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母系遗传2型糖尿病相关的线粒体tRNA突变及其功能研究

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母系遗传2型糖尿病相关的线粒体tRNA突变及其功能研究
论文目录
 
致谢第1-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-15页
第一章 绪论第15-34页
  1.1 糖尿病第15-20页
    1.1.1 概述第15页
    1.1.2 糖尿病的诊断第15-17页
    1.1.3 糖尿病的分类第17-20页
  1.2 2型糖尿病的致病因素第20-27页
    1.2.1 与2型糖尿病相关的环境因素和生活方式第21-22页
    1.2.2 与2型糖尿病相关的核易感基因第22-26页
    1.2.3 与2型糖尿病相关的DNA甲基化第26-27页
  1.3 线粒体与2型糖尿病第27-34页
    1.3.1 线粒体第27-28页
    1.3.2 与2型糖尿病相关的mtDNA突变第28-30页
    1.3.3 线粒体tRNA是线粒体糖尿病等疾病的突变热点区域第30-32页
    1.3.4 线粒体ROS与2型糖尿病第32-34页
第二章 实验材料与实验方法第34-66页
  2.1 实验材料第34-37页
    2.1.1 样本第34页
    2.1.2 实验仪器第34-35页
    2.1.3 试剂盒第35页
    2.1.4 试剂第35-36页
    2.1.5 试剂的配制方法第36-37页
  2.2 实验方法第37-66页
    2.2.1 采集外周血样本第37页
    2.2.2 永生化淋巴细胞系的建立第37-39页
    2.2.3 线粒体DNA的突变分析第39-45页
    2.2.4 线粒体tRNA稳态及氨酰化水平的检测第45-48页
    2.2.5 线粒体蛋白质表达水平的检测第48-54页
    2.2.6 氧耗实验第54-55页
    2.2.7 细胞ATP产量的测定第55页
    2.2.8 线粒体活性氧产量的测定第55-56页
    2.2.9 线粒体膜电位的检测第56-57页
    2.2.10 线粒体呼吸链复合体酶活性的测定第57-62页
    2.2.11 野生型tRNA~(Glu)及A14692G突变体的体外转录第62-63页
    2.2.12 hmtRNA~(Glu)野生型及突变体熔点(Tm值)的测定第63-64页
    2.2.13 利用CMCT/反转录反应检测tRNA 55位假尿嘧啶修饰第64-65页
    2.2.14 血管生成素对tRNA的切割实验第65-66页
第三章 实验结果第66-98页
  3.1 携带T10003C突变的家系研究第66-81页
    3.1.1 母系遗传糖尿病家系的临床表现第66-69页
    3.1.2 母系遗传糖尿病的发生与线粒体tRNA~(Gly) 10003T>C突变相关第69-75页
    3.1.3 线粒体tRNA~(Glu) T10003C突变为同质性突变第75-76页
    3.1.4 T10003C突变影响tRNA~(Glu)的二级结构并且降低tRNA~(Glu)的稳态水平第76-78页
    3.1.5 T10003C突变降低线粒体蛋白质表达水平第78-79页
    3.1.6 携带线粒体tRNA~(Glu) 10003T>C突变的永生化淋巴细胞系氧气消耗速率降低第79-81页
  3.2 携带A14692G突变的家系研究第81-98页
    3.2.1 母系遗传糖尿病家系的临床表现第81-83页
    3.2.2 母系遗传糖尿病的发生与线粒体tRNA~(Glu)14692A>G突变相关第83-86页
    3.2.3 A14692G突变对tRNA~(Glu)假尿嘧啶修饰影响的检测第86-88页
    3.2.4 人线粒体tRNA~(Glu)野生型与A14692G突变体热力学稳定性测定第88-91页
    3.2.5 含有tRNA~(Glu)A14692G位点突变的细胞的生物学功能分析第91-98页
      3.2.5.1 携带tRNA~(Glu)A14692G突变的细胞系的线粒体tRNA稳态水平显著降低第91-92页
      3.2.5.2 A14692G导致线粒体蛋白质合成缺陷第92-93页
      3.2.5.3 A14692G导致细胞株出现呼吸缺陷第93-95页
      3.2.5.4 A14692G突变降低了线粒体ATP的产量第95页
      3.2.5.5 A14692G突变增加了细胞线粒体ROS的产生第95页
      3.2.5.6 A14692G突变降低了细胞线粒体的膜电势第95-98页
第四章 讨论与总结第98-104页
第五章 研究中存在的问题与展望第104-105页
参考文献第105-116页
附录第116-119页
博士期间发表的论文第119页

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