑学分析第76页
    3.2.11 siRNA干扰实验(实验路线设计)第76-81页
  3.3 分析与讨论第81-89页
  3.4 总结第89-91页
第四章 系统筛选人巨细胞病毒和人免疫缺陷病毒间蛋白相互作用第91-114页
  4.1 概述第91-94页
  4.2 实验过程与结果第94-110页
    4.2.1 病毒蛋白的构建第94-99页
    4.2.2 酵母交配流程说明第99-101页
    4.2.3 BD-HIV同AD-HCMV的测试第101-102页
    4.2.4 AD-HIV同BD-HCMV的测试第102-108页
    4.2.5 确保实验可靠的新策略第108-109页
    4.2.6 筛选结果和后继实验第109-110页
  4.3 分析与讨论第110-112页
  4.4 总结第112-114页
第五章 HCMV DNA聚合酶辅助因子ppUL44的sumoylation研究第114-131页
  5.1 概述第114-117页
  5.2 实验过程与结果第117-128页
    5.2.1 质粒的构建第117-119页
    5.2.2 酵母双杂交第119页
    5.2.3 激光共聚焦第119-120页
    5.2.4 His Pull down第120-121页
    5.2.5 免疫共沉淀第121-122页
    5.2.6 确定ppUL44同UBC9的结合域第122-123页
    5.2.7 证实ppUL44为sumoylation的底物第123-126页
    5.2.8 证实K410位为sumoylation的主要位点第126-128页
  5.3 分析与讨论第128-129页
  5.4 总结第129-131页
第六章 综述:人巨细胞病毒的免疫逃逸第131-138页
参考文献第138-149页
博士期间已发表和正在撰写的论文第149页

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