论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 第1章 综述 | 第17-35页 |
| 1.1 引言 | 第17-19页 |
| 1.2 胰岛素抵抗和内皮细胞功能障碍 | 第19-30页 |
| 1.2.1 胰岛素和内皮细胞的关系 | 第19-25页 |
| 1.2.2 胰岛素抵抗和内皮细胞障碍之间的相互关系 | 第25-30页 |
| 1.3 吡格列酮类药物特点及和胰岛素抵抗血管内皮细胞的关系 | 第30-35页 |
| 1.3.1 TZDS类药物机理及历史 | 第30页 |
| 1.3.2 PPAR-γ的结构和生理特性 | 第30-32页 |
| 1.3.3 吡格列酮的临床应用以及可能保护内皮细胞的设想 | 第32-35页 |
| 第2章 胰岛素抵抗血管内皮细胞模型的制备 | 第35-55页 |
| 2.1 材料 | 第35-39页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第35页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第36-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第39-40页 |
| 2.2.1.1 HUVEC 复苏及细胞形态学考察 | 第39-40页 |
| 2.2.1.2 HUVEC 继代培养及观察 | 第40页 |
| 2.2.1.3 HUVEC 冻存 | 第40页 |
| 2.2.1.4 HUVEC3-4 代培养及观察 | 第40页 |
| 2.2.2 胰岛素抵抗血管内皮细胞模型的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.2.1 分组及给药 | 第40-41页 |
| 2.2.3 葡萄糖消耗实验 | 第41-42页 |
| 2.2.4 硝酸还原酶法测定 NO 含量 | 第42页 |
| 2.2.5 RT-PCR 检测 | 第42-44页 |
| 2.2.5.1 总 RNA 提取 | 第42页 |
| 2.2.5.2 逆转录合成 c-DNA | 第42-44页 |
| 2.2.6 免疫印迹 | 第44-46页 |
| 2.2.6.1 细胞的裂解 | 第44页 |
| 2.2.6.2 SDS-PAGE | 第44页 |
| 2.2.6.3 蛋白质的电转移 | 第44-46页 |
| 2.2.6.7 显色 | 第46页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 2.3.1 细胞形态 | 第46-47页 |
| 2.3.2 葡萄糖消耗实验结果 | 第47-48页 |
| 2.3.3 RT-PCR 结果 | 第48页 |
| 2.3.4 WESTERN-BLOT 结果 | 第48-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 2.4.1 模型的选择 | 第50-51页 |
| 2.4.2 葡萄糖消耗实验的意义 | 第51页 |
| 2.4.3 胰岛素抵抗的标志蛋白的选择 | 第51-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-55页 |
| 2.5.1 胰岛素抵抗时可导致对葡萄糖的消耗能力的减弱，损伤 IRS-1、PPAR-γ的活性和影响其表达 | 第53页 |
| 2.5.2 成功建立了胰岛素抵抗模型 | 第53-55页 |
| 第3章 吡格列酮对胰岛素抵抗血管内皮细胞保护作用的研究 | 第55-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第55-57页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第55页 |
| 3.1.2 实验药物 | 第55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55-56页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第56页 |
| 3.1.5 主要溶液配制 | 第56-57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-61页 |
| 3.2.1 胰岛素抵抗血管内皮细胞模型的建立 | 第57页 |
| 3.2.2 分组及给药 | 第57页 |
| 3.2.3 细胞毒性检测（MTT 法） | 第57页 |
| 3.2.4 Annexin V-FITC 和 PI 双染色法 | 第57-58页 |
| 3.2.5 caspase-3 的比色检测 | 第58页 |
| 3.2.6 免疫印迹 | 第58-61页 |
| 3.2.6.1 细胞的裂解 | 第58-59页 |
| 3.2.6.2 SDS-PAGE | 第59页 |
| 3.2.6.3 蛋白质的电转移 | 第59-60页 |
| 3.2.6.4 封闭 | 第60页 |
| 3.2.6.5 与第一抗体反应 | 第60页 |
| 3.2.6.6 第二抗体反应 | 第60页 |
| 3.2.6.7 显色 | 第60-61页 |
| 3.2.7 硝酸还原酶法测定 NO 含量 | 第61页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第61页 |
| 3.3 结果 | 第61-65页 |
| 3.3.1 吡格列酮对细胞活性的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.2 Annexin V-FITC 和 PI 双染色法观察细胞凋亡的情况 | 第62-63页 |
| 3.3.3 Caspase-3 活性检查 | 第63-64页 |
| 3.3.4 观察吡格列酮对 HUVEC 的作用 | 第64-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-67页 |
| 3.4.1 吡格列酮对胰岛素抵抗血管内皮细胞活性的影响 | 第65页 |
| 3.4.2 利用 Annexin V-FITC 和 PI 双染色法观察细胞凋亡的情况 | 第65-66页 |
| 3.4.3 Caspase-3 在吡格列酮作用胰岛素抵抗血管内皮细胞中的表现50 | 第66页 |
| 3.4.4 吡格列酮对胰岛素抵抗血管内皮细胞表达 eNOS 和 NO 的影响 | 第66-67页 |
| 3.5 小结 | 第67-69页 |
| 3.5.1 吡格列酮对胰岛素抵抗血管内皮细胞具有保护作用 | 第67页 |
| 3.5.2 吡格列酮可能会通过上调 eNOS 和 NO 的表达起到对内皮细胞的保护作用 | 第67-69页 |
| 第4章 吡格列酮对胰岛素抵抗血管内皮细胞保护机制的研究 | 第69-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-71页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第69页 |
| 4.1.2 实验药物 | 第69页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第69-70页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第70页 |
| 4.1.5 主要溶液配制 | 第70-71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71页 |
| 4.2.1 胰岛素抵抗血管内皮细胞模型的建立 | 第71页 |
| 4.2.2 分组及给药 | 第71页 |
| 4.3 RT-PCR 检测 | 第71-73页 |
| 4.3.1 总 RNA 提取 | 第71页 |
| 4.3.2 逆转录合成 c-DNA | 第71-72页 |
| 4.3.3 引物设计 | 第72页 |
| 4.3.4 靶基因 Real time-PCR 检测 | 第72-73页 |
| 4.4 免疫印迹 | 第73-76页 |
| 4.4.1 细胞的裂解 | 第73页 |
| 4.4.2 SDS-PAGE | 第73-74页 |
| 4.4.3 蛋白质的电转移 | 第74页 |
| 4.4.4 封闭 | 第74页 |
| 4.4.5 与第一抗体反应 | 第74-75页 |
| 4.4.6 第二抗体反应 | 第75页 |
| 4.4.7 显色 | 第75-76页 |
| 4.5 统计学处理 | 第76页 |
| 4.6 结果 | 第76-78页 |
| 4.6.1 RT-PCR 法检测吡格列酮作用后 IRS-1 mRNA、PPAR-γ mRNA 表达 | 第76-77页 |
| 4.6.2 Western-Blot 法检测吡格列酮作用后 IRS-1、PPAR-γ蛋白的表达 | 第77页 |
| 4.6.3 RT-PCR 法检测吡格列酮作用后 PI3K mRNA，Akt mRNA 的表达 | 第77-78页 |
| 4.6.4 Rt-PCR 法检测吡格列酮作用后 PI3K、Akt 蛋白的表达 | 第78页 |
| 4.7 讨论 | 第78-80页 |
| 4.8 小结 | 第80-81页 |
| 第5章 总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-99页 |
| 作者简介及攻读学位期间发表的学术论文 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
