论文目录 | |
| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-30页 |
| 1.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.2 iPS细胞诱导方法 | 第18-19页 |
| 1.2.1 转录因子诱导 | 第18-19页 |
| 1.2.2 小分子化合物诱导 | 第19页 |
| 1.3 患者特异性iPS细胞 | 第19-21页 |
| 1.4 iPS细胞技术构建心血管疾病模型 | 第21-28页 |
| 1.4.1 心血管疾病模型的建立 | 第23-25页 |
| 1.4.2 疾病药物筛选 | 第25-26页 |
| 1.4.3 心脏再生医学 | 第26-28页 |
| 1.5 存在的问题 | 第28-29页 |
| 1.5.1 体外分化心肌细胞效率低 | 第28页 |
| 1.5.2 无法模拟复杂疾病以及体内心脏系统 | 第28-29页 |
| 1.5.3 移植治疗条件尚不成熟 | 第29页 |
| 1.6 总结 | 第29-30页 |
| 第二章 肥厚型心肌病特异性iPS细胞系的建立 | 第30-53页 |
| 2.1 引言 | 第30-33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.2.1 组织标本和细胞 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2.3 仪器与耗材 | 第33-34页 |
| 2.2.4 主要培养基和试剂配置 | 第34-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-46页 |
| 2.3.1 尿液细胞的培养 | 第36-38页 |
| 2.3.2 CF-1孕鼠胚胎成纤维细胞滋养层的制备 | 第38-41页 |
| 2.3.3 iPS细胞诱导 | 第41-43页 |
| 2.3.4 iPS细胞克隆维护与培养 | 第43-46页 |
| 2.4 实验结果 | 第46-50页 |
| 2.4.1 母系遗传性HCM家系 | 第46-47页 |
| 2.4.2 HCM尿液细胞的分离收集 | 第47-48页 |
| 2.4.3 病毒的包装、收集 | 第48页 |
| 2.4.4 逆转录病毒感染HCM患者尿液细胞 | 第48-49页 |
| 2.4.5 HCM-iPS克隆的形成、挑取及培养 | 第49-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-53页 |
| 第三章 肥厚型心肌病特异性iPS细胞系的鉴定 | 第53-83页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第54页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第54-55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-71页 |
| 3.3.1 碱性磷酸酶检测(AP染色) | 第55页 |
| 3.3.2 免疫荧光检测 | 第55-56页 |
| 3.3.3 内源多能性基因和外源重编程基因相对表达量的检测 | 第56-59页 |
| 3.3.4 外源编程基因的插入鉴定 | 第59-61页 |
| 3.3.5 iPS细胞的核型分析 | 第61-62页 |
| 3.3.6 多能性基因(OCT4、NANOG)启动子的甲基化水平检测 | 第62-66页 |
| 3.3.7 体外分化拟胚体 | 第66-67页 |
| 3.3.8 体内分化畸胎瘤 | 第67-68页 |
| 3.3.9 m.2336T>C突变的鉴定 | 第68-71页 |
| 3.4 实验结果 | 第71-81页 |
| 3.4.1 碱性磷酸酶染色(AP染色) | 第71页 |
| 3.4.2 免疫荧光染色结果分析 | 第71-72页 |
| 3.4.3 内外源多能性基因的表达分析 | 第72-73页 |
| 3.4.4 外源重编程基因的沉默分析 | 第73-74页 |
| 3.4.5 插入鉴定 | 第74页 |
| 3.4.6 多能基因(OCT4、NANOG)启动子甲基化水平检测 | 第74-75页 |
| 3.4.7 核型鉴定 | 第75-76页 |
| 3.4.8 体外分化拟胚体实验 | 第76-77页 |
| 3.4.9 体内分化畸胎瘤实验 | 第77-79页 |
| 3.4.10 m.2336T>C突变位点检测 | 第79页 |
| 3.4.11 mtDNA全序列突变筛查 | 第79-81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 肥厚型心肌病特异性iPS细胞定向分化心肌细胞及功能鉴定 | 第83-98页 |
| 4.1 引言 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料 | 第84-85页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第84页 |
| 4.2.2 主要试剂的配置 | 第84-85页 |
| 4.2.3 仪器与设备 | 第85页 |
| 4.3 实验方法 | 第85-89页 |
| 4.3.1 心肌细胞分化 | 第85-86页 |
| 4.3.2 心肌细胞线粒体Mito-tracker染色 | 第86-87页 |
| 4.3.3 心肌细胞电生理实验记录 | 第87-88页 |
| 4.3.4 心肌细胞Ca~(2+)浓度测定 | 第88-89页 |
| 4.4 实验结果 | 第89-95页 |
| 4.4.1 HCM-iPS细胞定向分化心肌细胞(HCM-iPS-CM) | 第89-90页 |
| 4.4.2 HCM-iPS-CM细胞大小和线粒体体积的检测 | 第90-91页 |
| 4.4.3 HCM-iPS-CM的动作电位检测 | 第91-93页 |
| 4.4.4 HCM-iPS-CM的L型Ca~(2+)电流检测 | 第93-94页 |
| 4.4.5 HCM-iPS-CM的胞内Ca~(2+)浓度检测 | 第94-95页 |
| 4.5 讨论 | 第95-98页 |
| 第五章 m.2336T>C突变相关HCM的致病分子机制研究 | 第98-118页 |
| 5.1 引言 | 第98-99页 |
| 5.2 实验材料 | 第99页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第99页 |
| 5.2.2 仪器与耗材 | 第99页 |
| 5.3 实验方法 | 第99-107页 |
| 5.3.1 mtDNA拷贝数的分析 | 第99-101页 |
| 5.3.2 线粒体核糖体RNA和核糖体结合蛋白转录水平分析 | 第101-102页 |
| 5.3.3 线粒体蛋白质Western blot分析 | 第102-105页 |
| 5.3.4 细胞ADP/ATP测定 | 第105-106页 |
| 5.3.5 线粒体结构的透射电子显微镜观察 | 第106-107页 |
| 5.4 实验结果 | 第107-115页 |
| 5.4.1 m.2336T>C突变对mtDNA拷贝数的影响 | 第107-108页 |
| 5.4.2 m.2336T>C突变对线粒体核糖体相关基因转录水平的影响 | 第108-110页 |
| 5.4.3 m.2336T>C突变对线粒体OXPHOS复合体基因转录水平的影响 | 第110-112页 |
| 5.4.4 m.2336T>C突变对线粒体OXPHOS复合体蛋白亚基表达的影响 | 第112-114页 |
| 5.4.5 m.2336T>C突变对线粒体ATP合成的影响 | 第114页 |
| 5.4.6 m.2336T>C突变对线粒体结构的影响 | 第114-115页 |
| 5.5 讨论 | 第115-118页 |
| 第六章 创新点 | 第118-119页 |
| 第七章 存在的不足和展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-132页 |
| 附录Ⅰ：主要试剂的配制方法 | 第132-137页 |
| 附录Ⅱ：英文缩略词 | 第137-139页 |
| 附录Ⅲ：作者简历 | 第139页 |
