论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-31页 |
| 1 烟曲霉与曲霉病 | 第15-16页 |
| 1.1 烟曲霉与曲霉病 | 第15页 |
| 1.2 曲霉病的流行病学 | 第15-16页 |
| 2 烟曲霉致病机制研究进展 | 第16-20页 |
| 2.1 烟曲霉致病因子 | 第16-17页 |
| 2.2 信号、代谢调节与抵抗外界压力环境 | 第17-19页 |
| 2.3 抗氧化应激压力 | 第19-20页 |
| 3 应激颗粒 | 第20-24页 |
| 3.1 什么是SGs？ | 第20-21页 |
| 3.2 SGs的组装 | 第21-23页 |
| 3.3 SGs的功能 | 第23-24页 |
| 4 根癌农杆菌介导技术的应用 | 第24-28页 |
| 4.1 ATMT概述 | 第25页 |
| 4.2 T-DNA的形成、转移与插入宿主细胞 | 第25-26页 |
| 4.3 影响ATMT转化因素 | 第26-27页 |
| 4.4 ATMT转化的优势 | 第27-28页 |
| 5 ATMT在真菌研究中的应用 | 第28-29页 |
| 5.1 定向突变 | 第28页 |
| 5.2 随机插入突变 | 第28-29页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 构建烟曲霉△afpab1敲除株及回复株 | 第31-51页 |
| 1 材料 | 第31-35页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 1.2 培养基 | 第32页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 1.4 引物 | 第33-34页 |
| 1.5 试剂盒与酶 | 第34页 |
| 1.6 仪器设备 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.2 引物设计 | 第35-36页 |
| 2.3 烟曲霉DNA的提取 | 第36页 |
| 2.4 烟曲霉基因afpab1上、下游片段扩增 | 第36-37页 |
| 2.5 PCR产物凝胶电泳分析 | 第37页 |
| 2.6 质粒的扩增与提取（试剂盒法） | 第37页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶回收（试剂盒法） | 第37-38页 |
| 2.8 大肠杆菌DH5α 感受态制备 | 第38-39页 |
| 2.9 将afpab1基因上、下游PCR片段切胶回收产物，与p MD18t质粒克隆连接 | 第39页 |
| 2.10 连接产物的转化 | 第39页 |
| 2.11 克隆质粒验证 | 第39-40页 |
| 2.12 afpab1基因上下游大分子片段和p XEH质粒的连接 | 第40页 |
| 2.13 重组质粒转化 | 第40页 |
| 2.14 敲除质粒p XEH-△afpab1的验证 | 第40页 |
| 2.15 根癌农杆菌感受态的制备 | 第40页 |
| 2.16 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第40页 |
| 2.17 根癌农杆菌介导烟曲霉转化 | 第40-41页 |
| 2.18 验证△afpab1敲除株 | 第41-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-48页 |
| 3.1 烟曲霉afpab1生物信息学分析 | 第43页 |
| 3.2 afpab1的基因结构 | 第43-45页 |
| 3.3 烟曲霉afpab1基因敲除及互补质粒 | 第45页 |
| 3.4 烟曲霉afpab1基因敲除株和回复株的构建 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 afpab1基因缺失对烟曲霉生物性状及致病力的影响 | 第51-73页 |
| 1 材料 | 第51-54页 |
| 1.1 菌株 | 第51页 |
| 1.2 实验动物 | 第51页 |
| 1.3 培养基 | 第51-52页 |
| 1.4 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.5 实验仪器和设备 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-59页 |
| 2.1 形态观察 | 第54页 |
| 2.2 生长曲线的绘制 | 第54页 |
| 2.3 平板法检测各压力环境 | 第54-55页 |
| 2.4 扫描电镜观察孢子形态 | 第55页 |
| 2.5 原生质体制备 | 第55-56页 |
| 2.6 DCFH-DA（2,7-dichlorofluorescin diacetate）染色 | 第56页 |
| 2.7 RNA提取 | 第56页 |
| 2.8 RNA逆转录 | 第56页 |
| 2.9 引物的设计与合成 | 第56-57页 |
| 2.10 Real-time PCR | 第57页 |
| 2.11 致病力分析 | 第57-58页 |
| 2.12 统计学方法 | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-70页 |
| 3.1 菌落形态和生长速率 | 第59-60页 |
| 3.2 不同压力条件下敏感性检测 | 第60-61页 |
| 3.3 扫描电镜观察 | 第61-62页 |
| 3.4 ROS荧光观察 | 第62-63页 |
| 3.5 Real-time PCR分析 | 第63-64页 |
| 3.6 小鼠致病力检测 | 第64-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 烟曲霉突变体库的建立 | 第73-85页 |
| 1 材料 | 第73-76页 |
| 1.1 菌株 | 第73页 |
| 1.2 培养基 | 第73-74页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第74-75页 |
| 1.4 引物 | 第75页 |
| 1.5 仪器设备 | 第75-76页 |
| 2 方法 | 第76-78页 |
| 2.1 遗传转化体系条件优化 | 第76-77页 |
| 2.2 烟曲霉T-DNA插入突变体验证 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-82页 |
| 3.1 转化条件的优化 | 第78-80页 |
| 3.2 烟曲霉T-DNA突变体验证 | 第80-82页 |
| 4 讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
