论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 研究现状、成果 | 第13-15页 |
| 研究目的、方法 | 第15-16页 |
| 一、hUCMSCs的培养和鉴定 | 第16-28页 |
| 1.1 对象和方法 | 第16-18页 |
| 1.1.1 实验对象 | 第16页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第16页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.1.4 实验方法 | 第17-18页 |
| 1.2 结果 | 第18-21页 |
| 1.2.1 hUCMSCs形态学观察 | 第18-19页 |
| 1.2.2 hUCMSCs免疫表型的检测 | 第19-21页 |
| 1.3 讨论 | 第21-27页 |
| 1.3.1 选择hUCMSCs的优势 | 第21-23页 |
| 1.3.2 hUCMSCs分离与获取 | 第23-24页 |
| 1.3.3 hUCMSCs的鉴定 | 第24-27页 |
| 1.4 小结 | 第27-28页 |
| 二、PEDF基因重组LV载体在hUCMSCs中的表达 | 第28-50页 |
| 2.1 对象和方法 | 第28-35页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第29-35页 |
| (1) hUCMSCs的培养 | 第29-30页 |
| (2) 构建PEDF重组LV载体 | 第30页 |
| (3) PEDF重组LV载体转染hUCMSCs | 第30-31页 |
| (4) 细胞爬片染色观察转染效率 | 第31页 |
| (5) 细胞免疫荧光检测PEDF与VEGF表达 | 第31-32页 |
| (6) Real time-PCR检测PEDF-MSCs中PEDF与VEGF mRNA的表达 | 第32-34页 |
| (7) ELISA试剂盒检测细胞上清液中PEDF与VEGF蛋白相对表达量 | 第34-35页 |
| (8) 统计方法 | 第35页 |
| 2.2 结果 | 第35-45页 |
| 2.2.1 PEDF基因LV载体构建 | 第35-38页 |
| 2.2.2 LV空载体在hUCMSCs中的表达 | 第38-39页 |
| 2.2.3 PEDF基因重组LV载体在hUCMSCs中的表达 | 第39-40页 |
| 2.2.4 转染效率 | 第40-41页 |
| 2.2.5 免疫荧光检测hUCMSCs中PEDF与VEGF表达 | 第41-42页 |
| 2.2.6 免疫细胞化学法检测hUCMSCs中PEDF与VEGF表达 | 第42-43页 |
| 2.2.7 Real time-PCR检测hUCMSCs中PEDF与VEGFmRNA表达 | 第43-44页 |
| 2.2.8 ELISA方法检测转染后hUCMSCs上清液中PEDF与VEGF表达 | 第44-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-49页 |
| 2.3.1 LV载体的应用 | 第45-48页 |
| 2.3.2 PEDF-MSCs中PEDF与VEGF表达 | 第48-49页 |
| 2.4 小结 | 第49-50页 |
| 三、PEDF-MSCs对早期DR的影响 | 第50-77页 |
| 3.1 对象和方法 | 第50-56页 |
| 3.1.1 实验对象 | 第50页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第51-56页 |
| (1) 实验分组与糖尿病大鼠模型构建 | 第51页 |
| (2) PEDF基因转染hUCMSCs | 第51页 |
| (3) 玻璃体腔注射 | 第51-52页 |
| (4) 观察hUCMSCs在眼内分布情况 | 第52页 |
| (5) DR大鼠视网膜切片制作 | 第52页 |
| (6) HE染色观察视网膜结构 | 第52-53页 |
| (7) 视网膜血管形态学分析 | 第53页 |
| (8) 免疫组织化学检测DR大鼠PEDF及VEGF蛋白表达 | 第53-54页 |
| (9) Real time-PCR检测视网膜中PEDF及VEGF mRNA的表达 | 第54-56页 |
| (10)统计方法 | 第56页 |
| 3.2 结果 | 第56-70页 |
| 3.2.1 实验动物分组 | 第56-57页 |
| 3.2.2 糖尿病大鼠模型的建立 | 第57-58页 |
| 3.2.3 正常大鼠与糖尿病组大鼠血糖与体重 | 第58-59页 |
| 3.2.4 PEDF-MSCs与GFP-MSCs在眼内存活情况 | 第59页 |
| 3.2.5 HE染色观察视网膜结构 | 第59-62页 |
| 3.2.6 视网膜各层厚度测量分析 | 第62-63页 |
| 3.2.7 各组视网膜血管形态学分析 | 第63-65页 |
| 3.2.8 免疫组织化学法检测各组视网膜中PEDF及VEGF表达 | 第65-69页 |
| 3.2.9 Real time-PCR检测各组视网膜PEDF及VEGF mRNA表达水平 | 第69-70页 |
| 3.3 讨论 | 第70-75页 |
| 3.3.1 PEDF对DR的保护作用 | 第70-72页 |
| 3.3.2 MSCs对DR的保护作用 | 第72-74页 |
| 3.3.3 糖尿病动物模型构建方法 | 第74-75页 |
| 3.4 小结 | 第75-77页 |
| 全文结论 | 第77-79页 |
| 论文创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第94-95页 |
| 综述 间充质干细胞治疗糖尿病视网膜病变应用展望 | 第95-116页 |
| 综述参考文献 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
