论文目录 | |
摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
一、绪论 | 第12-19页 |
二、材料与方法 | 第19-54页 |
2.1 材料 | 第19-28页 |
2.1.1 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
2.1.2 主要试剂、耗材 | 第20-24页 |
2.1.3 实验室自配试剂 | 第24-28页 |
2.2 方法 | 第28-54页 |
2.2.1 质粒构建 | 第28页 |
2.2.2 质粒转化 | 第28页 |
2.2.3 质粒DNA小量提取 | 第28-30页 |
2.2.4 质粒DNA大量抽提 | 第30-31页 |
2.2.5 琼脂糖凝胶DNA片段回收 | 第31-33页 |
2.2.6 细胞复苏、传代、冻存 | 第33页 |
2.2.7 细胞转染 | 第33-34页 |
2.2.8 过表达细胞系构建 | 第34-35页 |
2.2.9 外源细胞因子刺激实验 | 第35页 |
2.2.10 划痕愈合实验 | 第35-36页 |
2.2.11 Transwell chamber小室检测细胞侵袭实验-Invasion | 第36-37页 |
2.2.12 流式细胞术检测细胞周期 | 第37页 |
2.2.13 CXCR6基因的稳定敲除-shRNA | 第37-38页 |
2.2.14 蛋白免疫印迹 | 第38-40页 |
2.2.15 基因表达谱芯片 | 第40-41页 |
2.2.16 Trizol法提取细胞总RNA | 第41-42页 |
2.2.17 逆转录及Real-time PCR | 第42-44页 |
2.2.18 免疫荧光染色、鬼笔环肽染色 | 第44-46页 |
2.2.19 GST-pull down实验检测RhoA活性 | 第46-48页 |
2.2.20 点突变试剂盒构建RhoA~(N19)和RhoA~(V14)质粒 | 第48-50页 |
2.2.21 小鼠尾静脉注射-活体成像 | 第50页 |
2.2.22 苏木素-伊红染色 | 第50-51页 |
2.2.23 免疫组化染色 | 第51-53页 |
2.2.24 统计学分析 | 第53-54页 |
三、结果 | 第54-80页 |
3.1 CXCR6在乳腺癌组织和细胞系中的表达 | 第54-57页 |
3.2 CXCR6过表达细胞系的构建 | 第57页 |
3.3 CXCR6促进乳腺癌细胞的侵袭转移 | 第57-60页 |
3.4 CXCL16/CXCR6趋化因子轴不影响乳腺癌细胞的EMT进程 | 第60-61页 |
3.5 CXCL16/CXCR6趋化因子轴促进乳腺癌细胞ERK1/2 通路的活化 | 第61-63页 |
3.6 CXCL16/CXCR6趋化因子轴促进乳腺癌细胞迁移依赖于ERK1/2 通路的活化 | 第63-65页 |
3.7 基因芯片分析CXCR6过表达对乳腺癌细胞全基因转录组的调控 | 第65-68页 |
3.8 CXCR6过表达细胞系F-actin聚合增多 | 第68-70页 |
3.9 CXCL16/CXCR6趋化因子轴调控F-actin的聚合依赖于ERK1/2 通路的激活 | 第70-71页 |
3.10 CXCL16/CXCR6趋化因子促进Cofilin,FAK的磷酸化 | 第71-72页 |
3.11 CXCL16/CXCR6趋化因子轴通过激活ERK1/2 促进RhoA/Cofilin通路的活化 | 第72-74页 |
3.12 RhoA的活性状态影响F-actin的形成 | 第74-75页 |
3.13 RhoA的活性状态影响乳腺癌细胞的迁移和侵袭 | 第75-76页 |
3.14 体内实验表明敲低CXCR6的表达能够抑制乳腺癌细胞的肺转移 | 第76-80页 |
四、讨论 | 第80-86页 |
五、总结 | 第86-87页 |
六、参考文献 | 第87-99页 |
七、全文缩略词中英文对照表 | 第99-101页 |
八、致谢 | 第101-103页 |
九、攻读博士学位期间发表的文章 | 第103页 |