论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-28页 |
| 1.1 胃癌的发病机制研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 胃癌治疗的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 胃癌复发及耐药研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4 micro RNA的生物发生与作用机制 | 第19-22页 |
| 1.4.1 micro RNA的生物发生和功能 | 第19-22页 |
| 1.4.2 micro RNA的作用机制 | 第22页 |
| 1.5 micro RNA与肿瘤发生及肿瘤耐药 | 第22-26页 |
| 1.5.1 miRNA与肿瘤发生 | 第22-23页 |
| 1.5.2 miRNA与肿瘤耐药 | 第23-26页 |
| 1.6 本课题的研究思路及意义 | 第26-28页 |
| 1.6.1 课题的研究思路 | 第26-27页 |
| 1.6.2 课题的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-56页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第28-37页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第28-29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29-33页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第33-34页 |
| 2.1.4 细胞系 | 第34页 |
| 2.1.5 大肠杆菌菌株 | 第34-35页 |
| 2.1.6 寡核苷酸 | 第35页 |
| 2.1.7 引物 | 第35-36页 |
| 2.1.8 靶基因 3‘-UTR位点片段及突变合成 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-54页 |
| 2.2.1 组织和细胞系总RNA的提取 | 第37-39页 |
| 2.2.2 组织和细胞系总蛋白的提取与保存 | 第39页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第39-41页 |
| 2.2.4 靶基因预测和验证 | 第41页 |
| 2.2.5 基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| 2.2.6 载体构建 | 第42-47页 |
| 2.2.7 细胞培养 | 第47-49页 |
| 2.2.8 lipo3000脂质体瞬时转染 | 第49-50页 |
| 2.2.9 双荧光报告 | 第50页 |
| 2.2.10 Western Blot | 第50-52页 |
| 2.2.11 细胞增殖实验 | 第52-53页 |
| 2.2.12 药物刺激及细胞存活率检测： | 第53-54页 |
| 2.2.13 细胞周期时相检测 | 第54页 |
| 2.2.14 细胞凋亡检测 | 第54页 |
| 2.2.15 统计分析 | 第54页 |
| 2.3 使用的数据库和软件 | 第54-56页 |
| 第3章 结果 | 第56-79页 |
| 3.1 临床样品的收集及总RNA的提取 | 第56-57页 |
| 3.2 临床样本中miR-21的表达及其与临床特征的相关性 | 第57-59页 |
| 3.2.1 miR-21在胃癌中的表达 | 第57页 |
| 3.2.2 miR-21与胃癌临床特征的相关性 | 第57-59页 |
| 3.2.3 miR-21与胃癌预后的相关性 | 第59页 |
| 3.3 耐药细胞系的诱导和验证 | 第59-64页 |
| 3.3.1 胃癌耐药细胞株的诱导 | 第59-61页 |
| 3.3.2 CCK-8 法检测敏感细胞株和耐药细胞株对化疗药物敏感性 | 第61-63页 |
| 3.3.3 耐药蛋白P-gp在耐药细胞中的高表达 | 第63-64页 |
| 3.3.4 miR-21在耐药细胞系SGC-7901/DOX中表达水平 | 第64页 |
| 3.4 miR-21在胃癌多药耐药中的作用研究 | 第64-69页 |
| 3.4.1 抑制miR-21能明显逆转胃癌耐药细胞系SGC-7901/DOX3对阿霉素的耐药性 | 第64-67页 |
| 3.4.2 上调miR-21能明显增加敏感株SGC-7901对阿霉素的耐药性 | 第67-69页 |
| 3.5 miR-21的靶基因预测及验证 | 第69-76页 |
| 3.5.1 miR-21靶基因预测 | 第70页 |
| 3.5.2 相关质粒载体的构建 | 第70-72页 |
| 3.5.3 miR-21靶基因筛选 | 第72-73页 |
| 3.5.4 miR-21直接靶向PTEN和TIMP3 | 第73-74页 |
| 3.5.5 胃癌中PTEN和TIMP3基因表达情况 | 第74-76页 |
| 3.6 PTEN和TIMP3在胃癌多药耐药中的作用 | 第76-79页 |
| 3.6.1 PTEN在胃癌抵抗阿霉素、顺铂等药物耐药中的作用 | 第76-77页 |
| 3.6.2 TIMP3在胃癌抵抗阿霉素、顺铂等药物耐药中的作用 | 第77-79页 |
| 第4章 讨论 | 第79-90页 |
| 4.1 miR-21表达差异性讨论 | 第79-82页 |
| 4.1.1 miRNA在胃癌中的表达谱 | 第79-80页 |
| 4.1.2 miR-21在肿瘤等疾病的表达和临床意义 | 第80-82页 |
| 4.2 miR-21功能多样性讨论 | 第82-84页 |
| 4.2.1 miR-21与细胞增殖、分化、凋亡及侵袭转移等有关 | 第82页 |
| 4.2.2 miR-21与肿瘤细胞、药物耐受相关 | 第82-84页 |
| 4.3 miR-21的靶基因功能讨论 | 第84-88页 |
| 4.3.1 PETN在肿瘤中相关功能和调控机制研究 | 第85-86页 |
| 4.3.2 TIMP-3 在肿瘤中的相关功能和调控机制研究 | 第86-88页 |
| 4.4 miRNA与胃癌多药耐药及复发的关系 | 第88-90页 |
| 第5章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 5.1 结论 | 第90-91页 |
| 5.2 展望 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第109-110页 |
| 综述 | 第110-117页 |
| 参考文献 | 第115-117页 |
