论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 常用英文缩写 | 第16-24页 |
| 第一部分 DADS上调miR-7 抑制人胃癌细胞增殖和侵袭 | 第24-65页 |
| 第1章 绪论 | 第24-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第30页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第30页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-44页 |
| 2.2.1 细胞培养及药物处理 | 第31页 |
| 2.2.2 has-miR71 过表达慢病毒载体构建及病毒包装 | 第31-34页 |
| 2.2.3 has-miR71 干扰慢病毒载体构建及病毒包装 | 第34-37页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第37页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第37-40页 |
| 2.2.6 细胞增殖能力检测 | 第40页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡和周期 | 第40-41页 |
| 2.2.8 划痕实验 | 第41-42页 |
| 2.2.9 迁移实验 | 第42页 |
| 2.2.10 侵袭实验 | 第42-43页 |
| 2.2.11 裸鼠移植 | 第43页 |
| 2.2.12 统计学分析 | 第43-44页 |
| 第3章 结果 | 第44-61页 |
| 3.1 慢病毒载体构建及病毒包装 | 第44-47页 |
| 3.1.1 has-miR-7 慢病毒载体构建及病毒包装 | 第44-45页 |
| 3.1.2 has-miR7antago沉默慢病毒载体构建及病毒包装 | 第45-47页 |
| 3.2 miR-7 高表达及miR-7 沉默稳定细胞系的构建 | 第47-48页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR检测DADS处理和转染细胞miR-7 的表达水平 | 第48-50页 |
| 3.4 DADS与miR-7 对人胃癌细胞增殖能力的影响 | 第50-53页 |
| 3.5 DADS和miR-7 对人胃癌SGC-7901 细胞周期的影响 | 第53-54页 |
| 3.6 DADS和miR-7 高表达促进人胃癌SGC-7901 细胞凋亡 | 第54-55页 |
| 3.7 DADS和miR-7 对人胃癌细胞迁移的影响 | 第55-58页 |
| 3.8 DADS和miR-7 对人胃癌细胞侵袭能力的影响 | 第58-59页 |
| 3.9 DADS和miR-7 对人胃癌细胞裸鼠成瘤的影响 | 第59-61页 |
| 第4章 讨论 | 第61-63页 |
| 第5章 小结 | 第63-65页 |
| 第二部分 DADS下调XIAP抑制人胃癌细胞增殖和侵袭 | 第65-112页 |
| 第1章 绪论 | 第65-69页 |
| 第2章 材料与方法 | 第69-87页 |
| 2.1 实验材料 | 第69-73页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第69-71页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第71-72页 |
| 2.1.3 组织芯片 | 第72页 |
| 2.1.4 细胞系 | 第72页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第72页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第72-73页 |
| 2.2 实验方法 | 第73-87页 |
| 2.2.1 免疫组织化学 | 第73-74页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第74页 |
| 2.2.3 XIAP过表达病毒载体构建 | 第74-75页 |
| 2.2.4 XIAP干扰质粒 | 第75-77页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第77-78页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第78-81页 |
| 2.2.7 Western blot检测 | 第81-82页 |
| 2.2.8 细胞免疫荧光 | 第82-83页 |
| 2.2.9 细胞增殖能力的检测 | 第83页 |
| 2.2.10 流式细胞仪检测细胞凋亡和周期 | 第83-84页 |
| 2.2.11 划痕实验 | 第84-85页 |
| 2.2.12 迁移实验 | 第85页 |
| 2.2.13 侵袭实验 | 第85-86页 |
| 2.2.14 裸鼠移植 | 第86页 |
| 2.2.15 统计学分析 | 第86-87页 |
| 第3章 结果 | 第87-108页 |
| 3.1 XIAP在胃癌组织中的表达 | 第87-88页 |
| 3.2 XIAP高表达慢病毒载体构建 | 第88-89页 |
| 3.3 XIAP干扰质粒构建 | 第89页 |
| 3.4 XIAP高表达稳定细胞系的构建 | 第89-90页 |
| 3.5 XIAP沉默稳定细胞系的构建 | 第90-92页 |
| 3.5.1 最佳干扰效率质粒的筛选 | 第90-91页 |
| 3.5.2 XIAP沉默稳定细胞系构建 | 第91-92页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR检测DADS处理和转染细胞XIAP m RNA的表达水平 | 第92-94页 |
| 3.7 Western blot检测DADS处理和转染细胞XIAP蛋白水平 | 第94-95页 |
| 3.8 细胞免疫荧光检测DADS处理与转染细胞XIAP的表达 | 第95-97页 |
| 3.9 DADS与XIAP对人胃癌细胞增殖能力的影响 | 第97-100页 |
| 3.10 DADS与XIAP对人胃癌SGC-7901 细胞周期的影响 | 第100-101页 |
| 3.11 DADS与XIAP沉默促进人胃癌SGC-7901 细胞凋亡 | 第101-102页 |
| 3.12 DADS与XIAP对人胃癌细胞迁移的影响 | 第102-105页 |
| 3.13 DADS与XIAP对人胃癌细胞侵袭能力的影响 | 第105-106页 |
| 3.14 DADS与XIAP对人胃癌细胞裸鼠成瘤的影响 | 第106-108页 |
| 第4章 讨论 | 第108-110页 |
| 第5章 小结 | 第110-112页 |
| 第三部分 miR-7 靶向负性调控XIAP的表达 | 第112-142页 |
| 第1章 绪论 | 第112-114页 |
| 第2章 材料与方法 | 第114-128页 |
| 2.1 实验材料 | 第114-117页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第114-115页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第115-116页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第116页 |
| 2.1.4 预测软件 | 第116页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第116-117页 |
| 2.2 实验方法 | 第117-128页 |
| 2.2.1 生物信息学方法 | 第117-118页 |
| 2.2.2 XIAP 3’UTR双荧光素酶报告重组载体的构建与鉴定 | 第118-120页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第120-121页 |
| 2.2.4 荧光素酶活性测定 | 第121页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第121-124页 |
| 2.2.6 Western blot检测 | 第124-126页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第126-128页 |
| 第3章 结果 | 第128-138页 |
| 3.1 生物信息学预测结果 | 第128-132页 |
| 3.1.1 has-miR-7 成熟序列和人XIAP 3’UTR基因序列 | 第128-130页 |
| 3.1.2 has-miR-7 靶基因预测 | 第130-132页 |
| 3.2 XIAP 3’UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建 | 第132-134页 |
| 3.2.1 XIAP 3’UTR野生型双荧光素酶报告基因载体 | 第132-133页 |
| 3.2.2 XIAP 3’UTR突变型双荧光素酶报告基因载体 | 第133-134页 |
| 3.3 miR-7 对荧光素酶报告基因水平的影响 | 第134页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR检测转染细胞XIAP m RNA水平变化 | 第134-136页 |
| 3.5 Western blot检测转染细胞XIAP蛋白水平变化 | 第136-138页 |
| 第4章 讨论 | 第138-140页 |
| 第5章 小结 | 第140-142页 |
| 结论 | 第142-144页 |
| 参考文献 | 第144-154页 |
| 综述 | 第154-170页 |
| 参考文献 | 第162-170页 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 | 第170-171页 |
| 基金资助 | 第171-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
