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自然杀伤细胞联合曲妥珠单抗增强对曲妥珠单抗耐药乳腺癌细胞的杀伤作用

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自然杀伤细胞联合曲妥珠单抗增强对曲妥珠单抗耐药乳腺癌细胞的杀伤作用
论文目录
 
中文摘要第1-6页
Abstract第6-14页
引言第14-18页
第1章 文献综述第18-32页
  1.1 过继性NK细胞免疫治疗实体肿瘤第18-26页
    1.1.1 NK细胞表型及杀伤实体肿瘤第18-20页
    1.1.2 ADCC作用第20页
    1.1.3 NK细胞毒性作用机制第20-22页
    1.1.4 NK细胞治疗肿瘤的临床试验第22-24页
    1.1.5 扩增NK细胞的方法第24-26页
  1.2 曲妥珠单抗治疗乳腺癌第26-32页
    1.2.1 曲妥珠单抗的作用机制第27-29页
    1.2.2 曲妥珠单抗耐药的形成第29-32页
第2章 材料与方法第32-50页
  2.1 细胞第32页
  2.2 主要试剂第32-33页
  2.3 试剂配制第33-35页
    2.3.1 DMEM-F12培养液第33页
    2.3.2 PBS缓冲液第33-34页
    2.3.3 胰蛋白酶—EDTA消化液 500ml第34页
    2.3.4 MTT溶液第34页
    2.3.5 新三联裂解液第34页
    2.3.6 4%台盼蓝母液第34页
    2.3.7 30%Triton X-100 溶液第34页
    2.3.8 钙黄绿素-AM染色液(Calcein-AM)第34-35页
  2.4 流式细胞术抗体第35页
  2.5 主要仪器第35-36页
  2.6 主要方法第36-48页
    2.6.1 人乳腺癌细胞的培养第36页
    2.6.2 曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞的诱导及培养第36页
    2.6.3 验证耐药细胞对曲妥珠单抗的耐药作用:MTT第36-37页
    2.6.4 曲妥珠单抗敏感及耐药乳腺癌细胞的HER2表达检测:流式细胞术第37-38页
    2.6.5 NK细胞的体外诱导及扩增第38页
    2.6.6 NK细胞的存活率、免疫表型及活性鉴定第38页
    2.6.7 NK细胞对乳腺癌细胞杀伤活性的鉴定:钙黄绿素-AM释放法第38-40页
    2.6.8 曲妥珠单抗对NK细胞的影响:MTT第40页
    2.6.9 曲妥珠单抗联合NK细胞对曲妥珠单抗耐药细胞的杀伤作用:钙黄绿素-AM释放法第40-41页
    2.6.10 曲妥珠单抗耐药细胞存在时,曲妥珠单抗对NK细胞活化性受体及抑制性受体的影响:流式细胞术第41-42页
    2.6.11 曲妥珠单抗耐药细胞存在时,曲妥珠单抗对肿瘤细胞表面的NK细胞活化性配体的影响:流式细胞术第42-43页
    2.6.12 曲妥珠单抗对NK细胞分泌细胞因子的影响:ELISA法第43-44页
    2.6.13 曲妥珠单抗对NK细胞分泌细胞因子的影响:CBA试剂盒流式细胞术第44-45页
    2.6.14 曲妥珠单抗耐药细胞存在时,曲妥珠单抗对NK细胞杀伤受体Fas及其配体Fas L的影响:流式细胞术第45-46页
    2.6.15 阻断Fas受体,曲妥珠单抗联合NK细胞对耐药细胞的杀伤作用的影响:钙黄绿素-AM释放法第46-47页
    2.6.16 曲妥珠单抗耐药细胞存在时,曲妥珠单抗对NK细胞内穿孔素与颗粒酶B的表达影响:流式细胞术第47-48页
  2.7 统计学方法第48-50页
第3章 结果第50-72页
  3.1 与敏感细胞相比,耐药细胞对曲妥珠单抗的敏感性明显减弱第50-51页
  3.2 曲妥珠单抗敏感及耐药的乳腺癌细胞表面HER2表达量的鉴定第51-52页
  3.3 NK细胞的来源及活性检测第52-56页
    3.3.1 NK细胞来源的乳腺癌供者的临床资料第52-53页
    3.3.2 NK细胞的免疫表型、活化及抑制性受体的表达情况第53-54页
    3.3.3 NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性第54-55页
    3.3.4 曲妥珠单抗对NK细胞的增殖抑制作用第55-56页
  3.4 曲妥珠单抗联合NK细胞能够增强对曲妥珠单抗耐药细胞的杀伤作用第56-58页
  3.6 曲妥珠单抗能够通过改变活化及抑制性受配体而增强NK细胞的活性第58-67页
    3.6.1 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下,曲妥珠单抗能够上调NK细胞表面的活化性受体的表达第58-61页
    3.6.2 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下,曲妥珠单抗能够上调乳腺癌表面NK细胞活化性配体的表达第61-62页
    3.6.3 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下,曲妥珠单抗能下调NK细胞表面抑制性受体的表达第62-67页
  3.7 曲妥珠单抗与NK细胞联合能够通过增加环境中细胞因子的分泌而增强对敏感及耐药细胞的杀伤作用第67-68页
  3.8 曲妥珠单抗能够通过增加NK细胞凋亡受配体Fas及Fas L的表达第68-69页
    3.8.1 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下,曲妥珠单抗能够增加肿瘤细胞表面NK细胞凋亡受体Fas及NK细胞表面Fas L配体的表达第68-69页
    3.8.2 在阻断凋亡受体Fas后,曲妥珠单抗与NK细胞对耐药细胞的联合杀伤作用被部分阻断第69页
  3.9 肿瘤细胞环境下,曲妥珠单抗对于NK细胞内的杀伤因子穿孔素及颗粒酶B生成的影响第69-72页
第4章 讨论第72-76页
结论第76-78页
参考文献第78-92页
攻读博士期间主要学术成果第92-94页
致谢第94页

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