论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一篇 文献回顾 | 第14-36页 |
| 第1章 AMD 的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.1 AMD 概论 | 第14页 |
| 1.2 AMD 流行病学研究 | 第14-15页 |
| 1.3 AMD 的发病机制 | 第15-17页 |
| 1.3.1 AMD 的病理机制 | 第15页 |
| 1.3.2 AMD 的病因机制 | 第15-17页 |
| 1.4 AMD 的治疗 | 第17-20页 |
| 1.4.1 物理治疗 | 第17页 |
| 1.4.2 药物治疗 | 第17-19页 |
| 1.4.2.1 皮质类固醇 | 第17页 |
| 1.4.2.2 抗血管内皮生长因子 | 第17-18页 |
| 1.4.2.4 中医药治疗 | 第18-19页 |
| 1.4.3 手术治疗 | 第19-20页 |
| 第2章 Keap1/Nrf2/ARE 信号通路抗氧化应激在 AMD 中保护作用 | 第20-26页 |
| 2.1 氧化应激的简介 | 第20页 |
| 2.2 Keap1/Nrf2/ARE 的组成与功能 | 第20-21页 |
| 2.2.1 Nrf2 | 第20-21页 |
| 2.2.2 Keap1 | 第21页 |
| 2.2.3 ARE | 第21页 |
| 2.3 Nrf2/ARE 信号通路的激活 | 第21-22页 |
| 2.4 Nrf2/ARE 调控下游的抗氧化基因 | 第22-23页 |
| 2.5 氧化应激与 Keap1/Nrf2/ARE 信号通路 | 第23页 |
| 2.6 Nrf2/ARE 在 AMD 疾病中的作用 | 第23-26页 |
| 第3章 氧化应激激活 Txnip/NLRP3 与 NF‐κB/MAPK 引发炎症反应 | 第26-32页 |
| 3.1 Txnip/NLRP3 与氧化应激 | 第26-28页 |
| 3.1.1 Txnip 蛋白及功能 | 第26页 |
| 3.1.2 NLRP3 蛋白组成及功能 | 第26-27页 |
| 3.1.3 氧化应激与 Txnip/NLRP3 的关系 | 第27-28页 |
| 3.2 NF-κB/MAPK 与氧化应激 | 第28-30页 |
| 3.2.1 NF‐κB 经典炎性信号通路 | 第28页 |
| 3.2.2 MAPK 经典炎性信号通路 | 第28-29页 |
| 3.2.3 氧化应激对 NF‐κB/MAPK 信号通路的激活 | 第29-30页 |
| 3.3 Txnip/NLRP3 与 NF-κB/MAPK 激活在 AMD 中的作用 | 第30-32页 |
| 第4章 橙皮素的药理作用研究进展 | 第32-36页 |
| 4.1 橙皮素的化学结构 | 第32页 |
| 4.2 橙皮素的理化性质 | 第32页 |
| 4.3 橙皮素的药理作用 | 第32-33页 |
| 4.4 注意事项 | 第33页 |
| 4.5 结语 | 第33-36页 |
| 第二篇 实验部分 | 第36-102页 |
| 第1章 橙皮素在 RAW 264.7 细胞中抗氧化抗炎的研究 | 第36-60页 |
| 1.1 前言 | 第36-37页 |
| 1.2 材料 | 第37-42页 |
| 1.2.1 实验细胞 | 第37页 |
| 1.2.2 仪器 | 第37页 |
| 1.2.3 药品和试剂 | 第37-39页 |
| 1.2.4 实验所需试剂的配制 | 第39-42页 |
| 1.3 方法 | 第42-49页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第42-43页 |
| 1.3.2 MTT 法检测 RAW 264.7 细胞活性 | 第43-44页 |
| 1.3.3 细胞内 ROS 含量的测定 | 第44页 |
| 1.3.4 ELISA 检测炎性因子 TNF‐α、IL‐1β和 IL‐6 的产生 | 第44-45页 |
| 1.3.5 RT‐qPCR 检测抗氧化因子 HO‐1、NQO1 和 GST 以及炎性介质 COX‐ 2 和 iNOS 的 mRNA 的表达 | 第45-47页 |
| 1.3.6 Western 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第47-49页 |
| 1.3.7 数据统计与分析 | 第49页 |
| 1.4 结果 | 第49-57页 |
| 1.4.1 橙皮素对 RAW 264.7 细胞活性的影响 | 第49-51页 |
| 1.4.2 橙皮素对 t‐BHP 诱导的 RAW 264.7 细胞 ROS 产生的影响 | 第51页 |
| 1.4.3 橙皮素对 LPS 诱导的 RAW 264.7 细胞炎性因子产生的影响 | 第51-52页 |
| 1.4.4 橙皮素对 LPS 诱导的 COX2 和 iNOS 表达的抑制作用的影响 | 第52-53页 |
| 1.4.5 橙皮素对 Nrf2 调控的抗氧化基因的激活作用的影响 | 第53-54页 |
| 1.4.6 橙皮素对 Keap1/Nrf2/ARE 抗氧化信号通路的影响 | 第54-55页 |
| 1.4.7 橙皮素对 LPS 激活的 MAPK 和 NF‐κB 信号通路的影响 | 第55-57页 |
| 1.5 讨论 | 第57-58页 |
| 1.6 小结 | 第58-60页 |
| 第2章 橙皮素对 H2O2诱导的 ARPE 19 细胞损伤保护作用的研究 | 第60-80页 |
| 2.1 前言 | 第60-61页 |
| 2.2 材料 | 第61页 |
| 2.2.1 实验细胞 | 第61页 |
| 2.2.2 仪器 | 第61页 |
| 2.2.3 药品和试剂 | 第61页 |
| 2.2.4 实验所需试剂的配制：同实验部分第 1 章 | 第61页 |
| 2.3 方法 | 第61-68页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.3.2 MTT 法检测 ARPE‐19 细胞活性 | 第61-62页 |
| 2.3.3 细胞内 ROS 含量的测定 | 第62-63页 |
| 2.3.4 Hoechst 33342/PI 双荧光染色法检测细胞凋亡 | 第63页 |
| 2.3.5 ELISA 检测炎性因子 TNF‐α、IL‐1β、IL‐18 和 IL‐6 的产生 | 第63-64页 |
| 2.3.6 RT‐qPCR 检测抗氧化因子 HO‐1、GCLM 和 GCLC 的 mRNA 的表达 | 第64-65页 |
| 2.3.7 GSH 活性测定 | 第65-66页 |
| 2.3.8 SOD 活性测定 | 第66-67页 |
| 2.3.9 MDA 含量测定 | 第67-68页 |
| 2.3.10 Western 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第68页 |
| 2.3.11 数据统计与分析 | 第68页 |
| 2.4 结果 | 第68-75页 |
| 2.4.1 橙皮素对 ARPE‐19 细胞活性的影响 | 第68-69页 |
| 2.4.2 橙皮素对 H2O2诱导的 ARPE‐19 细胞凋亡和坏死的影响 | 第69-70页 |
| 2.4.3 橙皮素对 H2O2诱导的 ARPE‐19 细胞 ROS 产生的影响 | 第70-71页 |
| 2.4.4 橙皮素对 H2O2诱导的 ARPE‐19 细胞炎性因子的影响 | 第71页 |
| 2.4.5 橙皮素对 H2O2激活的 MAPK 和 NF‐κB 信号通路的影响 | 第71-72页 |
| 2.4.6 橙皮素对 HO‐1、GCLC 和 GCLM 的 mRNA 表达激活作用的影响 | 第72-73页 |
| 2.4.7 橙皮素对 SOD、GSH 活性和 MDA 含量的影响 | 第73-74页 |
| 2.4.8 SnPP 对橙皮素抑制 H2O2损伤细胞的逆转作用 | 第74-75页 |
| 2.5 讨论 | 第75-77页 |
| 2.6 小结 | 第77-80页 |
| 第3章 橙皮素对 H2O2诱导的 ARPE‐19 细胞保护作用分子机制的研究 | 第80-100页 |
| 3.1 前言 | 第80-81页 |
| 3.2 材料 | 第81-82页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第81页 |
| 3.2.2 实验动物 | 第81页 |
| 3.2.3 药品和试剂 | 第81-82页 |
| 3.2.4 实验所需试剂的配制：同实验部分第 1 章 | 第82页 |
| 3.3 方法 | 第82-87页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第82页 |
| 3.3.2 Nrf2‐siRNA 转染 | 第82页 |
| 3.3.3 ARE 活性检测 | 第82-83页 |
| 3.3.4 Western 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第83-84页 |
| 3.3.5 co‐IP 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第84-85页 |
| 3.3.6 RT‐qPCR 检测 Txnip、Trx、NLRP3、Caspase1、ASC、IL‐18 和 IL‐1β的 mRNA 的表达 | 第85-86页 |
| 3.3.7 原代小鼠视网膜上皮细胞（RPE）提取和培养 | 第86页 |
| 3.3.8 台盼蓝对原代 RPE 死细胞染色 | 第86页 |
| 3.3.9 数据统计与分析 | 第86-87页 |
| 3.4 结果 | 第87-96页 |
| 3.4.1 橙皮素在 ARPE‐19 细胞中对 HO‐1 和 Trx 激活的影响 | 第87-88页 |
| 3.4.2 在 ARPE-19 细胞中橙皮素对 Keap1/Nrf2/ARE 抗氧化信号通路的影响 | 第88-89页 |
| 3.4.3 在 ARPE‐19 细胞中橙皮素能增加 Nrf2 调控的 HO‐1 蛋白表达 | 第89页 |
| 3.4.4 不同浓度的 H2O2对 Nrf2 、HO‐1、Txnip、NLRP3 和 Caspase‐1 蛋白表达的影响 | 第89-90页 |
| 3.4.5 橙皮素对 HO‐1、TRX、Txnip、NLRP3、Caspase1、ASC、IL‐1β和 IL‐18 的 mRNA 表达影响 | 第90-92页 |
| 3.4.6 橙皮素对 HO‐1、NLRP3、Caspase1、ASC 和 IL‐1β蛋白表达影响 | 第92页 |
| 3.4.7 橙皮素对 NLRP3 炎性小体间蛋白表达相互作用的影响 | 第92-93页 |
| 3.4.8 橙皮素对 Txnip 蛋白表达以及 Txnip 与 NLRP3 之间相互作用的影响 | 第93-94页 |
| 3.4.9 橙皮素对 Txnip 与 Trx 之间的蛋白表达相互作用的影响 | 第94-95页 |
| 3.4.10 橙皮素在原代 RPE 细胞中诱导 Nrf2/HO‐1 的蛋白表达并抑制 H2O2刺激的损伤 | 第95-96页 |
| 3.5 讨论 | 第96-98页 |
| 3.6 小结 | 第98-100页 |
| 第4章 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-124页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
