论文目录 | |
缩略语表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-13页 |
Abstract | 第13-18页 |
前言 | 第18-19页 |
文献回顾 | 第19-31页 |
第一部分 miR-7 在胃癌细胞和胃癌组织中的表达模式及其临床意义 | 第31-41页 |
1 材料 | 第31-33页 |
1.1 细胞系 | 第31页 |
1.2 组织标本 | 第31-32页 |
1.3 主要试剂 | 第32页 |
1.4 主要仪器 | 第32-33页 |
2 方法 | 第33-36页 |
2.1 细胞培养 | 第33页 |
2.2 细胞和组织总RNA的提取 | 第33页 |
2.3 实时定量PCR检测细胞和组织中miR-7 的表达 | 第33-34页 |
2.4 组织原位杂交检测组织芯片中miR-7 的表达 | 第34-36页 |
3 结果 | 第36-39页 |
3.1 miR-7 在胃癌细胞和胃癌组织中的表达模式 | 第36-37页 |
3.2 miR-7 表达与胃癌分级、分期的相关性 | 第37-39页 |
4 讨论 | 第39-41页 |
第二部分 miR-7 在胃癌细胞恶性生物学行为中的功能研究 | 第41-54页 |
1 材料 | 第41-42页 |
1.1 载体 | 第41页 |
1.2 细胞系 | 第41页 |
1.3 实验动物 | 第41页 |
1.4 主要试剂 | 第41-42页 |
1.5 主要仪器 | 第42页 |
2 方法 | 第42-46页 |
2.1 构建miR-7 功能获得和功能缺失细胞模型 | 第42-43页 |
2.2 过表达或沉默miR-7 后的体外功能实验 | 第43-45页 |
2.3 过表达或沉默miR-7 后的体外功能实验 | 第45-46页 |
3 结果 | 第46-51页 |
3.1 构建miR-7 功能获得和功能缺失细胞模型 | 第46-47页 |
3.2 miR-7 抑制胃癌细胞体外增殖、促进凋亡和逆转耐药 | 第47-49页 |
3.3 miR-7 抑制胃癌细胞迁移和侵袭 | 第49-50页 |
3.4 miR-7 抑制胃癌细胞体内生长和转移 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-54页 |
第三部分 miR-7 靶分子的高通量筛选与鉴定 | 第54-67页 |
1 材料 | 第54-55页 |
1.1 细胞系 | 第54页 |
1.2 载体 | 第54页 |
1.3 基因芯片 | 第54页 |
1.4 主要试剂 | 第54-55页 |
1.5 主要仪器 | 第55页 |
2 方法 | 第55-60页 |
2.0 瞬时转染构建miR-7 过表达模型 | 第55-56页 |
2.1 iTRAQ技术高通量筛选miR-7 过表达后的差异表达蛋白 | 第56页 |
2.2 cDNA基因芯片高通量筛选mi R-7 过表达后的差异表达基因 | 第56-57页 |
2.4 iTRAQ与基因芯片高通量筛选结果的数据分析 | 第57页 |
2.5 双萤光素酶报告基因实验验证miR-7 对靶分子的结合 | 第57-59页 |
2.6 实时定量PCR检测细胞中RELA、FOS和IGF1R的表达 | 第59页 |
2.7 Western blot检测细胞中RELA、FOS和IGF1R的表达 | 第59-60页 |
3 结果 | 第60-63页 |
3.1 联合转录组学、蛋白质组学和生物信息学方法筛选miR-7 的靶分子 | 第60-61页 |
3.2 RELA、FOS和IGF1R是miR-7 的直接靶分子 | 第61-62页 |
3.3 miR-7 负性调控RELA、FOS和IGF1R的表达 | 第62-63页 |
4 讨论 | 第63-67页 |
第四部分miR-7 调控胃癌发生的机制研究 | 第67-86页 |
1 材料 | 第67-68页 |
1.1 载体 | 第67页 |
1.2 细胞系 | 第67页 |
1.3 组织芯片 | 第67页 |
1.4 实验动物 | 第67页 |
1.5 主要试剂 | 第67-68页 |
1.6 主要仪器 | 第68页 |
2 方法 | 第68-71页 |
2.1 过表达或沉默RLEA和FOS对胃癌细胞增殖能力的影响 | 第68-69页 |
2.2 萤光素酶报告基因系统检测miR-7 对IKKε 的直接调控作用 | 第69页 |
2.3 Ch IP验证RELA与miR-7 启动子区域的结合 | 第69-70页 |
2.4 miR-7 对胃癌细胞中NF-κB信号通路的影响 | 第70页 |
2.5 幽门螺杆菌感染对miR-7 生成的影响 | 第70-71页 |
2.6 IHC检测胃癌组织芯片中RELA和FOS的表达 | 第71页 |
3 结果 | 第71-81页 |
3.1 miR-7 通过调控RELA和FOS抑制胃癌增殖 | 第71-74页 |
3.2 miR-7 与NF-κB构成双负反馈调控环路 | 第74-80页 |
3.3 miR-7 与RELA及FOS在胃癌组织中表达水平呈负相关 | 第80-81页 |
4 讨论 | 第81-86页 |
第五部分miR-7 调控胃癌转移的机制研究 | 第86-98页 |
1 材料 | 第86-87页 |
1.1 载体 | 第86页 |
1.2 细胞系 | 第86页 |
1.3 实验动物 | 第86页 |
1.4 组织芯片 | 第86页 |
1.5 主要试剂 | 第86-87页 |
1.6 主要仪器 | 第87页 |
2 方法 | 第87-88页 |
2.1 过表达或沉默IGF1R对胃癌细胞迁移、侵袭和转移能力的影响 | 第87-88页 |
2.2 实时定量PCR检测E-cadherin上游转录抑制因子的表达 | 第88页 |
2.3 miR-7 对胃癌细胞EMT相关标志物表达的影响 | 第88页 |
2.4 IHC检测胃癌组织芯片中IGF1R的表达 | 第88页 |
3 结果 | 第88-95页 |
3.1 miR-7 通过调控IGF1R抑制胃癌细胞侵袭和转移 | 第88-92页 |
3.2 miR-7 抑制胃癌细胞EMT | 第92页 |
3.3 miR-7 通过抑制IGF1R/Snail分子通路促进E-cadherin表达 | 第92-93页 |
3.4 miR-7 与IGF1R在胃癌组织中表达水平呈负相关 | 第93-95页 |
4 讨论 | 第95-98页 |
小结 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-108页 |
附录 | 第108-121页 |
个人简历和研究成果 | 第121-123页 |
致谢 | 第123页 |