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男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究及miR-96促进乳腺癌发生机制的研究

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男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究及miR-96促进乳腺癌发生机制的研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-12页
第一章 研究背景综述第12-39页
第一节 小分子非编码RNA的研究进展第13-31页
一、piRNA的研究进展第13-22页
  1. piRNA的发现第13-14页
  2. piRNA的分类第14页
  3. piRNA的结构特点第14-16页
  4. piRNA的生物合成第16-20页
  5. piRNA的生物功能第20-21页
  5.1 保护基因组的稳定性第20-21页
  5.2 piRNA调控mRNA的表达第21页
  6. piRNA与男性不孕不育第21-22页
二、microRNA的研究进展第22-28页
  1. microRNA的发现第22页
  2. microRNA结构特点第22页
  3. microRNA生物合成第22-24页
  4. microRNA作用机制第24-26页
  4.1 miRNA介导mRNA特异性切割第25页
  4.2 miRNA抑制mRNA转录后翻译第25-26页
  5. microRNA与癌症第26-27页
  6. microRNA与乳腺癌第27-28页
三、研究小分子非编码RNA的意义及前景展望第28-31页
  1. 小分子非编码RNA的生物学意义第28-29页
  2. 小分子非编码RNA的前景与展望第29-31页
参考文献第31-39页
第二章 实验研究部分第39-147页
第一节 男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究第40-99页
第一部分 piRNA在男性不育精浆中的差异表达第40-79页
一、引言第40-42页
二、实验材料和方法第42-54页
  1. 研究对象和样品收集第42-44页
  1.1 样本收集第42页
  1.2 样本处理第42-44页
  2. 主要仪器设备和试剂第44-45页
  2.1 实验仪器设备第44页
  2.2 实验所用试剂第44-45页
  3. 实验方法第45-47页
  3.1 RNA提取第45-46页
  3.2 反应体系的配制第46-47页
  4. Solexa测序第47-49页
  5. qRT-PCR检测piRNA的表达第49-51页
  5.1 piRNA表达量的检测第49-50页
  5.2 精浆中piRNA的稳定性检测第50页
  5.3 精浆中piRNA可检测性第50-51页
  5.4 piRNA引物探针扩增的特异性第51页
  6. Northern blotting方法检测精浆中piRNA第51-53页
  7. 数据分析第53-54页
三、实验结果第54-74页
  1. 三组混合精浆测序结果第54-62页
  1.1 三组混合精浆中小分子RNA第54-58页
  1.2 精浆中小RNA的长度分布第58-59页
  1.3 三组精浆中piRNA的分布第59-60页
  1.4 不育患者精浆piRNA表达谱与正常对照的差异第60-62页
  2. 验证qRT-PCR方法的可靠性与可行性第62-64页
  2.1 扩增检测piRNA的探针及引物的水背景第62-63页
  2.2 精浆中piRNA可检测性第63页
  2.3 qRT-PCR扩增的特异性第63-64页
  2.4 精浆中piRNA的稳定性第64页
  3. Northern blotting法检测精浆中piRNA第64-65页
  4. qRT-PCR法检测精浆中piRNA含量第65-71页
  4.1 piRNA标准曲线第65-66页
  4.2 qRT-PCR对Solexa初筛的piRNA进行复筛第66-67页
  4.3 qRT-PCR对复筛的结果的验证第67-69页
  4.4 5种piRNA在不育患者与正常对照精浆中的表达量第69-71页
  5. 不育男性患者特异降低的精浆piRNA的ROC曲线分析第71-72页
  6. Risk score分析第72-74页
四、结论第74-75页
五、讨论第75-77页
参考文献第77-79页
第二部分 piRNA在男性不育精子中的差异表达及机制的初步研究第79-99页
一、引言第79-81页
二、实验材料和方法第81-88页
  1. 样本收集及处理第81-82页
  1.1 样本收集第81页
  1.2 样本处理第81-82页
  2. 主要仪器设备和试剂第82-83页
  2.1 实验仪器设备第82页
  2.2 实验所用试剂第82-83页
  3. 实验方法第83-87页
  3.1 精子的分离及RNA的提取第83页
  3.2 精子中蛋白的提取第83-84页
  3.3 Western blot检测精子中的蛋白表达第84-86页
  3.4 精浆中外泌体的提取第86页
  3.5 精浆外泌体鉴定第86-87页
  3.6 外泌体中RNA的提取、逆转和qRT-PCR第87页
  4. 数据分析第87-88页
三、实验结果第88-94页
  1. 精子中Solexa结果第88-90页
  1.1 精子中piRNA种类及含量第88页
  1.2 精子中piRNA表达谱第88-89页
  1.3 精浆中表达差异显著的piRNA在精子中的变化第89-90页
  1.4 qRT-PCR对Solexa初筛的4个piRNA进行验证第90页
  2. MitoPLD蛋白在弱精症精子中表达量下降第90-91页
  3. 精浆中外泌体的分布第91-92页
  4. 精浆中piRNA的存在形式第92-93页
  5. 精浆Exosome中piRNA的差异表达第93-94页
四、结论第94-95页
五、讨论第95-97页
参考文献第97-99页
第二节 miR-96在乳腺癌中通过靶向PTPN9蛋白促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭第99-147页
一、引言第99-103页
二、实验材料与方法第103-125页
  1. 实验样本与材料第103-106页
  2. 实验方法第106-125页
  2.1 细胞培养第106页
  2.2 miRNA的过表达和干扰第106页
  2.3 构建含PTPN9 3'-UTR的荧光素酶报告质粒第106-111页
  2.4 除内毒素质粒的抽提(用于转染细胞)第111-112页
  2.5 荧光素酶实验第112-113页
  2.6 miRNA及mRNA的qRT-PCR定量检测第113-117页
  2.7 PTPN9蛋白的过表达和下调表达第117页
  2.8 Western blot检测蛋白表达水平第117-120页
  2.9 EdU实验-荧光显微镜检测方法第120-122页
  2.10 细胞周期实验第122-123页
  2.11 细胞迁移实验第123页
  2.12 细胞侵袭实验第123-124页
  2.13 数值的统计分析第124-125页
三、实验结果第125-141页
  1. miR-96在人乳腺癌样本中表达成上升趋势第125页
  2. 动物实验显示miR-96促进肿瘤生成第125-127页
  3. 体外细胞实验显示miR-96促进细胞增殖与侵袭第127-132页
  3.1 miR-96促进细胞的增殖第127-129页
  3.2 miR-96促进细胞迁移第129页
  3.3 miR-96促进细胞的侵袭第129-130页
  3.4 miR-96促进细胞周期进程第130-132页
  4. PTPN9是miR-96潜在的靶点第132-134页
  5. PTPN9蛋白在乳腺癌中表达量下降第134-135页
  6. 细胞实验验证miR-96靶向PTPN9第135-137页
  7. PTPN9蛋白在乳腺癌细胞系中的生物学功能第137-140页
  8. 验证miR-96和PTPN9对乳腺癌细胞的生物学功能成负调控模式第140-141页
四、结论第141页
五、讨论第141-144页
参考文献第144-147页
攻读博士学位期间发表论文第147-148页
致谢第148-150页

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