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GM-CSF抗流感病毒机制及恩替卡韦黄芩苷组合物抗乙肝病毒药效研究

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GM-CSF抗流感病毒机制及恩替卡韦黄芩苷组合物抗乙肝病毒药效研究
论文目录
 
中文摘要第1-12页
英文摘要第12-17页
缩略词表第17-20页
第一部分 GM-CSF抗流感病毒作用机制研究第20-92页
前言第20-22页
第一节 实验总体流程第22-27页
一、材料与方法第22-23页
  1. 材料第22页
  2. 方法第22-23页
  2.1 小鼠分组、造模及给药第22页
  2.2 样本取材及保存第22-23页
  2.3 统计学分析第23页
二、结果第23-26页
  1. 各组小鼠的肺指数情况第23-24页
  2. 各组小鼠肺大体病变情况第24-26页
三、讨论第26-27页
第二节 GM-CSF对模型小鼠肺细胞因子和免疫细胞的调控作用第27-43页
一、材料与方法第27-29页
  1. 材料第27-28页
  2. 方法第28-29页
  2.1 ELISA法检测小鼠肺细胞因子第28-29页
  2.2 流式细胞术检测小鼠肺免疫细胞第29页
二、结果第29-40页
  1. 小鼠肺TNF-α、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IL-10水平变化情况第29-33页
  2. 小鼠肺中性粒细胞、单核/巨噬细胞和NK细胞数量占比变化情况第33-40页
三、讨论第40-43页
第三节 GM-CSF对模型小鼠肺组织病毒载量的抑制第43-52页
一、材料与方法第43-48页
  1. 材料第43-44页
  2. 方法第44-48页
  2.1 Trizol法提取肺组织RNA第44-45页
  2.2 RT-PCR将mRNA反转录为cDNA第45页
  2.3 real time PCR定量分析的质粒对照品的构建第45-47页
  2.4 real time PCR检测肺组织样品中流感病毒M基因的表达第47-48页
二、结果第48-50页
  1. 流感病毒M基因及GAPDH质粒对照品质量鉴定第48-49页
  2. real time RT-PCR 检测肺组织流感病毒载量的变化情况第49-50页
三、讨论第50-52页
第四节 GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB信号途径的影响第52-70页
一、材料与方法第52-58页
  1. 材料第52-54页
  2. 方法第54-58页
  2.1 real time RT-PCR检测小鼠肺组织NF-κB、IRF3和IRF7基因的表达水平第54页
  2.2 Western blot检测小鼠肺组织NF-κB及相关蛋白表达第54-57页
  2.3 免疫组化检测小鼠肺组织磷酸化NF-κB的表达第57-58页
二、结果第58-66页
  1. GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB基因表达的影响第58-60页
  2. GM-CSF对模型小鼠肺组织IRF3和IRF7基因表达的影响第60-63页
  3. GM-CSF对模型小鼠肺组织NF-κB及相关蛋白表达的影响第63-65页
  4. GM-CSF对小鼠肺组织磷酸化的NF-κB表达的影响第65-66页
三、讨论第66-70页
第五节 GM-CSF对模型小鼠肺组织内细胞凋亡的抑制作用第70-83页
一、材料与方法第70-71页
  1. 材料第70页
  2. 方法第70-71页
  2.1 real time RT-PCR检测模型小鼠肺组织凋亡相关基因的表达第70-71页
  2.2 Western blot检测小鼠肺组织caspase 3、bax和bcl-2蛋白的表达第71页
  2.3 免疫组化检测模型小鼠肺组织cleaved caspase 3的表达第71页
二、结果第71-79页
  1. GM-CSF对模型小鼠肺细胞凋亡相关基因表达的影响第71-76页
  2. GM-CSF对模型小鼠肺组织caspase 3、cleaved caspase3、bax和bcl-2蛋白表达的影响(Western blot)第76-78页
  3. GM-CSF对模型小鼠肺组织cleaved caspase3表达的影响(IHC)第78-79页
三、讨论第79-83页
第一部分 小结第83-84页
第一部分 参考文献第84-92页
第二部分 恩替卡韦黄芩苷组合物抗乙肝病毒药效研究第92-158页
前言第92-94页
第一节 黄芩苷抗HBV作用及机制初步研究第94-118页
一、材料与方法第94-106页
  1. 材料第94-97页
  2. 方法第97-106页
  2.1 HepG2 2.2.15细胞的培养和传代第97-98页
  2.2 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞的细胞毒性检测第98页
  2.3 黄芩苷体外抗HBV活性检测第98-104页
  2.4 HepG2 2.2.15细胞内的肝细胞核因子表达水平的检测第104-106页
二、结果第106-116页
  1. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞生长的影响第106页
  2. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制第106-107页
  3. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞上清HBV DNA的抑制第107-109页
  4. 黄芩苷对HepG2 2.2.15细胞内HBV RNA的抑制第109-112页
  5. 黄芩苷对HNF1α、HNF3 β和HNF4α表达的影响第112-116页
三、讨论第116-118页
第二节 恩替卡韦黄芩昔组合物(ETV+BA)体外抗野生型HBV作用第118-123页
一、材料与方法第118-119页
  1. 材料第118页
  2. 方法第118-119页
  2.1 ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞毒性的检测第118页
  2.2 ETV+BA组合物抗HBV活性检测第118-119页
二、结果第119-121页
  1. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞生长的影响第119页
  2. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用第119-120页
  3. ETV+BA组合物对HepG2 2.2.15细胞上清HBV DNA的抑制作用第120-121页
三、讨论第121-123页
第三节 HBV拉米夫定耐药细胞模型的构建及恩替卡韦黄芩苷组合物体外抗拉米夫定耐药突变HBV作用第123-140页
一、材料与方法第123-129页
  1. 材料第123-124页
  2. 方法第124-129页
  2.1 HBV rtM204V+rtL180M突变和建立HBV拉米夫定耐药细胞模型第124-128页
  2.2 履替卡韦黄芩合物体外抗HBV rtM204V+rtL180M突变株活性检测第128-129页
二、结果第129-138页
  1. HBV rtM204V+rtL180M突变质粒的测序鉴定第129-131页
  2. rtM204V+rtL180M突变HBV在转染细胞内的复制活性第131-133页
  3. ETV+BA组合物体外抗HBV rtM204V+rtL180M突变株作用第133-138页
三、讨论第138-140页
第四节 恩替卡韦黄芩苷组合物在鸭乙肝模型中的抗DHBV作用第140-152页
一、材料与方法第140-146页
  1. 材料第140-142页
  2. 方法第142-146页
  2.1 鸭乙肝模型的构建第142-143页
  2.2 分组、给药及标本取材第143页
  2.3 斑点杂交(Dot blot)检测鸭血清中DHBV DNA水平第143-145页
  2.4 Southern blot检测鸭肝DHBV DNA第145-146页
二、结果第146-150页
  1. DHBV探针的质量鉴定第146页
  2. ETV+BA组合物对鸭乙肝模型血清DHBV DNA的抑制作用第146-149页
  3. ETV+BA组合物对鸭乙肝模型肝组织DHBV DNA的抑制作用第149-150页
三、讨论第150-152页
第二部分 小结第152-153页
展望第153-154页
第二部分参考文献第154-158页
在学期间的科研成果第158-159页
致谢第159-160页
综述第160-179页
参考文献第174-179页
附录一 第一部分中构建的real time PCR定量用质粒对照品测序结果第179-185页
附录二 第二部分中构建的real time PCR定量用质粒对照品测序结果第185-188页
附录三 pHBV3.8突变前和rtM204V+rtL180M双突变后的碱基序列比较第188-192页

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