论文目录 | |
| 缩略语表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 文献回顾 | 第18-32页 |
| 第一部分 HBX通过促进TGF-Β1旁分泌上调CD147活化肝星状细胞 | 第32-45页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1 细胞系 | 第32页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.4 主要缓冲液 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-39页 |
| 2.1 细胞培养 | 第34页 |
| 2.2 HBx瞬时/稳定转染 | 第34-35页 |
| 2.3 细胞培养上清酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测TGF-β1 | 第35页 |
| 2.4 实时定量PCR | 第35-38页 |
| 2.5 免疫印迹反应（SDS-PAGE/Western blot） | 第38-39页 |
| 2.6 统计学处理 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 稳定转染HBx蛋白肝细胞株L02-HBx的建立 | 第39-40页 |
| 3.2 HBx通过旁分泌TGF-β1 上调HSC中CD147表达 | 第40-41页 |
| 3.3 HSC中TGF-β1 上调CD147和肝纤维化相关分子的表达 | 第41-43页 |
| 3.4 过表达CD147促进HSC中肝纤维化相关分子的上调表达 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第二部分 HBV转基因小鼠中CD147表达上调促进肝纤维化 | 第45-58页 |
| 1 材料 | 第45-47页 |
| 1.1 实验动物 | 第45页 |
| 1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 1.3 主要试剂 | 第46-47页 |
| 1.4 主要缓冲液 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-50页 |
| 2.1 免疫组织化学 | 第47-48页 |
| 2.2 H&E染色 | 第48页 |
| 2.3 组织免疫荧光染色 | 第48-49页 |
| 2.4 天狼星红染色 | 第49页 |
| 2.5 Masson三色染色 | 第49页 |
| 2.6 免疫印迹反应（western blot） | 第49页 |
| 2.7 统计学处理 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-55页 |
| 3.1 HBV-tg小鼠表达HBx蛋白 | 第50页 |
| 3.2 HBV-tg小鼠发生自发纤维化 | 第50-52页 |
| 3.3 CD147分子和肝纤维化相关分子在HBV-tg小鼠肝脏组织表达上调 | 第52-54页 |
| 3.4 在HBV-tg小鼠肝纤维化组织中CD147、TGF-β1、α-SMA共定位于HSC中 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第三部分 在HSC中TGF-Β1 通过SMADS信号途径转录调控CD147的表达 | 第58-74页 |
| 1 材料 | 第58-60页 |
| 1.1 细胞系 | 第58页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 1.3 主要试剂 | 第59-60页 |
| 1.4 主要缓冲液 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-65页 |
| 2.1 细胞培养 | 第60-61页 |
| 2.2 实验动物 | 第61页 |
| 2.3 细胞免疫荧光 | 第61页 |
| 2.4 RNA干涉 | 第61-62页 |
| 2.5 荧光素酶基因报告系统检测Smad4对CD147的调控作用 | 第62页 |
| 2.6 染色质免疫共沉淀（Ch IP） | 第62-64页 |
| 2.7 Smad4结合序列定点突变后检测双荧光素酶系统 | 第64-65页 |
| 2.8 免疫印迹反应（Western blot） | 第65页 |
| 2.9 统计学处理 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-71页 |
| 3.1 Smad信号通路参与了TGF-β1 诱导的CD147表达 | 第65-67页 |
| 3.2 下调Smad2、Smad3、Smad4抑制CD147的表达 | 第67-68页 |
| 3.3 Smad4上调CD147的转录表达 | 第68-69页 |
| 3.4 确定Smad4直接结合CD147启动子的特定位点 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 附录 | 第88-102页 |
| 个人简历和研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
