论文目录 | |
致谢 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-18页 |
第一章 文献综述 | 第18-35页 |
1.1 冠心病的危险因素 | 第18-22页 |
1.1.1 不可变危险因素 | 第18-19页 |
1.1.1.1 遗传因素 | 第18-19页 |
1.1.1.2 年龄 | 第19页 |
1.1.1.3 性别 | 第19页 |
1.1.2 可变危险因素 | 第19-22页 |
1.1.2.1 生理因素 | 第19-21页 |
1.1.2.2 心理因素 | 第21页 |
1.1.2.3 行为因素 | 第21-22页 |
1.1.2.4 境因素 | 第22页 |
1.2 冠心病的遗传学基础 | 第22-28页 |
1.2.1 ABO血型基因 | 第22-23页 |
1.2.2 脂质代谢相关基因 | 第23-26页 |
1.2.2.1 脂蛋白相关基因 | 第23-24页 |
1.2.2.2 低密度脂蛋白受体及其调控基因 | 第24页 |
1.2.2.3 胆固醇,甘油三酯代谢和转运相关基因 | 第24-26页 |
1.2.2.3.1 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因 | 第25页 |
1.2.2.3.2 ABC转运蛋白基因 | 第25-26页 |
1.2.2.3.3 卵磷脂:胆固醇酰基转移酶基因 | 第26页 |
1.2.2.3.4 脂肪酶基因 | 第26页 |
1.2.3 炎症反应相关基因 | 第26-28页 |
1.2.3.1 C-反应蛋白基因 | 第26-27页 |
1.2.3.2 5-脂氧合酶/白细胞三烯通路基因 | 第27页 |
1.2.3.3 肿瘤坏死因子基因 | 第27-28页 |
1.2.4 转录调控因子 | 第28页 |
1.3 冠心病与线粒体 | 第28-35页 |
1.3.1 线粒体基因组损伤与冠心病 | 第29-30页 |
1.3.2 线粒体氧化压力与冠心病 | 第30-31页 |
1.3.3 线粒体,炎症反应与冠心病 | 第31-33页 |
1.3.4 细胞凋亡与冠心病 | 第33-35页 |
第二章 材料和方法 | 第35-88页 |
2.1 实验材料 | 第35-39页 |
2.1.1 血液样本 | 第35页 |
2.1.2 细胞样本 | 第35页 |
2.1.3 菌株 | 第35页 |
2.1.4 实验仪器 | 第35-36页 |
2.1.5 试剂盒 | 第36页 |
2.1.6 试剂 | 第36-37页 |
2.1.7 试剂的配制方法 | 第37-39页 |
2.2 实验方法 | 第39-88页 |
2.2.1 冠心病临床表型及相关危险因素分析 | 第39页 |
2.2.2 外周血样本的采集和永生化淋巴细胞系的建立 | 第39-42页 |
2.2.2.1 外周血样本的采集 | 第39-40页 |
2.2.2.2 永生化淋巴细胞系的建立 | 第40-42页 |
2.2.3 线粒体基因组突变分析 | 第42-51页 |
2.2.3.1 外周血DNA的提取 | 第42-43页 |
2.2.3.2 线粒体基因组测序 | 第43-47页 |
2.2.3.3 限制性酶切分析突变比例 | 第47-51页 |
2.2.4 线粒体tRNA及其氨酰化水平的检测 | 第51-58页 |
2.2.4.1 永生化淋巴细胞线粒体的提取 | 第51-52页 |
2.2.4.2 线粒体总RNA的提取 | 第52-53页 |
2.2.4.3 酸性环境下线粒体总RNA的提取 | 第53-54页 |
2.2.4.4 线粒体tRNA Northern Blot探针的标记 | 第54-55页 |
2.2.4.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第55-57页 |
2.2.4.6 转膜 | 第57页 |
2.2.4.7 杂交 | 第57-58页 |
2.2.4.8 洗膜 | 第58页 |
2.2.4.9 曝光及拍摄 | 第58页 |
2.2.5 线粒体蛋白质表达水平的检测 | 第58-63页 |
2.2.5.1 143B.TK~-细胞线粒体蛋白的放射性标记 | 第59页 |
2.2.5.2 淋巴细胞线粒体蛋白的放射性记 | 第59-60页 |
2.2.5.3 梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分离线粒体蛋白质 | 第60-63页 |
2.2.6 线粒体氧耗的测定 | 第63-65页 |
2.2.6.1 完整细胞内源性总氧耗的测定 | 第63-64页 |
2.2.6.2 通透性细胞不同复合体氧耗的测定 | 第64-65页 |
2.2.7 线粒体活性氧产量的测定 | 第65-66页 |
2.2.8 线粒体呼吸链复合体酶活性的测定 | 第66-73页 |
2.2.8.1 永生化淋巴细胞线粒体的大量提取 | 第66-67页 |
2.2.8.2 线粒体蛋白浓度的测定 | 第67页 |
2.2.8.3 柠檬酸合酶活性的测定 | 第67-68页 |
2.2.8.4 线粒体呼吸链复合体Ⅰ酶活性的测定 | 第68-69页 |
2.2.8.5 线粒体呼吸链复合体Ⅱ酶活性的测定 | 第69-71页 |
2.2.8.6 线粒体呼吸链复合体Ⅲ酶活性的测定 | 第71-72页 |
2.2.8.7 线粒体呼吸链复合体Ⅳ酶活性的测定 | 第72-73页 |
2.2.9 线粒体形态的电子显微镜观察 | 第73-74页 |
2.2.10 线粒体分裂融合及自噬水平的测定 | 第74-78页 |
2.2.10.1 蛋白质样品的制备 | 第74-75页 |
2.2.10.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第75-76页 |
2.2.10.3 转膜 | 第76-77页 |
2.2.10.4 抗体杂交 | 第77页 |
2.2.10.5 显影和拍摄 | 第77-78页 |
2.2.11 线粒体苏氨酰-tRNA合成酶(TARS2)基因筛查 | 第78-87页 |
2.2.11.1 永久性类淋巴母细胞系总DNA的提取 | 第78-79页 |
2.2.11.2 TARS2基因外显子测序 | 第79-81页 |
2.2.11.3 Southern Blot检测TARS2基因有无大片段缺失或插入 | 第81-87页 |
2.2.11.4 Western Blot检测TARS2蛋白表达量 | 第87页 |
2.2.12 外显子组测序 | 第87-88页 |
第三章 实验结果 | 第88-116页 |
3.1 母系遗传冠心病家系的发现 | 第88-89页 |
3.2 母系遗传冠心病家系的临床表型 | 第89-92页 |
3.3 外周血样本的采集和永生化淋巴细胞系的建立 | 第92页 |
3.4 母系遗传冠心病的发生与线粒体tRNAThr15927G>A突变相关 | 第92-96页 |
3.5 线粒体tRNA~(Thr)15927G>A突变为同质性突变 | 第96-97页 |
3.6 线粒体tRNA~(Thr)15927G>A突变在人群中的发生频率 | 第97-99页 |
3.7 15927G>A突变影响线粒体tRNA~(Thr)二级结构 | 第99页 |
3.8 15927G>A突变降低线粒体tRNA~(Thr)稳态水平 | 第99-101页 |
3.9 15927G>A突变降低线粒体tRNA~(Thr)氨酰化水平 | 第101-102页 |
3.10 15927G>A突变降低线粒体蛋白质表达水平 | 第102-103页 |
3.11 15927G>A突变降低线粒体氧耗 | 第103-106页 |
3.12 15927G>A突变导致线粒体ROS产量增加 | 第106-107页 |
3.13 15927G>A突变对线粒体氧化呼吸链复合体酶活性的影响 | 第107-108页 |
3.14 15927G>A突变对线粒体形态和结构影响 | 第108-109页 |
3.15 15927G>A突变对线粒体分裂融合及自噬的影响 | 第109-112页 |
3.16 线粒体苏氨酰-tRNA合成酶(TARS2)基因筛查未见异常 | 第112-114页 |
3.17 外显子组测序获得候选核修饰基因 | 第114-116页 |
第四章 讨论 | 第116-121页 |
4.1 母系遗传冠心病家系的发现 | 第116-117页 |
4.2 冠心病与线粒体tRNA~(Thr)15927G>A突变相关 | 第117页 |
4.3 tRNA~(Thr)15927G>A突变可能通过导致线粒体功能障碍促进母系遗传冠心病的发生 | 第117-119页 |
4.4 线粒体tRNA~(Thr)15927G>A突变相关冠心病的发生可能有其他因素的参与 | 第119-121页 |
第五章 结论 | 第121-122页 |
第六章 研究中存在的问题与展望 | 第122-123页 |
参考文献 | 第123-139页 |
附录Ⅰ:英文缩略词表 | 第139-141页 |
附录Ⅱ:论文相关科研成果 | 第141页 |