论文目录 | |
中文摘要 | 第1-4页 |
英文摘要 | 第4-8页 |
第一部分FOXC1在体内,体外抑制MDA-MB-231HM的转移 | 第8-43页 |
引言 | 第8-22页 |
一、乳腺癌恶性转移相关机制研究进展 | 第8-16页 |
(一)乳腺癌转移机制研究进展 | 第8-12页 |
(二)转移相关因子的研究现状 | 第12-16页 |
二、FOX转录因子家族简介 | 第16-20页 |
(一)FOX家族成员 | 第16-18页 |
(二)FOX家族蛋白的主要功能 | 第18-19页 |
(三)FOXC1基因及功能研究进展 | 第19-20页 |
三、本论文研究的内容和意义 | 第20-22页 |
(一)立题依据 | 第20-21页 |
(二)本论文的研究内容和意义 | 第21-22页 |
实验材料与方法 | 第22-32页 |
一、实验材料 | 第22页 |
(一)质粒 | 第22页 |
(二)蛋白质和抗体 | 第22页 |
(三)哺乳动物细胞系及裸鼠 | 第22页 |
(四)试剂 | 第22页 |
二、实验方法 | 第22-32页 |
Ⅰ.分子生物学实验方法 | 第22-26页 |
(一)分子克隆 | 第22页 |
(二)DNA的琼脂糖电泳 | 第22-23页 |
(三)质粒大量制备的方法 | 第23-24页 |
(四)哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录 | 第24-26页 |
II. 细胞生物学实验方法 | 第26-30页 |
(一)哺乳动物细胞系的培养 | 第26页 |
(二)真核生物细胞系的瞬时转染和稳定转染 | 第26-27页 |
(三)蛋白质的Western Blot分析 | 第27-29页 |
(四)细胞体外划痕实验 | 第29页 |
(五)肿瘤细胞迁移和侵袭实验 | 第29-30页 |
Ⅲ. 裸鼠相关实验方法 | 第30-31页 |
(一)肺高转移细胞的筛选和建系 | 第30页 |
(二)尾静脉(tail vein)接种方法检测癌细胞向肺转移 | 第30-31页 |
(三)乳腺脂肪垫(the mammary fat pad)原位接种方法检测癌细胞向肺转移 | 第31页 |
Ⅳ. 统计分析 | 第31-32页 |
实验结果与分析 | 第32-39页 |
一、FOXC1抑制MDA-MB-231HM细胞体外的迁移和侵袭 | 第32-36页 |
(一)自发性肺高转移特性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231HM | 第32页 |
(二)FOXC1在肺高转移细胞株MDA-MB-231HM中的表达 | 第32-33页 |
(三)MDA-MB-231HM-FOXC1稳定转染细胞系的建立 | 第33-34页 |
(四)FOXC1抑制MDA-MB-231HM细胞的迁移 | 第34-35页 |
(五)FOXC1抑制MDA-MB-231HM细胞的侵袭 | 第35-36页 |
二、FOXC1抑制MDA-MB-231HM细胞在裸鼠体内的转移 | 第36-39页 |
( 一 ) 尾静脉 ( tail vein ) 接种方法检测FOXC1抑 制乳腺癌细胞系MDA-MB-231HM向肺转移 | 第36-37页 |
(二)乳腺脂肪垫(the mammary fat pad)原位接种方法检测FOXC1抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231HM向肺转移 | 第37-39页 |
讨论 | 第39-43页 |
一、乳腺癌转移模型的建立及其应用 | 第39-41页 |
二、FOXC1参与抑制乳腺癌的转移 | 第41-42页 |
三、FOXC1在恶性乳腺癌中的预后判断作用 | 第42-43页 |
第二部分CARM1通过位点特异性甲基化HP1γ 抑制肿瘤细胞的衰老和SAHF | 第43-82页 |
引言 | 第43-53页 |
一、细胞衰老与肿瘤关系 | 第43-47页 |
(一)细胞衰老的介绍 | 第43-44页 |
(二)衰老与肿瘤的相关性 | 第44-47页 |
二、衰老相关的异染色质凝集现象 | 第47-50页 |
三、精氨酸甲基化家族简介 | 第50-51页 |
四、本论文研究的内容和意义 | 第51-53页 |
(一)立题依据 | 第51页 |
(二)本论文的研究内容和意义 | 第51-53页 |
实验材料与方法 | 第53-65页 |
一、实验材料 | 第53页 |
(一)质粒 | 第53页 |
(二)抗体与蛋白质 | 第53页 |
(三)哺乳动物细胞系 | 第53页 |
(四)实验试剂 | 第53页 |
二、实验方法 | 第53-65页 |
Ⅰ.分子生物学实验方法 | 第53-54页 |
Ⅱ 细胞生物学实验方法 | 第54-65页 |
(一)哺乳动物细胞系的培养 | 第54页 |
(二)慢病毒体系的建立 | 第54页 |
(三)流式细胞术 | 第54页 |
(四)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation assay, CoIP)实验 | 第54-55页 |
(五)衰老染色实验 | 第55-56页 |
(六)BrdU掺入实验 | 第56-57页 |
(七) 慢病毒表达质粒的构建 | 第57-62页 |
(八)慢病毒干涉载体的构建 | 第62-64页 |
(九)慢病毒包装及侵染 | 第64-65页 |
实验结果与分析 | 第65-78页 |
一、CARM1参与乳腺癌细胞MDA-MB-231的衰老及衰老相关的异染色质凝集(SAHF) | 第65-70页 |
二、CARM1参与抑制阿霉素诱导细胞衰老及SAHF形成的分子机制 | 第70-78页 |
(一) 干涉CARM1诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞衰老及SAHF | 第70-73页 |
(二) CARM1通过与HP1γ 作用来影响MDA-MB-231的衰老及SAHF形成 | 第73-74页 |
(三) CARM1通过甲基化HP1γ 特异性位点来发挥作用 | 第74-78页 |
讨论 | 第78-82页 |
一、衰老及SAHF的关系 | 第78-79页 |
二、CARM1在衰老和SAHF中的新功能 | 第79-80页 |
三、CARM1的新底物HP1γ 及对HP1γ 的91位精氨酸的单甲基化修饰 | 第80-81页 |
四、HP1γ 的91位精氨酸甲基化可能影响93位丝氨酸的磷酸化 | 第81-82页 |
主要结论和创新点 | 第82-83页 |
一、主要结论 | 第82页 |
二、主要创新点 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-95页 |
附录 | 第95-96页 |
致谢 | 第96-97页 |
在学期间公开发表论文及著作情况 | 第97页 |