论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一部分 siRNA下调survivin基因表达的抗肿瘤作用及机制研究 | 第10-48页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 实验材料 | 第12-15页 |
| 1.1 细胞株与实验动物 | 第12页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第12-13页 |
| 1.3 材料与仪器 | 第13-15页 |
| 第二章 实验方法 | 第15-30页 |
| 2.1 主要试剂配制 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞水平的抗肿瘤活性及其机制研究（体外实验） | 第16-26页 |
| 2.2.1 小鼠乳腺癌肿瘤细胞培养 | 第16页 |
| 2.2.2 siRNA设计与合成 | 第16-17页 |
| 2.2.3 转染条件优化实验 | 第17-18页 |
| 2.2.4 siRNA转染 4T1细胞 | 第18-19页 |
| 2.2.5 总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.2.6 靶向survivin基因siRNA的筛选 | 第20-22页 |
| 2.2.7 靶向survivin基因siRNA浓度选择 | 第22-23页 |
| 2.2.8 靶向survivin基因siRNA时效选择 | 第23页 |
| 2.2.9 MTT法检测 4T1细胞增殖 | 第23-24页 |
| 2.2.10 Transwell法检测 4T1细胞迁移能力 | 第24页 |
| 2.2.11 Transwell法检测 4T1细胞侵袭能力 | 第24-25页 |
| 2.2.12 流式细胞术检测 4T1细胞凋亡率 | 第25-26页 |
| 2.3 抗肿瘤活性检测（体内实验） | 第26-30页 |
| 2.3.1 小鼠乳腺癌肿瘤模型建立 | 第26页 |
| 2.3.2 分组治疗 | 第26页 |
| 2.3.3 肿瘤组织HE染色检测 | 第26-27页 |
| 2.3.4 TUNEL法检测肿瘤组织内细胞凋亡 | 第27-28页 |
| 2.3.5 免疫组化法检测肿瘤组织内SURVIVIN、VEGF-C、VEGFR3蛋白表达 | 第28页 |
| 2.3.6 免疫组化法检测肿瘤组织内微淋巴管密度 | 第28-29页 |
| 2.3.7 小鼠乳腺癌肺转移灶 | 第29页 |
| 2.3.8 统计学处理 | 第29-30页 |
| 第三章 实验结果 | 第30-42页 |
| 3.1 体外实验 | 第30-38页 |
| 3.1.1 siRNA最佳转染效率 | 第30页 |
| 3.1.2 survivin-siRNA的筛选 | 第30-32页 |
| 3.1.3 survivin-siRNA浓度选择 | 第32-33页 |
| 3.1.4 survivin-siRNA时效选择 | 第33-34页 |
| 3.1.5 VEGF-C和SURVIVIN表达相关性 | 第34-35页 |
| 3.1.6 MTT比色法survivin-siRNA对 4T1细胞增殖作用 | 第35-36页 |
| 3.1.7 survivin-siRNA抑制 4T1细胞的体外迁移和侵袭能力 | 第36-37页 |
| 3.1.8 survivin-siRNA对VEGF-C和Akt/ HIF1α信号通路的作用 | 第37-38页 |
| 3.2 体内实验 | 第38-42页 |
| 3.2.1 下调survivin对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.2 移植瘤大体病理及HE染色常规病理检查 | 第39-40页 |
| 3.2.3 survivin对微淋巴管和肺转移的抑制作用 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 第二部分 M2型巨噬细胞可促进乳腺癌 4T1细胞转移，siRNA联合下调survivin和VEGF-C对小鼠乳腺癌的治疗作用 | 第48-70页 |
| 引言 | 第48-50页 |
| 第一章 实验材料 | 第50-52页 |
| 1.1 细胞株与实验动物 | 第50页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 材料与仪器 | 第51-52页 |
| 第二章 实验方法 | 第52-58页 |
| 2.1 骨髓来源巨噬细胞的原代培养 | 第52页 |
| 2.2 流式细胞术鉴定巨噬细胞表型 | 第52页 |
| 2.3 M1型和M2型巨噬细胞的诱导 | 第52-53页 |
| 2.4 总RNA提取 | 第53页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR检测不同表型巨噬细胞mRNA表达差异 | 第53-54页 |
| 2.6 巨噬细胞和 4T1细胞共培养生长曲线 | 第54页 |
| 2.7 不同极化表型巨噬细胞对 4T1细胞侵袭的作用 | 第54-55页 |
| 2.8 检测共培养体系所分泌的VEGF-C | 第55页 |
| 2.9 检测共培养体系上清中NO含量 | 第55页 |
| 2.10 细胞水平的抗肿瘤活性及其机制研究（体外实验） | 第55-57页 |
| 2.10.1 siRNA设计与合成 | 第55-56页 |
| 2.10.2 小鼠乳腺癌肿瘤模型建立 | 第56页 |
| 2.10.3 分组治疗 | 第56页 |
| 2.10.4 小鼠TAM分离 | 第56-57页 |
| 2.10.5 小鼠脾脏巨噬细胞分离 | 第57页 |
| 2.10.6 流式细胞术检测巨噬细胞分型 | 第57页 |
| 2.11 统计学处理 | 第57-58页 |
| 第三章 实验结果 | 第58-64页 |
| 3.1 小鼠骨髓来源的巨噬细胞形态观察 | 第58页 |
| 3.2 流式细胞术纯度鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3 经诱导后骨髓来源的巨噬细胞向不同类型巨噬细胞的分化情况 | 第59页 |
| 3.4 不同极化的巨噬细胞相关炎性因子的表达 | 第59-60页 |
| 3.5 M2巨噬细胞促进 4T1细胞的增殖 | 第60-61页 |
| 3.6 M2型巨噬细胞共培养 4T1细胞促进侵袭能力 | 第61-62页 |
| 3.7 M2型巨噬细胞促进 4T1细胞分泌VEGF-C | 第62页 |
| 3.8 硝酸还原法测定共培养上清NO含量 | 第62页 |
| 3.9 双干扰对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 | 第62-63页 |
| 3.10 肿瘤相关巨噬细胞CD11c和CD206的表达 | 第63-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 综述 | 第70-92页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
