论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 缩略语中英文对照表 | 第12-14页 |
| 绪论 | 第14-28页 |
| SUMO修饰 | 第15-18页 |
| 去SUMO化修饰和SUMO蛋白酶家族SENPs | 第18-20页 |
| 泛素蛋白酶体降解途径 | 第20-21页 |
| SUMO化修饰和泛素化途径的关系 | 第21-24页 |
| Sp1蛋白 | 第24页 |
| FOXC2与EMT | 第24-26页 |
| SENP3与EMT | 第26页 |
| AP-2α | 第26-28页 |
| 第一部分SENP3抑制靶向SUMO3的泛素蛋白酶体降解途径调节总蛋白及Sp1的稳定性 | 第28-73页 |
| 1.1 引言 | 第28-30页 |
| 1.2 材料与方法 | 第30-48页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 1.2.1.1 菌株 | 第30页 |
| 1.2.1.2 质粒 | 第30页 |
| 1.2.1.3 细胞及其培养 | 第30-31页 |
| 1.2.1.4 主要试剂 | 第31-32页 |
| 1.2.1.5 主要仪器 | 第32页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第32-48页 |
| 1.2.2.1 质粒构建 | 第33-38页 |
| 1.2.2.2 质粒抽提 | 第38-39页 |
| 1.2.2.3 细胞培养 | 第39-40页 |
| 1.2.2.4 细胞瞬时转染 | 第40-41页 |
| 1.2.2.5 细胞总RNA抽提 | 第41页 |
| 1.2.2.6 反转录反应 | 第41-42页 |
| 1.2.2.7 Real-time PCR | 第42-43页 |
| 1.2.2.8 蛋白免疫印迹 | 第43-44页 |
| 1.2.2.9 免疫共沉淀 | 第44页 |
| 1.2.2.10 FLAG BEADS免疫共沉淀 | 第44-45页 |
| 1.2.2.11 人胃癌裸鼠移植模型 | 第45页 |
| 1.2.2.12 质谱分析 | 第45-47页 |
| 1.2.2.13 统计学学分析 | 第47-48页 |
| 1.3 结果 | 第48-68页 |
| 1.3.1 SENP3调节总蛋白的泛素化修饰模式 | 第48-54页 |
| 1.3.2 SUMO3和SENP3调节Sp1的稳定性 | 第54-60页 |
| 1.3.2.1 SENP3通过翻译后修饰促进Sp1稳定 | 第54-55页 |
| 1.3.2.2 SUMO3通过泛素蛋白酶体降解途径促进Sp1降解 | 第55-56页 |
| 1.3.2.3 Sp1可以被SUMO3修饰 | 第56-58页 |
| 1.3.2.4 SENP3可以与Sp1相互作用 | 第58-59页 |
| 1.3.2.5 SENP3可以对Sp1进行去SUMO化修饰 | 第59-60页 |
| 1.3.3 SENP3拮抗RNF4与Sp1的相互作用抑制其介导的泛素蛋白酶体降解途径对Sp1的降解 | 第60-63页 |
| 1.3.3.1 SUMO3和SENP3调节Sp1的泛素蛋白酶体途径 | 第60-61页 |
| 1.3.3.2 RNF4促进Sp1经泛素蛋白酶体途径降解 | 第61-63页 |
| 1.3.3.3 SENP3抑制RNF4与Sp1的相互作用 | 第63页 |
| 1.3.4 胃癌细胞株和胃癌标本中存在SENP3对Sp1蛋白含量的调控 | 第63-68页 |
| 1.3.4.1 胃癌细胞株中，活性氧、SENP3和Sp1含量呈正相关趋势 | 第63-66页 |
| 1.3.4.2 胃癌标本中SENP3和Sp1呈显著正相关 | 第66-67页 |
| 1.3.4.3 裸鼠成瘤模型中SENP3抑制Sp1泛素蛋白酶体途径促进其稳定 | 第67-68页 |
| 1.4 小结 | 第68-69页 |
| 1.5 讨论 | 第69-73页 |
| 第二部分SENP3通过调节Fox C2表达参与EMT过程 | 第73-93页 |
| 2.1 引言 | 第73-75页 |
| 2.2 材料与方法 | 第75-84页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第75-77页 |
| 2.2.1.1 菌株 | 第75页 |
| 2.2.1.2 质粒 | 第75页 |
| 2.2.1.3 细胞及其培养 | 第75页 |
| 2.2.1.4 主要试剂 | 第75-76页 |
| 2.2.1.5 主要仪器 | 第76-77页 |
| 2.2.2 试验方法 | 第77-84页 |
| 2.2.2.1 质粒构建 | 第77-82页 |
| 2.2.2.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第82-83页 |
| 2.2.2.3 质粒抽提 | 第83页 |
| 2.2.2.4 细胞瞬时转染 | 第83页 |
| 2.2.2.5 蛋白质免疫印迹 | 第83页 |
| 2.2.2.6 FLAG BEADS免疫共沉淀 | 第83-84页 |
| 2.3 结果 | 第84-91页 |
| 2.3.1 SENP3对EMT标志分子m RNA水平的调节 | 第84-85页 |
| 2.3.2 Sp1调控FOXC2的表达 | 第85-89页 |
| 2.3.3 AP2α 水平改变不影响FOXC2表达，但AP2α 可以被SUMO3修饰 | 第89-91页 |
| 2.4 小结 | 第91页 |
| 2.5 讨论 | 第91-92页 |
| 2.6 展望 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 致谢 | 第103-106页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第106-107页 |
| 攻读博士期间参加的会议 | 第107页 |
